两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比

为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。     

不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫O型、A型抗体水平对比评估

目前,商品化口蹄疫检测试剂盒众多,但质量评估方法并不完善,只是在使用时通过主观判断或者简单的数据对比来评估试剂盒的检测效果。采用细胞中和抗体和O型、A型口蹄疫液相阻断ELISA方法,对不同品牌试剂盒的符合率、敏感性和特异性进行检测,从中筛选优质试剂盒应用于临床,同时为制定相应的免疫程序提供科学依据。对6种试剂盒的敏感性符合率、特异性进行数据对比发现,试剂盒E的试剂盒符合率最高,中和抗体效果表现为E试剂盒>C试剂盒>B试剂盒>A试剂盒>F试剂盒>D试剂盒;以兰州兽医研究所研制的O、A型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒为标准,结果表现为a试剂盒>b试剂盒>d试剂盒>c试剂盒>e试剂盒,试剂盒a与兰州兽医研究所试剂盒阳性符合率一致性最高。     

甘南牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗免疫效果分析

为了解口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗对甘南牦牛的免疫保护情况,试验应用ELISA方法对30头牦牛不同免疫阶段的血清进行了抗体监测。结果表明:除免疫前口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗产生的抗体水平较低外,在一免后30天和二免后30,90,150天均能达到群体免疫保护水平,且在二免30天时最高,持续2~3个月后有下降趋势,在免疫5个月后下降至70.00%左右,但仍具有保护力。说明用甘南牦牛口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活苗免疫牦牛产生的抗体水平符合国家规定的要求,且能维持较高水平,免疫效果良好。     

肉牛口蹄疫灭活苗不同免疫程序免疫效果的比较

为了解肃南地区肉牛口蹄疫免疫动态,达到为本地区肉牛养殖制定科学口蹄疫免疫程序的最终目的.本文与2019年3月份采用随机抽样方法选取120头肉牛,分成了3组,分别采取不同免疫程序,根据免疫抗体检测水平的变化,选择免疫效果最佳的免疫程序.试验结果表明,第3组的口蹄疫A型、O型抗体水平最高.因此,本试验推荐肉牛场每年免疫3～...     

不同ELISA试剂盒检测感染猪口蹄疫病毒3ABC抗体效果比较

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗体全部转为阳性;3种试剂盒检测最早3ABC抗体与症状对应关系有差异,每两种商业试剂盒呈现不同程度的相关性。其中A试剂盒显示出最大的灵敏度,而B试剂盒显示最高的特异性,C试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化,因此对3种试剂盒进行比较,发现A试剂盒更稳定,更适合于猪FMDV非结构蛋白抗体检测。     

奶牛口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗免疫效果对比试验

为了解兰州地区奶牛口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的免疫效果,科学评价免疫质量以及合理制定口蹄疫疫苗免疫程序,本研究应用液相阻断ELISA和O型正向间接血凝检测方法分别对目前兰州地区使用的4种口蹄疫二价灭活疫苗的免疫效果进行了对比。结果表明,兰州地区使用的4种口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的O型和亚洲Ⅰ型口蹄疫保护性抗体诱导能力参差不齐,其中以B公司O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的抗体诱导能力最强,其他3个公司的疫苗则相对较差。     

雌二醇残留ELISA检测试剂盒的研制

采用包被单克隆抗体直接竞争ELISA法研制一种检测食品中雌二醇残留的ELISA试剂盒。将不同浓度的雌二醇添加到鸡肉样品中,用制备的试剂盒检测雌二醇残留,结果样品的加标回收率在73.1%～102.7%之间,变异系数<20%。对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定,结果表明:研制的试剂盒最低检出限为0.5μg/L;在4℃条件下试剂盒有效期可达6个月。用ELISA试剂盒检测雌二醇残留可批量分析样品,具有快速、简便、灵敏、经济的特点,可广泛应用于食品中雌二醇的监测。     

三种试剂盒检测猪O型口蹄疫抗体的比较

应用两种ELISA试剂盒和一种正向间接血凝试剂盒对125份免疫猪血清进行了口蹄疫抗体水平测定,并对三种试剂盒测定结果的符合程度、及其各自的重复性进行了分析。试验结果表明三种试剂盒测得的抗体水平之间有较好的一致性,但两种ELISA试剂盒检测结果之间的一致性要略高于正向间接血凝与两种ELISA试剂盒之间的一致性;三种试剂盒各自的检测结果重复性良好。     

