扇贝裙边酶解制备抗氧化肽的实验研究

以扇贝(Chlamys farreri)裙边为研究对象.通过海洋碱性蛋白酶水解获得抗氧化肽.研究酶解温度、pH值、固液比、加酶量、酶解时间对酶解效果的影响.在单因素实验的基础上选取实验因素和水平.采用L16(45)正交试验.根据Box-Behnken设计原理采用三因素三水平的响应面分析法.对酶解条件进行优化研究.结果表明.最佳酶解条件为:固液比1:3.26(m/V).加酶量0.44 %(W/V),温度31.20 ℃,pH值为9.0,酶解时间为1h,M自由基清除率为83.78%.与预测值的相对误差为0.29%.理论值与预测值基本一致.预测模型能较好地反映实际情况.本研究旨在为今后扇贝裙边蛋白的开发利用提供理论依据.     

鲣鳔蛋白抗氧化酶解物制备工艺

为有效提高鲣鳔蛋白的附加值,研究以DPPH自由基清除率为抗氧化活性评价指标,采用蛋白酶酶解制备活性多肽的工艺,选用菠萝蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶7种酶在各自最适的条件下酶解,筛选出复合蛋白酶为最适用酶,通过单因素实验分别研究加酶量、溶液初始p H、酶解温度和时间对酶解物抗氧化活性的影响,在此基础上,根据响应面法优化鲣鳔抗氧化酶解物的制备工艺。结果显示,最佳酶解工艺条件为加酶量8.53 U/mg,p H 5.54,温度50.03°C,时间5.07 h。此外,利用超滤法对最佳条件下制备的酶解物进行初步分级,得到分子质量分别为大于10 000 u、3000~10 000 u和小于3000 u的3段组分,且这3段组分对DPPH自由基的半抑制浓度IC50值分别为0.64、0.52和0.37 mg/m L。研究表明,最优条件下制备的酶解物的DPPH清除率达72.00%,与模型预测值71.60%接近,且其中小于3000 u的组分具有较强的DPPH自由基清除活性。     

响应面法优化鱿鱼皮酶解工艺研究

为研究木瓜蛋白酶酶解鱿鱼皮的最佳酶解条件,通过单因素试验研究了酶添加量、酶解时间和酶解温度对鱿鱼皮水解度的影响。结果显示,3个因素对鱿鱼皮水解度均有不同程度的影响。在单因素试验的基础上,以水解度为响应值,酶添加量、酶解时间和酶解温度为自变量,采用Box-Benhnken响应面法设计3因素3水平优化试验,通过响应面分析,建立了二次多项数学模型对酶解条件进行优化,获得木瓜蛋白酶酶解鱿鱼皮的最佳条件:酶添加量4 560 U/g,酶解时间3.2 h和酶解温度50℃。在该条件下木瓜蛋白酶酶解鱿鱼皮的水解度可达15.53%,与模型预测值基本一致。研究表明,通过响应面法获得的数学预测模型能较好地预测木瓜蛋白酶酶解鱿鱼皮的效果,试验结果为鱿鱼加工副产物高值化利用提供了参考。     

响应面法优化四角蛤蜊酶解工艺条件

为提高四角蛤蜊的利用率,采用木瓜蛋白酶对其软体部位进行酶解。在单因素试验的基础上,研究温度、pH和酶加量对酶解过程的影响,通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化其酶解工艺条件。试验结果表明,所建立的响应面模型极显著（ P＜0．0001）,可以很好的反映各因素与水解度之间的关系,且由模型得出木瓜蛋白酶酶解四角蛤蜊的最佳工艺参数为温度48℃、p H 7．2、酶加量3000 U/g、料液比3∶100（g/m L ）和时间3 h ,在此条件下水解度为37．05％,从而为四角蛤蜊的精深加工利用,尤其是天然海鲜调味料的开发提供理论依据。     

响应面法优化末水坛紫菜蛋白酶解工艺及其酶解液抗氧化活性研究

为实现末水坛紫菜(Porphyra haitanensis)的高值化利用,研究了末水坛紫菜的蛋白酶解工艺及其酶解液的抗氧化活性。以酶解产物水解度和还原力为指标,分别采用单因素和响应面优化实验筛选出最适蛋白酶和最佳酶解工艺参数;通过测定酶解液还原力对1,1-二苯基-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O_2^-·)的清除作用,研究了最高水解度下的酶解液的抗氧化性活性。结果表明,中性蛋白酶是6种蛋白酶中的最适用酶;最佳酶解条件为:底物质量浓度35 g·L^-1、加酶量31 200 U·g^-1、温度45℃、pH 7.6、酶解时间5 h,在此条件下坛紫菜水解度达31.37%;酶解液还原力为2.2,对DPPH、·OH和O_2^-·自由基清除率分别为56.26%、85.84%和72.73%。结果表明,中性蛋白酶可以有效水解末水坛紫菜,水解后的酶解产物具有较好的抗氧化能力和应用前景。     

