藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白抑制肌肉生长功能的研究

本试验旨在检测注射藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白后对小鼠的影响,研究肌肉抑制素的作用,为今后生产实践提供参考。本试验对50只小白鼠(雌、雄鼠各25只)进行分组,随机将雌雄鼠分为2组,其中对照组注射生理盐水,试验组注射肌肉抑制素蛋白,每隔1 d称重,试验期共3个月。试验期结束后,处死小鼠,并取小腿肌肉样本,利用石蜡切片法和浸渍离析法,测定小鼠肌纤维直径。试验结果表明,藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白对小鼠肌肉生长早期(37~45日龄)具有抑制作用。当小鼠体内对藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白产生抗体后,对小鼠肌肉生长的抑制作用逐渐减弱。藏绵羊肌肉抑制素C-端重组蛋白可使小鼠腿肌肌纤维横切面积增加、腿肌肌纤维直径增加。     

mC3d3-DINHα(1～32)基因免疫对大鼠卵泡发育和生殖激素的影响

选择32只60日龄雌性性成熟大鼠分为4组,分别肌肉注射pcDNA-DPPISS-DINH(试验组1) 50 μg,pcDNA-DPPISS-DINH-mC3d3 (试验组2) 50 μg,空载体pcDNA3.1 (对照组1) 50 μg,生理盐水(对照组2)1 mL.首次免疫20、40 d后各组分别同剂量同样免疫程序加强免疫注射1次.结果发现,试验1和2组卵巢的重量都显著高于对照组1和2,但试验1和2组之间的差异不显著(P＞0.05);试验2组卵巢成熟卵泡发育个数和FSH的浓度显著高于试验1组和对照1和2组(P＜0.05);加强免疫第40天,试验1、2组的E2的浓度分别显著高于本试验组免疫前第0天,免疫后第20天的激素浓度;试验组与对照组在各个免疫试验时间LH的浓度在统计上差异不显著(P＞0.05).结果证明,应用重组抑制素真核表达质粒pcDNA-DPPISS-DINH-mC3d3(试验组2)免疫动物可以促进大鼠卵泡的发育,可提高血浆FSH、E2水平,为抑制素基因免疫大动物提供了试验依据.     

内毒素对雌性小鼠繁殖性能指标的影响

试验以雌性小鼠为试验模型,经脂多糖(LPS)灌胃检测母鼠妊娠后不同组织中LPS、sIgA、E₂、P₄、LH和FSH的含量。结果表明,母鼠经LPS灌胃,分娩后5 d对照组结肠、回肠和子宫的LPS和sIgA含量与染毒组无显著性差异(P>0.05);染毒组仔鼠肠道的LPS含量显著高于对照组(P<0.05)。分娩后15 d,对照组母鼠结肠、回肠和子宫中的LPS含量显著高于染毒组(P<0.05);染毒组仔鼠肠道LPS含量显著高于对照组(P<0.05)。分娩后15 d,对照组母鼠结肠和回肠的sIgA含量与染毒组无显著性差异;对照组母鼠子宫的sIgA含量显著高于染毒组(P<0.05);染毒组仔鼠肠道的sIgA含量显著高于对照组(P<0.05)。随后记录母鼠的繁殖性能指标,染毒组母鼠平均产仔数与对照组无显著性差异;但染毒组母鼠出生后5 d和15 d仔鼠存活率显著低于对照组;同时检测的生殖激素水平发现,染毒组母鼠血液FSH与LH的含量显著低于对照组。说明内毒素干预妊娠母鼠后,母鼠回肠、结肠和子宫组织中的内毒素可经胎盘屏障传递...     