对牲畜口蹄疫O、Asia-1双价灭活苗免疫效果的评价分析

牲畜口蹄疫是一类动物疫病，因其高传染性、高发病率、高危害性而被各级政府高度重视加以预防控制，严格执行综合性防治措施。免疫抗体水平测定及是否发病是评价防治效果的最主要的方法。2006年、2007年格尔木市用O、Asia-1灭活苗免疫存栏牛，虽然春秋两季免疫后在冬季再次进行强化免疫，但是免疫效果不佳，抗体检测水平较低。     

牛羊O型、亚洲I型、A型口蹄疫三价灭活苗免疫效果的监测

在新疆兵团六师垦区,采用O型、亚洲I型、A型口蹄疫三价苗对山羊、绵羊、犊牛免疫注射并进行6个月的跟踪监测。结果显示,采用口蹄疫三价苗对成年山羊进行免疫后,免疫抗体水平群体合格率达到农业部标准,并能维持4~5个月;成年绵羊进行免疫后,免疫抗体水平群体合格率达到农业部标准,能维持6个月以上;从绵羊、山羊羔羊免疫监测效果来看,免疫2次效果优于1次免疫;犊牛加强免疫后免疫抗体水平群体合格率达到农业部标准,能维持6个月。     

奶山羊乳房炎二联灭活疫苗的制备及其免疫效果评估

为评估自制乳房炎灭活疫苗的免疫效果,以乳房炎山羊乳中分离出的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌为材料,经甲醛灭活后与铝胶盐-转移因子佐剂混合,制成奶山羊乳房炎二联灭活疫苗。对泌乳期奶山羊进行2次间隔为15 d的颈部皮下注射接种,每次剂量均为2 mL。在二免后第0、15、35、60天检测乳清和血清中大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌的抗体效价,并统计隐性乳房炎的检出率。结果显示,两次免疫后奶山羊乳清和血清中的抗体效价均显著升高(P<0.05),在二免后第15天达到峰值,约为对照组抗体效价的32倍;隐性乳房炎检出率显著下降(P<0.01),由免疫前的50%,在二免后第35天下降到了6.25%。结果表明,制备的奶山羊乳房炎二联灭活疫苗不仅能刺激免疫羊产生较为强烈的体液免疫应答,而且对隐性乳房炎有一定的治疗效果。     

不同猪支原体肺炎灭活疫苗免疫效果评价及比较

为研究不同猪支原体肺炎灭活疫苗免疫效果,通过对猪群的料肉比、平均日增重、转栏单头均重、死淘率、咳嗽频率、单头药苗费、肺部病变评分和猪血清抗体水平等指标测定,对常见不同菌株的3种疫苗（A、B、C）效果进行了综合评价。将规模化猪场800头1日龄健康仔猪均匀地随机分为3个试验组和1个空白对照组。在7、21日龄对试验组仔猪按疫苗说明书进行免疫接种,空白组仔猪不注射疫苗。所有猪只于21、48、80、140日龄采血及分离血清,采用ELISA方法检测血清中猪肺炎支原体抗体水平。结果显示,接种疫苗A后猪血清抗体水平和阳性率最高,保育阶段和育肥阶段A组料肉比较空白组分别降低了10.8%和13.8%,平均日增重分别提高了19.3%和7.9%,死淘率分别降低了2.64%和1.88%,咳嗽频率分别降低了6.38%和6.00%,单头药苗成本分别降低了2.2和1.9元/头,免疫效果和经济效益均为最好;其次是疫苗B,疫苗C使用效果最弱。结果表明,用不同疫苗免疫接种试验猪后产生的抗体水平和免疫效果存在差异。本试验为猪支原体肺炎灭活疫苗的临床合理应用提供了数据支持。     

2018—2020年山西省长子县O型口蹄疫免疫效果评估

为掌握山西省长子县O型口蹄疫的免疫抗体水平,评估其免疫效果,2018—2020年在全县14个乡镇的规模场和散养户,随机采集2 258个场户的12 186份血清样品,采用阻断ELISA法检测口蹄疫免疫抗体,并对检测结果进行时间、群间和空间分布分析。结果显示：2018—2020年全县平均场户免疫合格率为81.18%,个体免疫合格率为85.21%。其中：2020年抗体合格率最低,场户和个体免疫合格率分别为70.27%和79.78%,与其他年份差异显著（P＜0.05）;规模场场户合格率和个体免疫合格率分别为87.25%和89.56%,散养户分别为78.96%和82.39%,规模场显著高于散养户（P＜0.05）;王峪、横水2个乡镇免疫效果较好,个体免疫合格率均在90%以上,而大堡头、碾张、色头3个乡镇免疫效果较差,个体免疫合格率为70%~80%,差异显著（P＜0.05）。结果表明：长子县O型口蹄疫整体免疫效果较好,达到了国家要求的70%以上标准;但抗体水平不稳定,且存在一定的地区和场群差异,散养户和部分乡镇免疫水平偏低,存在发生疫情风险。结果提示,长子县可依据地区和场群不均衡的抗体水平分布特点,制定有针对性的免疫措施,分类指导、梯度推进全县口蹄疫防控与净化工作。     