海湾扇贝面盘幼虫“面盘解体病”病原的研究

对大连地区患"面盘解体病"的海湾扇贝(Argopecten irradians)面盘幼虫进行电镜观察,并对健康海湾扇贝幼虫进行人工感染实验.患该病面盘幼虫病症为:下沉,组织解离,游泳器官面盘解体,经过一段时间后全部死亡.对发病面盘幼虫进行超薄切片电镜观察发现,该病原病毒主要侵染面盘幼虫的结缔组织细胞和上皮细胞,病毒呈六角形或近圆形,未成熟病毒颗粒直径为84～90 nm,病毒颗粒形态不一,大致有4种与所报道的鸡马立克氏病毒(Marek's disease herpes virus)和火鸡疱疹病毒(Turkey herpes virus)相似,即致密拟核型、中空型、十字型和双环型.从形态学上进行鉴定,认为该病毒属于疱疹样病毒(Similar herpesvirus).人工感染实验显示,在感染病毒后100 h,有30%幼虫出现"面盘解体"病状;感染148 h,幼虫全部死亡(水温22～24 ℃).根据实验结果推断,病毒的传播途径包括垂直传递和水平传播.     

扇贝边酶解技术研究

研究了混合酶水解扇贝边蛋白质的技术条件，并和单酶水解情况进行了比较。结果表明，混合酶水解可提高水解液中氨基酸态氮（AAN）含量，同时改善了水解液风味。本文引进二次正交旋转组合试验设计方案，系统地研究了影响混合酶水解效果的相关因素，得出了扇贝边水解液中氨基酸态氮生成量的变化规律一回归模型。应用该模型可对水解液中AAN生成量进行预测，也可进一步优化选择扇贝边的酶解条件。     

有效预防海湾扇贝面盘幼虫解体病的试验

扇贝的面盘幼虫解体病的发病主要因素为亲贝性腺发育不成熟所致。预防的有效措施,应在亲贝促熟上下功夫。利用发生面盘幼虫解体病的亲贝进行了生产性育苗实验研究,并取得了成功,培育出海湾扇贝稚贝20亿枚,单位水体出苗量368万枚/m3。     

扇贝加工废弃物的酶解技术研究

由正交试验确定的两种酶酶解的最佳水解结果表明枯草杆菌中性蛋白酶最佳水解条件为:加酶量为3.0%,温度为60℃,pH为7.0,时间为4 h,蛋白质水解度为91.3%;木瓜蛋白酶酶解的最佳酶解条件为:加酶量为3.0%,温度为65℃,pH为7.0,时间为4 h,蛋白质水解度为85.3%。SephadexG-15葡聚糖凝胶柱层析对扇贝加工废弃物水解产物的分析结果表明两种酶酶解产物的分子量分布均集中在682 Da,这说明酶解产物是小分子蛋白肽和游离氨基酸,可深加工利用制备水解蛋白制品。     

超声辅助酶解鲣加工副产物制备蛋白胨

为了提高水产加工副产物的利用率和附加值,以鲣加工副产物为原料,采用胰蛋白酶结合超声处理制备蛋白胨,并分析了鲣加工副产物超声辅助酶解过程中蛋白酶活性、水解度、氮回收率、TCA-可溶性氮回收率、酶解产物分子量分布等指标的变化,探究了超声辅助酶解的作用时间、温度以及超声功率等因素对鲣加工副产物酶解产物的影响,通过单因素实验优化确定了蛋白胨制备的最佳酶解工艺条件。结果显示,超声处理造成胰蛋白酶酶活发生显著变化,在功率为120 W的超声场下,胰蛋白酶酶活在30 min内呈上升趋势,但在超声场处理30 min后,胰蛋白酶的酶活呈明显下降趋势,至4 h后酶活变化趋势趋于平缓。超声功率和酶解温度都会影响胰蛋白酶对鲣加工副产物的酶解效率,在超声功率240 W和酶解温度50°C条件下,氮回收率比无超声处理组提高了18.66%,水解度提高了30.43%,TCA-可溶性氮回收率提高了33.20%,且超声处理有效提高了酶解液中小分子肽的含量。超声辅助酶解鲣加工副产物的最佳工艺条件为温度55°C,超声功率240 W,酶解时间4 h,此时氮回收率为81.40%,TCA-可溶性氮回收率为40.75%。     

