快速检测试纸条法检测转基因玉米种子的原理及步骤分析

为了确保玉米种子用种安全,严厉打击非法生产经营转基因种子。通过快速检测试纸条法对杂交玉米种子进行转基因成分检测,以期为实验室研究提供依据。     

同步检测马铃薯 6 种病毒试纸条与ELISA 方法比较分析

为了尽快地将同步快速检测马铃薯 6 种病毒试纸条推广应用到全国各地的基层单位、马铃薯的种薯种植企业、合作社、种植大户、种子管理部门,以提高马铃薯的质量和产量,进一步完善马铃薯种薯的质量认证体系;将同步快速检测马铃薯 6种病毒试纸条与国内外通用的 ELISA 检测方法进行比较分析。比较分析表明,任何马铃薯种植者可以利用马铃薯病毒快速检测试纸条在田间地头检测马铃薯病毒的发生情况;可以通过肉眼直接判断出病毒检测结果;5~10min 即可完成马铃薯病毒的检测;试纸条的检测成本低,灵敏度高。     

用试纸条快速检测盐酸克伦特罗的试验

本试验以盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸条来对动物尿液中盐酸克伦特罗(Clenbuersl,CL)进行快速检测.试验结果证明这种快速检测试纸条能够有效检测尿液中的残留物,检测灵敏度达到2～3ng/mL.     

牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条的制备及应用

奶牛妊娠的早期诊断至关重要,妊娠相关糖蛋白6(PAG6)是母体胎盘组织分泌至外周循环中的特异蛋白质,因此,本研究致力于制备牛妊娠相关糖蛋白6快速检测试纸条。制备牛妊娠相关糖蛋白6多克隆抗体,将其稀释后加样至NC膜上,通过固定和封闭制备出一种可检测boPAG6的快速检测试纸条,在试纸条上加入待检血清进行孵育后洗涤,再加入二抗孵育后洗涤,最后加入显色液显色后进行快速检测。标准化快速检测试纸条是将抗体用PBS稀释成10μg/mL点样至NC膜上,在37℃温箱中固定抗体30 min,经5%的脱脂奶粉封闭后制成。待检血清滴加至试纸条后,在37℃温箱中孵育1 h后,进行洗涤和二抗孵育,最后在DAB显色试剂盒作用下显色3 min即可判定。临床检测的初步应用表明,在未孕与怀孕奶牛的混合血清中仍然可以判定是否怀孕,快速检测试纸条特异性强;血清在稀释3200倍的最低检测限时,快速检测试纸条的敏感性良好;而且该结果与ELISA的符合率在80%之上。试验重复性良好,并能在4℃和-20℃条件下保存2周。建立了一种奶牛早期妊娠诊断的快速检测试纸条并应用于初步的妊娠诊断。     

玉米种子生产基地品种转基因成分快速检测的策略

近年来,种子监督管理过程中发现部分地区存在非法繁育转基因作物的现象.为了打击转基因玉米非法繁育的行为,更好地保障农业转基因安全,对玉米种子生产基地的品种进行转基因成分的现场快速检测十分重要.本研究检索已知商业化转基因玉米的外源目的基因信息,构建了转基因玉米常用外源目的基因数据库,建立了玉米品种转基因成分快速检测的策略.研究发现,利用Cry 1 Ac/Ab、CP 4 EPSPS、Pat/Bar3个快速检测试纸组合可完成20个转基因玉米转化事件的现场快速检测.     

免疫检测试纸条法检测西瓜子中的瓜类果斑病菌

将西瓜子进行表面消毒后破碎,用无菌水于4℃浸泡4h,取300μL浸提液加入250mL细菌液体培养基中,28℃150r/min培养3d,取培养液0.7mL与Agdia公司提供的瓜类果斑病菌检测试纸条样品浸提网袋中的缓冲液混匀,取混合液1mL用于免疫检测试纸条检测.该方法可有效检测出西瓜子中是否带有瓜类果斑病菌(Acidovorax avenae subsp.citrulli(Schaad et al.)Willems et al.).     