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果评估

2017年7月,农业部决定对全国家禽开展H7亚型流感免疫。为评价重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对家禽的安全性及免疫效果,2017年10—12月以田间试验方式,常规养殖肉鸡(江村黄鸡)、樱桃谷白鸭、黑棕鹅各120只。按程序免疫:肉鸡9日龄首免(剂量0.3 mL),30日龄二免(剂量0.5 mL);樱桃谷白鸭15日龄首免(剂量1 mL);黑棕鹅15日龄首免(剂量1 mL)、50日龄二免(剂量1.5 mL)。定期采集血清测定抗体效价直至出栏,并每日观察禽群临床表现。试验结果显示:鸡首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为4.2 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为7.5 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于8 log2,抗体合格率均大于70%。鸭首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为5.1 log2,抗体合格率均大于70%,H7亚型HI抗体效价为5.6 log2,抗体合格率均大于70%,出栏前(47日龄)H5和H7亚型HI抗体效价均大于6 log2,抗体合格率均大于70%。鹅首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为3.9 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为5.2 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于7 log2,抗体合格率均大于70%。通过临床观察,未发现该疫苗有严重免疫副反应。试验结果表明,该二价灭活疫苗安全有效,但对于生长周期超过70 d天的家禽,应免疫两次。     

不同ELISA和AGID试剂盒检测马传染性贫血病毒抗体的比较

为比较商品化ELISA试剂盒和AGID试剂盒检测马传染性贫血病毒（EIAV）抗体的效果,并评价不同ELISA试剂盒的敏感性、特异性和一致性,将EIAV强阳性血清进行倍比稀释,分别用4种商品化ELISA试剂盒和3种AGID试剂盒进行检测,比较最低检出限;此外,以28份临床马血清作为样品盘,以AGID结果作为标准,通过计算符合率、Kappa值、敏感性、特异性和约登指数,综合评价4种ELISA试剂盒的检测效果。灵敏性结果显示：4种ELISA试剂盒可检出的最大稀释度分别为1:1 024、1:256、1:32和1:128,而3种AGID试剂盒可检出的最大稀释度均为1:16。临床样本检测结果显示：4种ELISA试剂盒与AGID检测结果的符合率均超过89%,其中有3个品牌的ELISA试剂盒一致性较高;4种ELISA试剂盒敏感性为75.00%~100%,特异性为87.50%~100%,约登指数为0.75~1.00。结果表明,ELISA试剂盒的检测灵敏度普遍高于AGID试剂盒,且与AGID试剂盒的检测结果符合率高,是EIAV检测的可靠手段之一,但不同ELISA试剂盒敏感性和特异性存在一定差异,应根据实际情况合理选择使用。本研究为制定科学合理的EIAV检测方案和试剂盒筛选提供了数据支撑。     

Immune Effect of Inactivated Vaccines against Foot-and-Mouth Disease and Their Interference on Differential Diagnosis

Vaccination with inactivated vaccine is an important measure to prevent and control foot-and-mouth disease (FMD), however, the immune effect and antigenic purity of inactivated vaccines are two major concerns for the establishment and evaluation of FMD free zones with vaccination. In this study, four groups of FMD type O and type A bivalent inactivated vaccines from 3 FMD vaccine manufacturers (designated as A, B and C) were selected to inoculate healthy juvenile cattle of FMD free. All cattle were immunized 3 or 4 times at a 1-month interval. Serum samples were collected before and after 1 month of every vaccination to determine the level of antibody to structural protein and non-structural protein. Results：(1) The qualified rates of antibody to structural protein: in group a1 (vaccine from company A, different batches), the antibody qualified rate could reach 100% for type O and type A, respectively after each vaccination. In group a2 (vaccines from company A, same batch), the antibody qualified rates were 36.7%, 98.3% and 100% for type O, and 15%, 86.7% and 100% for type A after the first to the third vaccination, respectively. In group b (vaccine from company B, same batch), the antibody qualified rates were 18.3%, 97% and 100% for type O, and 1.7%, 45% and 53.3% for type A after the first to the third vaccination, respectively. In group c (vaccines from company C, same batch), the antibody qualified rates were 26.7%, 96.7% and 100% for type O, and 21.7%, 71.7% and 100% for type A after the first to the third vaccination, respectively. (2) Antibody positive rate to non-structural protein 3ABC (confirmed with second ELISA test): In group a1, the positive rates were 0.7%, 1.4%, 9.5% and 4.8% after the first to the fourth vaccination, respectively; In group a2 and c, no 3ABC antibody-positive animal was detected after 3 repeated vaccination; In Group b, only one animal with a positive rate of 0.6% was detected after the third vaccination. The antibody qualified rates to the structural protein of FMDV in 3 of the 4 groups were far less than 70% after the primary vaccination, however, those were increased significantly after boost and repeated vaccination. The antigen purity of vaccines in three groups (a2, b and c) can meet the requirement of OIE standard on the FMD vaccine, however, the seroconversion to 3ABC antibody was obvious in animals from group a1 after repeated vaccination, which would cause some extent of interference to differential diagnosis. Also, a combination of a primary screening test and a confirmatory ELISA test can further improve the accuracy of differential diagnosis. This study provides an important scientific basis to make a rational program for establishment and evaluation of FMD free zone with vaccination.     

