H9亚型禽流感病毒Taqman探针荧光定量PCR检测方法的建立

禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）为单股负链RNA病毒,由8个独立的RNA节段组成,根据其致病性强弱,可分为高致病性AIV和温和型AIV。其中H9N2亚型AIV为中低致病力毒株,分布广泛,传播迅速,临床上可引起轻微呼吸道及产蛋下降等症状,同时能造成宿主的免疫抑制而继发感染其他病原微生物,     

禽流感的预防与控制策略

禽流感（AI）是一种可以由温和感染鸡的呼吸道开始，到产生急性感染而造成可高达100％死亡率的严重疾病。AI的病原是禽流感病毒（AIV），在病毒学分类上属于A型流感病毒，其特征是在病毒粒子的表面具有血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）糖蛋白。HA有16种亚型，NA也有10种亚型，其中大多数亚型AIV引起的无症状带毒（隐性感染）表现为亚临床症状及低（或无）死亡率的AI则称作温和型禽流感（Mildly Pathogenic AI，MPAI）或低致病性禽流感（Lowlv Pathogenic AI，LPAI）。     

浅谈禽流感的特点及综合防制

禽流感（AI）是由A型流感病毒（AIV引起的一种禽类的感染和／或疾病的综合症。由于AIV感染动物的种类很多，特别是飞禽、候鸟对远距离、大范围传播病毒起重要作用，使AI能够发生于世界上许多国家。尽管绝大多数AIV感染都是温和的，甚至无任何症状，但少数高致病性毒株则能导致家禽发生急性致死性传染病，在历史上是一种毁灭性疾病，既威胁着养禽业的发展，又影响到公共卫生，值得高度重视。下面简述有关AI的特点及防治问题，为有效地控制AI的发生而共同商讨。1．禽流感的特点（1）病原的多型性AIV属正粘病毒科，分A型。B型和C型流…     

禽流感（AI）

1 病毒的一般特性和病原生态学禽流感的病原是AIV，属正粘病毒科流感病毒属。AIV具有囊膜，囊膜表面具有血凝素（HA），能凝集鸡、马、驴、骡、绵羊、山羊、豚鼠、小白鼠、鸽、麻雀等多种动物的红细胞，并能被特异的抗血清所抑制。AIV没有超常的稳定性，对热的抵抗力弱，常用消毒药如福尔马林、稀酸、漂白粉、碘剂、脂溶剂等能迅速破坏其致病力，但存在于鼻腔分泌物和粪便中的AIV，因受这些有机物的保护而具有较强的抗灭活能力，且能在自然环境中存活较长时间。基于HA和神经氨酸酶（NA）的表面抗原，可以将AIV分成不同的血清亚型，…     

抗H9亚型禽流感病毒独特型抗体的制备与应用

用纯化的鸡抗H9亚型禽流感病毒（AIV）免疫球蛋白G（IgG）作为抗原免疫家兔，制备兔源多克隆抗独特型抗体（Pab2），同时免疫小鼠，应用细胞融合技术建立了分泌抗AIV独特型单克隆抗体（Mab2）的杂交瘤细胞系。经鉴定，2类抗独特型抗体均能竞争性地抑制鸡抗AIVIgG与AIV的结合。保护试验证实，兔源多克隆抗独特型抗体疫苗较单克隆抗独特型抗体疫苗具有更高的保护作用。     

荧光RT-PCR技术与古典病原分离技术检测AIV比较试验

应用荧光RT-PCR技术和古典病原分离技术对304份样品进行AIV对比检测试验，结果应用RT-PCR技术可在4小时内从304份样品中检出AIV阳性26份，而病原分离技术检出了AIV阳性22份，需要时间为至少15天．两者阳性样品重复率为100％，因此，与古典病原分离技术比较，荧光RT-PCR技术具有高度特异、敏感的特性，而且可以大大地缩短对AIV的检测时间。     

多重RT-PCR方法诊断多种禽呼吸道病原的混合感染

在一个RT-PCR反应体系中同时以鸡传染性支气管炎病毒（IBV）、禽流感病毒（AIV）、鸡新城疫病毒（NDV）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鸡毒支原体（MG）和鸡滑液囊支原体（MS）等6种呼吸道病原的RNA或DNA为模板进行扩增RT-PCR。结果显示,6种病原都扩增出了相应大小的特异性产物,表明建立的多重RT-PCR方法可用于混合感染时上述6种病原的鉴别诊断。     