醋酸铅对母鼠生殖与胚胎发育影响

将420只体质量为(15.32±2.01)g的雌性昆明系小鼠随机分为5个处理组和1个对照组,每组设7个重复,每个重复10只。各处理组分别腹腔按体质量注射10、15、20、25、30mg/kg的醋酸铅溶液,对照组注射等体积的灭菌生理盐水,每隔2d注射并称重1次,共注射10次,期间记录小鼠体质量及临床表现。当小鼠体质量达到25g以上时,分批对各试验组和对照组进行超排处理,腹腔注射10IU马绒毛膜促性腺激素(PMSG),47h后注射10IU人绒毛膜促性腺激素(hCG),并与公鼠合笼。合笼后87~96h内颈椎脱臼处死小鼠,观察卵巢、子宫形态,并统计胚胎数,同时制作卵巢、子宫石蜡切片,观察其病理组织学变化,研究醋酸铅对雌性小鼠卵巢、子宫组织结构及早期胚胎发育的影响。结果显示:(1)当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,可明显抑制小鼠体质量的增长,随着染毒剂量的增加,作用时间的延长,小鼠体质量增加明显趋缓,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01);(2)染铅组母鼠早期胚胎发育受到显著影响,主要表现为回收胚胎总数以及受精卵发育到桑椹胚和囊胚的总数均显著低于对照组(P0.05),而各染铅组退化胚、延迟胚数和未受精卵总数显著高于对照组(P0.05);(3)染铅组卵巢中的初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡数量明显低于对照组,而原始卵泡、闭锁卵泡数量明显高于对照组。(4)染铅组小鼠卵巢和子宫形态发生明显畸形,当醋酸铅染毒剂量≥20mg/kg时,与对照组相比,差异显著或极显著(P0.05,P0.01)。且上述变化均呈明显的剂量一时间效应。研究结果表明,当醋酸铅暴露剂量≥20mg/kg时,可对小鼠生长发育具有明显抑制作用,同时使母鼠生殖器官卵巢和子宫的结构造成严重损害,并影响其生殖功能与早期胚胎发育。     

猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母的构建及其对小鼠的免疫协同效应

以2A自剪接技术构建猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽(FBC)共表达重组毕赤酵母,为研究重组酵母对小鼠体内外的免疫协同效应,首先采用猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验研究重组毕赤酵母的体外生物学活性;再以发酵的重组酵母菌液进行小鼠灌胃试验,在试验的28d用致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行腹腔攻毒,每周采血检测小鼠的生长和免疫功能变化。体外试验结果显示,试验组比对照组显著刺激猪淋巴细胞增殖;明显抑制大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、金黄色葡萄球菌标准菌和金黄色葡萄球菌耐药菌的生长(P0.05)。小鼠灌胃试验结果表明,试验组小鼠外周血的白细胞、Th和Tc细胞含量显著多于对照组;试验组tlrs(tlr-1,4,6,9),il-1,il-2,il-4,il-6,il-7,il-15,il-23和cd62l基因的表达明显高于对照组;试验组血清中的IgG、IgG1和IgG2a的含量比对照组显著增加。此外,试验组小鼠的体质量比对照组明显增加。攻毒后试验组80%的小鼠存活,而对照组小鼠则有明显的炎症及临床症状,最后全部死于感染,这表明试验组的存活率显著高于对照组(P0.05)。白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母能够有效提高小鼠免疫功能,为探索研制增强动物免疫机能的安全高效的免疫调节剂提供新途径。     

腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸对母鼠发情率、早期胚胎及胚子数的影响

为研究腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对母鼠发情率和早期胚胎及胚子数的影响,试验选取40只昆明小鼠[(26±1.37)g],随机分为对照组和试验组(每组各20只),对照组腹腔注射0.2mL生理盐水,试验组腹腔注射0.2mLNMDA溶液,采用棉签蘸取母鼠阴道黏液,涂片后用苏木精(HE)染色,判定母鼠发情情况。随后在发情母鼠与公鼠合笼后第3天,每组随机取10只颈椎脱臼法处死小鼠,冲胚后在体视镜下捡胚观察胚胎个数;第9天处死剩余小鼠,取出子宫统计胚子数。试验结果显示,腹腔注射NMDA试验组母鼠发情率、胚胎数和胚子数分别比对照组提高28.57%、18.18%和12.94%。该试验表明腹腔注射NMDA可促进母鼠的发情,提高早期胚胎和胚子数,为NMDA在动物繁殖中的应用提供了理论基础。     

天山雪莲醇提液对连续光照雌性小鼠生殖激素水平及离体子宫活动能力的影响

为初步探讨天山雪莲醇提液对雌性小鼠血液生殖激素及离体子宫活动能力的影响,选择性周期正常的小鼠随机分为试验组和对照组,实施连续光照3周。试验组小鼠每天灌胃雪莲乙醇提取液0.5mL,对照组每天同法灌胃9g/L的NaCl 0.5mL。3周后小鼠眼眶采血,分离血清,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的变化;处死小鼠,获得离体子宫,用Powerlab系统观察雪莲醇提液对小鼠离体子宫活动能力的影响。结果发现,试验组小鼠的E2、FSH和LH水平都高于对照组,差异显著(P0.05);试验组小鼠子宫活动力明显好于对照组,差异显著(P0.05)。表明适量雪莲醇提液可以增强雌性小鼠离体子宫平滑肌的活动能力,并可明显影响小鼠血清E2、FSH和LH的水平。     