克伦特罗残留GC-MS检测方法的建立及对自制试纸条性能的确证

建立了猪尿液中盐酸克伦特罗（CL）残留的GC-MS检测方法,并对自主研制的CL残留快速检测免疫金标试纸条（CL-Strip）进行了比较分析。结果表明,GC-MS的检测限为0.5ng/ml,CL-Strip的检测限为1.0ng/ml;CL-Strip与GC-MS两者的加标测定实验结果完全一致;用CL-Strip检测出的100份阴性尿样和18份阳性尿样,与GC-MS检测结果完全一致。说明CL-Strip与GC-MS同样灵敏、准确、稳定,由于CL-Strip具有简便、直观、快速、敏感、特异、准确等优点,建议在CL残留快速检测中推广应用。     

转基因玉米培育及其检测技术应用研究

玉米是全球和我国第一大粮食作物,对稳定我国粮食安全具有显著的贡献。随着农杆菌介导法等转基因技术在玉米转基因育种中的应用,能够有效培育抗虫转基因玉米、耐除草剂转基因玉米、耐干旱和品质改良转基因玉米。同时,通过将多基因聚合转化和常规玉米育种技术相结合,研究建立快速有效的玉米转基因检测技术,有助于不断培育优良性状的玉米新品种,促进我国玉米种业发展和乡村振兴。     

双重检测马铃薯X和Y病毒试纸条制备技术研究

为了实现在马铃薯种薯生产田现场同时快速检测马铃薯X（PVX）和Y病毒（PVY）,利用胶体金标记和免疫层析技术研制了PVX-PVY双重检测试纸条。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,在波长526nm处有最大吸收值,金颗粒直径约25nm。同时标记PVX和PVY兔多克隆抗体,将抗体标记物喷射于玻璃纤维纸上,作为金标垫。将PVX和PVY抗体分别划线于硝酸纤维素膜上作为检测线,将羊抗兔抗体划线于硝酸纤维素膜上作为质控线,制备胶体金试纸条。结果表明,研制的双重试纸条能够在2min之内同时检出PVX和PVY。PVX病汁液检测稀释限度可达10⁶倍（W/V）,PVY可达10⁵倍（W/V）,其中对PVX检测更灵敏。用其他4种常见病毒（PVS、PLRV、PVA和PVM）检测,未出现交叉反应。在田间采集马铃薯叶片,分别利用试纸条与DAS-ELISA检测,结果一致性非常高。由此可知,该试纸条具有操作简便、反应快捷的特点,特别适用于田间及口岸一线对于马铃薯X和Y病毒的同时检测。     

单倍体玉米育种方法在转基因玉米育种中的应用

用单倍体育种方法获取转基因玉米纯合自交系,减少花粉在环境中释放量,避免基因漂移影响生态环境,绝大部分过程不受区域限制,不受限制区域无花粉散失。     

氯霉素单克隆抗体免疫金标快速检测试纸的研制及性能测定

以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP_Strip),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP_Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用。     

烟草含钾量反射仪-钾离子试纸法快速测定研究初报

比较了反射仪—K 试纸法(K ts-fl)、原子吸收光谱法、ICP-aeS法测定烟株叶脉汁液中的K 含量的三种方法,确定反射仪—K 试纸法测定烟株钾含量的可行性及其最佳测定范围;在烤烟不同生育期,应用反射仪—K 试纸法对烟株叶片不同部位含K 水平的测定,确定其最佳测定时期及部位。研究结果表明,反射仪—K 试纸法与原子吸收光谱法、ICP-aeS法测定结果差异不显著,应用反射仪—K 试纸法进行烟株钾素快速诊断可行,且具有时间短,简单快速,易操作等优点。反射仪测定K 的稳定线性范围是0.30～0.9g/L;在不同时期对烟株不同部位测定研究表明,最佳诊断部位为烟株第二平展叶叶脉基部2cm段。     