H5、H7和H9亚型禽流感病毒四重荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

旨在提高对禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）检测效率，及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域，设计并合成了相关探针和引物，建立了禽流感病毒（AIV）四重荧光RT-PCR检测方法，该方法可在检测禽流感病毒（AIV）的同时，确定病原是否为H5、H7和H9亚型。结果显示，该检测方法耗时短、特异性好、检测下限达到10^-5 ng·μL^-1。采用该方法检测临床采集的13个活禽交易市场的384份禽咽喉和泄殖腔双拭子样品，经检测，其中有60份样品为流感病毒阳性，且全部是H9亚型，该结果与行业标准方法（NY/T 772—2013）检测结果一致，κ值为1（P<0.001）。本方法能实现对禽流感病毒及H5、H7和H9亚型的高通量快速检测，将在AIV快速检测中发挥重要作用。     

禽流感疫苗研究进展

禽流感（avain influenza，AI）是由A型禽流感病毒引起的一种家禽和野禽感染的疾病综合征。其病原禽流感病毒（avain influenza virus，AIV）属正粘病毒科，流感病毒属，为单股负链RNA病毒。根据血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的不同可分为15个HA亚型和9个NA亚型。自1878年该病首次在意大利流行以来，不断蔓延，目前世界上许多国家和地区均有本病的暴发和流行。     

禽流感与新城疫的鉴别诊断

收稿日期：２００２－０１－１４禽流感（AI）是危害世界养鸡业的最为严重的传染病之一，由于该病与新城疫（ND）在临床症状及病理变化上有许多相似之处，因而临床上容易造成误诊。现将二者的区别介绍如下：１病原禽流感病毒（AIV）是正粘病毒科正粘病毒属的A型流感病毒。流感病毒有两种重要的表面抗原，即血细胞凝集素（HA）和神经氨酸酶（NA）。AIV至少有１５种血细胞凝集素和９种神经氨酸酶，这样便可能组成大量的病毒亚型，各亚型之间不发生交叉的保护作用。各种AIV之间致病力差异很大，致病力弱的毒株只能引起轻微的症状，而高…     

云南省某养鸡场鼻气管鸟杆菌核酸检测及其16S rDNA基因序列分析

为确定云南省易门县某养鸡场大量肉鸡出现流鼻涕、打喷嚏、面部肿胀、食欲下降的原因，采集病死肉鸡鼻腔黏液及肺、气管等组织，处理后提取病原核酸，通过RT-PCR/PCR方法分别检测禽流感病毒（AIV）、传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鼻气管鸟杆菌（ORT）、鸡副嗜血杆菌（ICV）。结果显示，仅ORT为核酸阳性，其他病原均为阴性。对检出的ORT阳性样品16S rDNA基因进行序列分析发现，阳性样品与伊朗分离株和土耳其/匈牙利分离株的同源性均在99.7%以上，都处于同一分支内，与国内2014年的报道一致，说明云南省流行的ORT变异较少，仅具有相对短的进化史。本研究对于指导该地区鸡群细菌病防控具有参考意义。     

H_9N_2禽流感综合防控措施

禽流行性感冒（avian influenza,AI,简称禽流感）是由正黏病毒科、流感病毒属A型流感病毒（avian influenza virus,AIV）引起的一种急性、高度接触性传染病。低致病力禽流感常引起呼吸道症状,产蛋量下降。1994年首次报道H9N2AIV在中国流行,     

家禽者四大疫病预防与控制漫谈

禽流感、新城疫、传染性法氏囊病与鸡大肠杆菌病是目前严重威胁家禽饲养业健康发展的四大主要传染病。目前四病在流行病学、临床症状、病理表现和免疫防控等诸方面都发生了很大变化，本文就此作一扼要浅析，仅供参考。禽流感（AI）一．病原禽流感病毒（AIV）为正粘病毒，属A型流感病毒，易变异。有很多血清亚型，如H１－１４、N１－９，不同的血清亚型株之的毒力差异很，甚至同一个清亚型毒力有差异。引发致病性禽流感毒型株为H５，H和H９引发温和型禽感。二．临床症状二．临床症状１．流行特点：多种家禽和野禽均可感染，其中鸡与火鸡…     

浅谈禽流感的防制

禽流感（AvianInfluenza简写AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类感染或疾病的综合征。家禽感染后可呈现亚临床症状，或呼吸系统疾病，产卵下降，下痢或急性致死性疾病。１病原禽流感病毒（AIV）属正粘病毒科。在病毒增殖过程中很易发生基因重排，因而使AI的抗原性和致病性很容易发生变异，现已知AIV有１６个HA亚型，１０个NA亚型，这些亚型可以组成１２６个血清型，已发现８１种血清型。AIV多数为弱毒，无致病性；少数为中等毒力，有轻度致病力；极少数为强毒，为高致病性（HPAIV）。２流行特点该病常突然发生，在短时间内波及全…     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