丙酸铬对生长母鼠生长性能、肠道形态、血清生化指标和免疫功能的影响

本试验旨在研究日粮中添加丙酸铬对断奶雌性SD大鼠生长性能、血清生化指标和肠黏膜指标的影响。选用体重(55.68±3.19)g的断奶雌性SD大鼠36只,预试10 d后,按照体重无差异原则随机分为3个处理组,每组6个重复(笼),每个重复(笼)2只大鼠。对照组饲喂基础饲粮(铬含量为0.14 mg/kg),试验组在基础饲粮中分别添加0.2、1.0 mg/kg铬(铬源于丙酸铬),试验期9周。结果表明:添加丙酸铬对母鼠生长性能、器官指数以及肝脏铬含量、空肠前端肠道形态、回肠肠道形态均无显著影响;0.2 mg/kg铬组的十二指肠绒毛高度/隐窝深度较对照组显著提高;丙酸铬组的空肠后端绒毛高度/隐窝深度较对照组极显著提高,但母鼠血清生化指标和免疫功能均无显著变化。结果显示,在断奶雌鼠饲粮中添加丙酸铬可以改善肠道形态,对生长性能、血清生化指标和免疫功能无显著影响。     

抑制素基因免疫对京白鸡产蛋性能的影响

120只380 d京白鸡随机分为4组,分别腿部肌肉注射0、50、100、150 μg抑制素真核表达质粒pcISI,20 d后加强免疫1次.ELISA检测抗抑制素抗体水平,观察产蛋量,并进行鸡蛋品质测定.免疫4个月后全部捕杀,统计各级卵泡数.结果表明,抑制素基因加强免疫后抗体水平显著升高(P<0.05),3个剂量组间差异不显著(P>0.05).试验组全期产蛋量极显著高于对照组(P<0.01),大白泡和小白泡比对照组显著增多(P<0.05),优势卵泡、小黄泡和鸡蛋品质与对照组差异不显著(P>0.05).表明抑制素基因免疫京白鸡可产生抗抑制素抗体,并能提高京白鸡的产蛋性能.     

芸薹子对母鼠及其子鼠生产性能和肠道菌群结构的影响

本试验采用16S-rRNA测序分析泌乳期摄食芸薹子后母鼠及其子鼠盲肠微生物菌群结构和多样性差异，并检测母鼠泌乳性能、母鼠及其子代免疫性能和氧化性能，分析探讨现代芸薹子的药效机理。选取产仔时间前后相差不超过1 d、体重（55.00±2.00）g的产后母鼠20只，并调整至每只母鼠带仔鼠10只，随机分为试验组和对照组，即试验组、对照组分别为10只分娩母鼠及10只仔鼠。试验日粮在基础饲粮中加入5%的菜籽粉，基础日粮用同等能量玉米粉代替。结果显示：（1）芸薹子对母鼠分娩一周内的泌乳量没有显著影响（P > 0.05），但显著提高了小鼠7、14、21日龄均重（P ＜ 0.05），分别提高了14.84%、15.94%、 17.36%，分娩1周内小鼠的日均增重提高了23.58%（P ＜ 0.01）。（2）泌乳鼠摄食芸薹子后，母鼠乳腺免疫球蛋白IgG、总蛋白、总氨基酸、MDA含量无显著差异，但乳腺溶菌酶含量提高了54.46%（P ＜ 0.05），母鼠及子鼠血清中IgG含量降低了10.86%、12.46%（P ＜ 0.05）。（3）泌乳鼠摄食芸薹子后，母鼠及其子鼠盲肠乳杆菌属丰度下降、普氏菌属和拟杆菌属丰度增加。结果提示，泌乳期摄食一定量芸薹子可改变母鼠和子鼠肠道菌群结构，提高母鼠泌乳性能，但对母鼠和子鼠的免疫性能有抑制作用。 [关键词] 芸薹子|泌乳母鼠|肠道菌群结构|泌乳性能|免疫性能     