锌对海湾扇贝中镉累积和亚细胞分布的影响

采用室内模拟混合暴露方式,研究了在镉(Cd)质量浓度一定(0.05 mg/L)的条件下,添加不同质量浓度(0 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L)的锌(Zn)对海湾扇贝整体、组织及亚细胞水平Cd累积和分布的影响。结果表明,Zn能显著抑制扇贝全贝对Cd的富集,并且这种抑制作用随暴露时间的延长和Zn浓度的升高而增强。在扇贝不同组织中Zn对Cd的富集均具有抑制作用,其中以鳃最为明显。在亚细胞水平,扇贝各组织累积的Cd主要分布在类金属硫蛋白(MTLP)和细胞碎片(CD)组分。在内脏各亚细胞组分中,Zn对Cd的抑制作用显著,且Zn的加入使CD中的Cd百分比从32%下降到21%~27%,而MTLP中的Cd百分比从57%增加到59%~67%。鳃组织中Zn对Cd百分比的影响更加明显,CD中Cd百分比从36%下降到14%~17%,MTLP中Cd百分比从59%增加到76%~79%;而性腺中MTLP和细胞器(ORG)组分中Cd百分比受Zn浓度影响较为明显,随着Zn浓度的升高,MTLP中Cd百分比下降,而ORG中Cd百分比升高;肌肉组织中Cd含量及百分比分布在亚细胞水平没有明显规律。     

水产加工副产物源抗氧化肽的研究现状与展望

我国是水产资源大国,近年来的水产加工业发展较快,产生了大量水产品加工副产物。其中许多副产物的蛋白质含量较高,可通过酶解得到不同功能性活性肽,进而实现高值化的利用。提高对水产品加工副产物的利用不仅可以减少资源的浪费,提高资源利用率,而且对降低企业成本,增加企业经济效益,减少环境污染也具有重要现实意义。本文主要对水产品加工副产物制备抗氧化肽的来源、抗氧化肽分离纯化方法、抗氧化检测评价方法以及抗氧化肽作用机制的研究进展进行综述。     

响应面法优化鲅鱼抗氧化肽发酵条件

为减少加工废弃物蛋白所造成的环境污染,提高水产品的利用率,探索了回收利用鲅鱼(Spanish mackerel)加工后富含蛋白质的废弃物,以寻找制备鲅鱼抗氧化肽的最佳生产条件。借助Design-Expert数据处理软件对苏云金芽孢杆菌Hy-4发酵产抗氧化肽的条件进行优化;在单因素试验的基础上,利用PlackettBurman试验设计法对影响发酵制备鲅鱼抗氧化肽的培养条件进行筛选。确定了影响发酵液总抗氧化活性的3个主要影响因素(P0.5)为发酵温度、培养基初始p H和料液比;在此基础上,利用最陡爬坡实验逼近3个关键因素的最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法进行回归分析,通过求解回归方程得到产抗氧化肽的最优条件为:发酵时间48 h,发酵温度30℃,培养基初始p H 6.8,接种量2%,料液比1.45 g/50 m L,菌龄24 h。经过验证,发酵液总抗氧化活性达到537.73 U,较优化前提高了57.2%,与回归方程的预测值570.11 U相比,相对误差为5.7%,说明模型能够较好地预测菌株Hy-4发酵产抗氧化肽发酵液的总抗氧化性。     

基于Box Behnken响应面设计优化制备鸢乌贼抗氧化肽的研究#br#

以印度洋鸢乌贼(Symplectoteuthis oualaniensis)胴体分离蛋白为原料,基于分子量分布和营养价值分析,优化制备抗氧化肽的酶解工艺参数。碱溶酸沉法从鸢乌贼胴体提取分离蛋白;以底物浓度、酶底比、酶解时间等3个因素为单因素实验;Box-Behnken中心法则设计响应面实验;DPPH自由基清除率结合水解度为响应指标。鸢乌贼胴体分离蛋白相对分子量分布在30~240 kDa;必需氨基酸占总氨基酸42.56%;最佳酶解工艺参数是底物浓度4%、酶底比9 U·mg^-1、酶解时间4 h。5 mg·mL^-1的鸢乌贼胴体分离蛋白酶解物的DPPH自由基清除率为55.60%,羟自由基清除率为53.21%,ABTS自由基清除率为40.12%。鸢乌贼胴体分离蛋白符合FAO/WHO世界卫生组织提出的理想蛋白营养价值模式,鸢乌贼胴体能制备出营养价值高和抗氧化活性强的海洋功能蛋白肽。     