香港禽流感事件

自1997年8月香港首次报道了一起在人体分离到H5N1禽流感病毒病例后，又有18人的分泌物被证实存有这种病毒，其中有6人死亡。该事件引起香港政府和世界卫生组织的重视，各界人士对该事件也看法不一致，我们就收集到的相关资料对该事件作一综述。1禽流感病毒引起禽流感的病原为禽流感病毒（AvianInfluenzaVirus，AIV），在分类上属正粘病毒科流感病毒属，这也是正粘病毒科内唯一的一个属。根据流感病毒核蛋白和基质蛋白抗原性的不同，可将其分为A、B、C（或称甲、乙、丙）3个血清型。其中，B型和C型主要感染人，而A型既感染人，也感染其…     

中草药防治禽流感研究进展

禽流感（avian influenza,AI）是由A型流感病毒引起的家禽或野禽的疾病综合征。根据禽流感病毒（AIV）的致病力通常分为高致病性禽流感（HPAI）和低致病性禽流感（MPAI）,HPAI传播快,具有高度致死性;MPAI多呈隐性感染或症状较轻,不导致严重病变或死亡。AI历来被认为是人类流感的最大基因库,是人流感病毒发生变异的新基因来源。1997年,中国香港H5N1 AIV及1999年中国大陆和香港H9N2AIV首次突破种间障碍直接感染人甚至致死。不但打破了自然条件下仅有H1、H2和H3亚型流感病毒可以感染人和其他哺乳动物的常规,而且为人流感增添了新的毒株亚型（H5和H9）。由此赋予了AIV（禽流感病毒）全新的公共卫生意义。     

H9N2亚型猪流感病毒A／Swine／Shandong／1／02分离株的基因序列分析

从有肺炎症状的病猪中分离到1株H9N2亚型猪流感病毒（SIV）A／Swine／Shandong／1／02，对其进行了全病毒基因序列分析。结果表明，该毒株8个基因片段的核苷酸序列均来自禽流感病毒（AIV），与我国目前家禽中流行的H9N2亚型AIV毒株具有很高的同源性，与A／Duck／Hong Kong／Y280／97（H9N2）的同源性为94．1％～98．9％，与A／Chicken／Beijing／1／94（H9N2）的同源性为94．5％～98．2％；推导的其血凝素（HA）裂解位点处的氨基酸序列为P—A-R—S-S-R，完全符合H9亚型AIV欧亚分支中的类A／Chicken／Beijing／1／94亚分支的特征；基因分析结果表明，该分离株的所有基因片段均来源于H9N2亚型AIV，它可直接感染猪，并导致发病，但它并未在猪体内发生重组。     

SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法检测禽流感病毒

为建立检测禽流感病毒（AIV）的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR方法，根据AIV的M基因保守区的核苷酸序列设计引物。用4株不同亚型的AIV感染MDCK细胞，收集感染6、12、24、48、72h的病毒。另外采取169份鸡的泄殖腔拭子和咽喉拭子。对上述样品的M基因进行检测，试图建立快速检测AIV的SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法，并与普通RT—PCR方法和传统的病毒滴定方法进行比较。结果表明：此次建立的检测AIV的SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法能检测到感染MDCK细胞后72h的AIV，对169份泄殖腔拭子和咽喉拭子中的AIV检出率为5．33％（9／169），而普通RT—PCR方法检出率为6．51％（11／169），病毒滴定检出率为5．62（9／160）。对其他病毒（NDV、IBDV、IBV、VA）则未检测到，且整个检测过程只需4h，表明该方法特异、准确、快速。     

广西本地土鸡两种不同禽流感疫苗免疫效果初探

禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒（Avian influenzavirus,AIV）引起的严重危害养禽业的一种烈性传染病。禽流感病毒属正粘病毒科流感病毒属,病毒基因组为分节段的单股负链RNA,包含8个基因。AIV变异频繁,血清亚型众多,根据表面结构蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的抗原性不同,分为不同血清亚型。H9N2亚型为中低致病力毒株,其特点是分布广泛,能造成宿主的免疫抑制,并且可与其它病原微生物通过协同作用引起禽类发病。H9N2虽然为中低致病力毒株,但它对养禽业的危害同样不容忽视。