肌肉生长抑制素在小鼠不同发育阶段心肌组织中的表达

本试验旨在探究肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因在小鼠不同发育阶段心肌组织中的表达情况，分别选取幼年（7日龄）、性成熟（21~28日龄）、体成熟（42~56日龄）和老年（84日龄以上）4个发育阶段的健康小鼠（各3只）为研究对象，采用实时荧光定量PCR、HE染色、免疫组织化学等方法研究小鼠不同发育时期MSTN基因在心肌组织中的表达及不同时期心肌组织的发育。实时荧光定量PCR结果显示，MSTN基因在小鼠不同发育阶段心肌组织中均有表达，且其在小鼠老年时期的表达量最高，体成熟时期的表达量最低；幼年小鼠和性成熟小鼠心肌组织中MSTN基因表达水平显著低于老年小鼠（P<0.05），而体成熟小鼠则极显著性低于老年小鼠（P<0.01）。HE染色结果显示，小鼠心肌细胞核及肌纤维的生长在不同发育时期明显不同，其中幼年时期的细胞核最多，肌纤维排列相对较紧密，而在性成熟、体成熟、老年时期心肌的发育指标依次降低。免疫组织化学结果显示，MSTN基因主要在心肌细胞核中表达，其各个时期表达量与实时荧光定量PCR的结果相符合。     

蜂毒素—死亡素重组抗菌肽的小鼠毒性试验

本试验旨在探索蜂毒素—死亡素重组抗菌肽（MT-W）对昆明小鼠的毒性影响。试验通过小鼠口服急性毒性试验和口服生物利用度试验,研究了MT-W对小鼠主要脏器的影响,并检测了血液中碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等生化指标,并对MT-W的体内吸收情况进行了检测。结果显示,MT-W在试验设定浓度下,对试验小鼠的体重、器官/体重比率没有显著影响,血液生化指标与对照组也无统计学差异;在按照50 mg/kg体重给实验小鼠灌服MT-W溶液后,在血浆中未检测到MT-W。研究表明,MT-W对小鼠没有明显毒副作用,MT-W在口服后未被有效吸收。     

靶向绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒表达载体的构建及活性验证

旨在构建并包装打靶绵羊MSTN基因的位点特异性锌指核酸酶腺病毒表达载体,以借助腺病毒的高转染效率和非整合性以及锌指核酸酶的高效性和特异性实现对绵羊MSTN基因的敲除。本研究利用PCR扩增T2A序列和锌指核酸酶异源二聚体序列,测序鉴定后依次克隆至pAdTrack-CMV,得到pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体,将之与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转染至BJ5183菌株进行同源重组,以构建pAdEasy-ZFNL-T2A-ZFNR表达载体。然后用上述表达载体转染HEK293细胞进行重组腺病毒的包装,将PCR鉴定阳性的病毒进行扩增并测定病毒滴度。侵染绵羊胎儿成纤维细胞检测重组腺病毒对靶细胞的侵染能力,并用Western blot方法检测绵羊胎儿成纤维细胞中ZFN的表达,进而在细胞水平验证ZFN的活性。结果,包装得到的锌指核酸酶重组腺病毒能够高效侵染绵羊胎儿成纤维细胞并表达ZFN,腺病毒介导的ZFN可识别并切割绵羊MSTN基因。本研究成功获得靶向识别并切割绵羊MSTN基因的锌指核酸酶重组腺病毒。     

FoxO1突变体转基因小鼠的建立

为探究FoxO1对瘦素信号传导的调节机制，本研究构建了重组质粒pEF1α-myc-FoxO1ΔDBD，并将其转染于293Rb细胞，应用Western blotting检测突变体FoxO1ΔDBD的表达；然后采用DNA原核显微注射的方法制备含有突变体FoxO1ΔDBD的转基因小鼠模型，以鼠尾基因组DNA为模板，PCR扩增鉴定基因型；采用实时荧光定量PCR和免疫共沉淀方法检测FoxO1ΔDBD在转录水平和翻译水平的表达，并对FoxO1ΔDBD转基因鼠进行表型分析。结果显示，试验成功构建了重组质粒pEF1α-myc-FoxO1ΔDBD，并在293Rb细胞中检测到了突变体FoxO1ΔDBD的表达，继而获得了10只首建鼠，建立了10个繁育系。试验建立了高G-C含量PCR扩增产物的基因型鉴定方法，并成功地应用于转基因小鼠中。实时荧光定量PCR和免疫共沉淀结果显示，在转录水平和翻译水平上成功地检测出FoxO1ΔDBD的表达，表型分析结果显示，转基因小鼠体重显著低于野生型小鼠（P < 0.05），提示瘦素的作用增强。综上所述，本试验成功构建了FoxO1ΔDBD转基因小鼠，为探究FoxO1对瘦素信号传导的调节机制提供研究模型。     