Antioxidant and Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitory Activities of Protein Hydrolysates Prepared from Threadfin Bream (Nemipterus spp.) Surimi By-products

Solid wastes from threadfin bream (Nemipterus spp.) surimi production composed of head and frame were hydrolyzed by various commercial proteases (Alcalase, Flavourzyme, Neutrase, Protamex, papain, and pepsin) to produce protein hydrolysates with bioactive properties. An Alcalase-hydrolyzed sample at 24.4% degree of hydrolysis (DH) displayed the highest antioxidant activity based on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging, ferric reducing antioxidant power (FRAP) assay, and potassium ferricyanide method. In addition, it showed an inhibitory activity toward angiotensin-converting enzyme (ACE) of 25.5%. Antioxidant activity of threadfin bream by-product hydrolysates increased with hydrolysis time and reached the highest DPPH activity after 6 h, while that hydrolyzed for 3 h showed the highest reducing power based on FRAP and potassium ferricyanide assays. In addition, ACE inhibitory activity was found to be at an optimum after 3 h of hydrolysis. The hydrolysates (1 mg/mL) also retarded oxidation of a linoleic acid emulsion system to a similar extent as 0.1 mg/mL 3-tert-butyl-4-hydroxy anisole (BHA), indicating a potential use in the food system. Protein hydrolysates from threadfin bream surimi by-products could be tailor-made to possess both antioxidant and ACE inhibitory activity through controlling DH of Alcalase-catalyzed reactions.     

鸢乌贼酶解产物的抗氧化稳定性与功能特性

以鸢乌贼(Symplectoteuthis oualaniensis)胴体为原料,采用木瓜蛋白酶进行酶解,比较了酶解液中不同分子量组分的抗氧化特性,探讨了温度、p H和光照对其抗氧化活性的影响,以及其功能特性(包括乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性、吸水性、持水性和吸油性等)。结果表明,鸢乌贼酶解产物具有一定的耐热性,在酸性偏中性的环境中能较好地保持其抗氧化活性,日光照射会降低其抗氧化能力。此外,酶解产物还具有较强的乳化性、起泡性、吸水吸油能力等功能特性。     

Effect of dietary common carp by‐product protein hydrolysates on antioxidant status in different organs of zebrafish (Danio rerio)

A feeding trial was conducted to evaluate the effect of dietary protein hydrolysates from common carp (Cyprinus carpio) by‐products on the antioxidant status of zebrafish (Danio rerio). Common carp by‐product was hydrolysed using Alcalase to a degree of hydrolysis of 15%. The zebrafish were fed for 44 days with four different diets with increasing levels of carp by‐product hydrolysates (CBH0: 0 g/kg; CBH25: 25 g/kg; CBH50: 50 g/kg; CBH100: 100 g/kg). The gills, muscle and brain were dissected at the end of the feeding trial in order to evaluate the total antioxidant capacity against peroxyl radicals (ACAP) and lipid peroxidation (TBARS). Although total antioxidant capacity did not show differences in muscle (p > 0.05), lipid peroxidation was reduced in the muscle of fish fed the CBH50 diet. Brain lipid peroxidation showed a significant reduction (p < 0.05) in all groups when compared with the control diet CBH0. Antioxidant properties of protein hydrolysates indicate their potential as nutraceuticals since (a) a reduction in muscle lipid peroxidation was verified, implying that their use could enhance the quality and shelf life of fish fillets; and (b) a decrease in brain lipid peroxidation was registered, highlighting the potential use of fish protein hydrolysates for the prevention of neurodegenerative diseases.     

梅童鱼内源蛋白酶自水解工艺的优化

为提高海捕低值鱼加工利用率,合理利用鱼糜及鱼糜制品加工中的副产物,充分利用鱼类自身内源酶,寻求低值鱼精深加工的低碳高效利用,以梅童鱼(Collichthys lucidus)为研究对象,利用鱼类自身的内源蛋白酶将鱼体内的蛋白质酶解,在自然p H条件下,观察了液料比、自溶温度、时间对梅童鱼蛋白水解的影响,以可溶性蛋白/总蛋白的值为响应值,采用响应面分析优化自溶条件。通过求解回归方程得到的最优自溶条件为:液料比3.4,温度53℃,时间267 min。经过验证,可溶性蛋白/总蛋白的值为18.35%,与回归方程的预测值18.55%相比,相对误差1.1%,说明模型能较好地预测自溶过程中可溶性蛋白/总蛋白的值。在此条件下,测得水解度为15.84%,过0.45μm微滤膜蛋白质量比为9.83%。研究表明,该水解工艺可为生产鱼露、活性肽、氨基酸等提供技术依据。