口蹄疫灭活疫苗的免疫效果及其对鉴别诊断的干扰

灭活疫苗免疫是防控口蹄疫的重要措施,但是灭活疫苗的免疫效果及其对感染与免疫鉴别诊断的干扰一直是口蹄疫免疫无疫区建设评估需要明确的重要问题。本研究中选择了3个企业（代号A、B与C）的4组口蹄疫O型与A型二价灭活疫苗,分别免疫口蹄疫抗体阴性健康未成年牛,免疫3～4次,测定免疫前后结构蛋白和非结构蛋白抗体的应答水平。结果显示：（1）结构蛋白抗体合格率：a1组（A企业多批次疫苗）4次免疫后O型和A型均为100%;a2组（A企业同批次疫苗）一~三免O型为36.7%、98.3%与100%,A型为15%、86.7%与100%;b组（B企业疫苗）一~三免O型为18.3%、97%与100%,A型为1.7%、45%与53.3%;c组（C企业疫苗）一~三免O型为26.7%、96.7%与100%,A型为21.7%、71.7%与100%。（2）非结构蛋白3ABC抗体阳性率（两种方法复核结果）：a1组一~四免分别为0.7%、1.4%、9.5%与4.8%;a2组和c组三次免疫均未检测到阳性;b组仅三免后阳性率为0.6%。3组灭活疫苗首次免疫牛的抗体合格率远不及70%,但加强免疫后抗体合格率均显著提高;非结构蛋白抗体检测结果表明有3组疫苗的抗原纯净度符合OIE的要求,但a1组灭活疫苗免疫后,仍然对感染与免疫鉴别诊断存在干扰;采用两种非结构蛋白抗体检测方法进行复核检验,可以提高感染与免疫鉴别诊断的准确性。本研究为口蹄疫免疫无疫评价方案的制定提供了科学依据。     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

鸡传染性鼻炎灭活疫苗免疫效力的试验研究

应用当地分离株研制的鸡传染性鼻炎氢氧化铝胶灭活苗进行了免疫保护试验。并与油佐剂苗进行了比较,经对免疫鸡的抗体检测,攻毒后的临床症状,眶下窦中HPg分离表明鸡传染性鼻炎氢氧化铝胶苗优于油乳剂灭活苗。     

2021年河南省O型口蹄疫免疫效果评估

为了解河南省O型口蹄疫（FMD）的免疫抗体水平,评估其免疫效果,2021年在河南省规模场、屠宰场与散养户,随机采集785场次22 879份血清样品,采用ELISA方法检测O型FMD免疫抗体,并对检测结果进行不同畜种、不同场点类型、不同季节、不同行政区域的统计分析。结果显示：2021年全省O型FMD抗体免疫合格率为80.30%,其中猪、牛、羊抗体免疫合格率分别为79.09%、92.48%、72.26%。猪场中,种猪场、商品代场、屠宰场O型FMD抗体免疫合格率分别为85.24%、82.57%、65.56%;牛场中,种牛场、商品代场、屠宰场、散养户O型FMD抗体免疫合格率分别为96.72%、91.75%、94.17%、100%;羊场中,种羊场、商品代场、散养户O型FMD抗体免疫合格率分别为78.63%、72.37%、69.46%。春、夏、秋、冬季的O型FMD抗体免疫合格率分别为79.42%、79.00%、80.58%、86.12%。18个地市中,有2个地市O型FMD抗体免疫合格率低于70%。结果表明：河南省O型口蹄疫整体免疫效果较好,但羊场免疫效果相对较差,尤其是散养户,免疫抗体合格率未达到...