高邮鸭肌肉生长抑制素基因(MSTN)5'调控区多态性与生长及腹脂率的关联分析

肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因在发育和成熟的骨骼肌中特异表达,对肌肉具有负调控作用。采用PCR-SSCP技术检测了3个不同高邮鸭群体和1个绍鸭群体MSTN5'的单核苷酸多态性,并与0及3～10周龄体重和腹脂率进行相关性分析。结果:在MSTN基因5'调控区的1 046 bp处检测到C→G的突变。在4个鸭群中,均检测到3种基因型(CC、CG和GG基因型),且都以C等位基因为优势等位基因。最小二乘法分析结果表明,不同基因型对试验的4个群体鸭周龄生长无显著影响;高邮鸭3个群体间平均腹脂率无显著差异,但绍鸭腹脂率均极显著低于3个高邮鸭群体(P<0.01);不同基因型对高邮鸭3个不同群体的腹脂率均有显著影响,GG型高邮鸭腹脂率显著高于CG型和CC型(P<0.05)。就5'调控区而言,MSTN基因作为影响腹脂率的候选基因有待于进一步的研究。     

绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达

Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138 bp的转录产物,并用Western blotting检测到78 ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。     

饲料中添加肌肉生长抑制素抑制肽对海鲈生长性能、体组成、血清生化指标及肝脏与血清免疫指标的影响

本试验旨在研究饲料中添加肌肉生长抑制素抑制肽对海鲈生长性能、体组成、血清生化指标及肝脏与血清免疫指标的影响。以初始均重为(9.05±0.05)g的海鲈幼鱼为试验动物,暂养1周后,挑选规格一致的健康试验鱼480尾,随机分为4组,每组4个重复(水族箱),每个重复放养30尾鱼。4组试验鱼分别投喂肌肉生长抑制素抑制肽添加水平为0(对照)、0.25%、0.50%、0.75%的试验饲料135 d。结果显示:1)0.50%组的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和成活率(SR)均显著高于对照组(P0.05),各添加组的饲料系数(FCR)均显著低于对照组(P0.05),且以0.50%组的FCR最低;2)各添加组的背肌粗脂肪含量均显著低于对照组(P0.05),0.50%组的背肌粗蛋白质含量显著高于对照组(P0.05),全鱼的水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和背肌的水分、粗灰分含量在各组之间没有显著差异(P0.05);3)0.25%组的血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和总胆固醇(TC)含量显著低于其他各组(P0.05),血清甘油三酯(TG)含量各组间不存在显著差异(P0.05);4)0.50%和0.75%组的血清碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于对照组(P0.05),0.25%和0.50%组的肝脏溶菌酶(LZM)活性显著高于对照组(P0.05),肝脏与血清的总抗氧化能力(T-AOC)和肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性各组间不存在显著差异(P0.05)。综上所述,在饲料中添加肌肉生长抑制素抑制肽能够促进海鲈的生长并提高免疫能力,本试验条件下最适添加水平为0.50%。     

MSTN基因内含子2多态性与山羊体重性状相关研究

以波尔山羊以及波尔山羊与唐山奶山羊的杂交后代共计102只山羊为材料，根据山羊MSTN基因序列（GenBank登录号：DQ167575）设计一对引物，用PCR—RFLP法进行多态性分析。对该片段测序发现共有2处突变。对突变位点产生的不同基因型与体重进行分析表明：AA型个体的断乳重显著高于BB型和AB型（P〈0.05）。CC型个体的初生重显著高于CD型（P〈0.05）。由此初步推断MSTN基因可能是影响山羊体重性状的主基因或与主基因相连锁，可以用该位点对山羊体重性状进行标记辅助选择。     

两个家兔品种肌肉MyHC类型及肌肉生成抑制素和肌细胞生成素基因表达的比较

本研究的主要目的是比较体重不同的两个家兔品种背最长肌的肌纤维类型(肌球蛋白重链,MyHC)以及肌肉生成抑制素(MSTN)和肌细胞生成素(MyoG)的表达水平。采集84日龄的齐兴肉兔(n=12)和齐卡大型新西兰白兔(n=12)的背最长肌,提取RNA,实时荧光定量PCR分析显示,背最长肌中存在4种肌纤维类型,其中MyHC-1和MyHC-2D是主要类型。在两个家兔品种的背最长肌中,MyHC类型的比例未见显著差异。此外,两个家兔品种背最长肌中MSTN和MyoG的mRNA水平无显著差异。这些结果提示,MyHC类型、MSTN和MyoG表达水平与这两个家兔品种84日龄的体重差异可能没有直接的关联。