IBD试纸对中等毒力疫苗毒及标准强毒的检测试验

应用IBD快速检测试纸和琼脂凝胶免疫扩散试验(AGIDT),对不同疫苗免疫鸡检测结果均为阴性,对人工感染强毒鸡最早检出IBDV的时间,试纸检测法为感染后36h,琼脂扩散检测法为感染后96h。试纸检出的最低含毒量为800ELD50,ELISA检出的最低含毒量为400ELD50,琼扩检出的最低含毒量为2 5×104ELD50,试纸检出的敏感性比琼扩提高32～64倍。IBD试纸检测简便、快速、敏感、特异,是诊断鸡法氏囊病的有效方法。     

不同玉米品种与大豆带状复种模式氮素吸收利用分析

为科学利用大豆的生物固氮作用,筛选玉米大豆带状复种模式下最佳组合,本试验以‘大丰26’(IC1)、‘大丰30’(IC2)、‘强盛51’(IC3)及‘强盛388’(IC4)为实验材料,采用单因素随机区组长期定位试验测得各玉米品种氮素利用及产量数据。结果表明：玉米大豆带状复种模式下玉米产量及地上部生物量均表现为IC2>IC3>IC4>IC1 (P<0.05)。相比IC1、IC3及IC4处理,IC2处理下年平均氮素积累量、氮素农学利用率、氮素生理利用率及氮素偏生产率分别显著增加了10.8%、11.0%、15.3%;17.3%、32.3%、26.2%;36.8%、34.9%、30.1%;18.8%、20.6%、12.5%,而IC2处理年平均氮素收获指数较IC4处理显著降低4.6个百分点(P<0.05);此外,氮素农学利用率、氮素生理利用率、氮素收获指数与产量呈极显著正相关(P<0.05)。综合表明,‘大丰30’与大豆带状复种能够显著提高作物产量及氮素利用率,可作为山西省最优组合推广。     

比色法快速测定土壤含水量

为了建立一种准确、快速、低成本的土壤含水量的检测方法,适于在田间地头和基层实验室推广应用。笔者采用分光光度法进行土壤含水量检测,操作步骤简单,测试速度快,1 个样品的测试时间可控制在5 min 以内。结果表明：该体系的最大吸收波长为660 nm;显色剂的最佳浓度为3.5 g/L、最佳用量为10 mL;当Cl-浓度≤0.45 mg/L（相当于土壤中Cl-为0.45 mg/kg）时对该体系产生的误差≤1.4%,而土壤中的氯离子含量均值为0.1 mg/kg,因此,满足绝大多数土壤的检测。该法与烘干法相比,检测结果绝对误差可控制在3%以内,基本不受土壤类型和化学成分等因素的影响。该法作为一种快速、便捷检测土壤含水量的方法可行,具有推广价值和普及应用优势。     

动物饲料中有害微生物的快速检测方法

饲料中有害微生物病原体的污染影响着饲料全球化自由贸易的发展和动物食品的安全,并成为关注的焦点。主要介绍了饲料中有害微生物的危害及其快速检测方法,为了更好地控制饲料生产和销售全过程的安全,从饲料生产的源头控制有害微生物对动物的危害,进而减少有害微生物通过动物进入人的食物链。     

玉米样品中转基因玉米Bt176含量检测

根据其检测特异性,转基因产品检测技术可分为筛选、基因、构建和转化体特异性检测四类.由于转化体特异性检测方法的具有高度特异性,目前,一些发达国家对于转基因产品检测方法正逐步过渡到转化体特异性序列的检测方法.本研究针对转基因玉米Bt176的外源基因3'端与玉米基因组DNA相接区序列设计具有转化体特异性的引物和荧光探针.利用实时荧光定量PCR,以已知Bt176含量样品为标准样品建立内外源基因标准曲线,利用该标准曲线对多个玉米样品Bt176玉米成分含量进行检测,结果显示该方法检测结果准确,检测特异性强,Bt176玉米检测极限浓度达到0.001 ng/μL.同时该方法操作简单,适合转基因样品大批量检测.