2018年新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体检测与分析

为了解2018年新疆部分地区猪瘟病毒抗体水平,笔者采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对采自7家规模化猪场不同日龄猪的321份血清样品进行猪瘟抗体检测与分析。结果显示,猪瘟病毒抗体平均阳性率为84.11%(270/321),高于国家规定标准(70%),平均阻断率为66.60±24.44。各猪场间猪瘟病毒抗体水平差异极显著。各日龄段猪群抗体的阳性率在60%～100%之间,存在一定差异。保育猪阳性率最低(为60%),且低于国家规定标准(70%),其他各日龄段猪群抗体的阳性率均在80%以上。结果表明,在新疆地区7个规模化猪场中,有6个猪场的猪瘟病毒抗体阳性率能达到国家标准(70%),但离散度普遍较高,需要制定更加合理的免疫程序。     

新疆石河子地区规模化猪场猪瘟抗体检测及分析

为了解新疆石河子地区猪场猪瘟病毒(CSFV)抗体水平,试验从新疆石河子地区的12个不同规模猪场共采血样743份,采用间接ELISA(酶联免疫吸附试验)法检测CSFV的抗体水平。结果发现,该地区CSFV抗体平均阳性率为85.87%(638/743),免疫抗体阳性率超过80.00%的猪场占75%,各猪场抗体水平差异极显著(p0.01)。结果表明石河子地区CSFV抗体水平较高,该结果可为新疆石河子地区猪瘟防疫工作提供一定的参考。     

2021 年新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体检测及分析

为了解2021年新疆部分地区规模化猪场的猪瘟病毒(CSFV)抗体水平,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自新疆6个地区13个规模化猪场的513份血清样品进行猪瘟病毒抗体水平检测。结果显示,CSFV抗体平均阳性率为73.88%(379/513),高于国家规定标准(70%);除1号和3号地区外,其余4个地区的CSFV抗体平均阳性率均达到国家规定标准;61.5%(8/13)规模化猪场的CSFV抗体阳性率高于国家规定水平,有3个养殖场CSFV抗体阳性率较低,且抗体离散度较大。表明新疆部分地区规模化猪场的CSFV整体免疫效果较好,不同地区及不同养殖场间CSFV抗体水平存在明显差异,个别地区和养殖场的CSF发病风险高,需对现有的免疫程序进行调整和完善。本试验可为新疆部分地区的CSFV防控工作提供一定的参考。     

用反应干扰法检测猪瘟病毒及其抗体

研究出一种检测猪瘟病毒（ＨＣＶ）及其抗体的新方法，首次证实了ＨＣＶ对某些ＨＣＶ株产生的干扰素（ＩＦＮ）有抑制作用。感染ＨＣＶ的猪肾细胞培养物不产生ＩＦＮ，即使加入ＩＦＮ诱生剂也不产生ＩＦＮ，而感染ＨＣＶ的细胞对ＩＦＮ的敏感性不受影响。基于上述结果，建立了一种反向干扰法。此法通过水泡性口炎病毒（ＶＳＶ）产生的ＣＰＥ来检测ＨＣＶ的感染滴度，即在猪肾细胞培养物中，用ＨＣＶ ＧＰＥ＾－株对ＶＳＶ的干扰而产     

新疆部分地区猪瘟病毒抗体水平检测及分析

为了解2019—2020年新疆部分地区猪瘟病毒（CSFV）抗体水平,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对采自6家规模化猪场不同类别猪群的1 238份血清样品进行猪瘟（CSF）抗体检测与分析。结果显示,CSFV抗体平均阳性率为85.70%(1 061/1 238),高于国家规定标准（70%）。在各猪场中,B场的平均阻断率最高,为70.26%,D场的平均阻断率最低,为61.00%;D猪场的平均阻断率与A、B、C、E场存在显著差异（P<0.05）。各类别猪群中,繁殖母猪的平均阻断率最高,为74.05%,保育猪的平均阻断率最低,为50.91%;肥育猪的平均阻断率与哺乳仔猪、保育猪、后备猪、繁殖母猪、种公猪存在显著差异（P<0.05）。结果表明,6个猪场的猪瘟病毒抗体阳性率都能达到国家标准（70%）,但哺乳仔猪、保育猪、肥育猪需要制定更加合理的免疫程序。     

猪瘟病毒阳性血清的猪瘟抗体检测与分析

为掌握猪瘟病毒阳性血清的猪瘟抗体水平分布情况,应用美国IDEXX公司的猪瘟病毒抗体检测试剂盒对江苏省农业科学院动物疫病诊断检测中心临床门诊近期收集的经PCR检测为猪瘟病毒阳性的26份血清进行猪瘟抗体水平的检测,以期为猪场猪瘟的有效防控提供科学数据参考。结果显示:猪瘟抗体阳性率为26.9%,阴性率为57.7%,可疑率为15.4%,抗体阻断率平均值为28.0%,且78.6%的猪瘟抗体阴性血清阻断率小于10%,即不同猪瘟抗体水平的血清均可检出猪瘟病毒,但猪瘟抗体阻断率小于10%的血清所占比例最大,达42.3%。因此,猪场在日常的猪瘟抗体检测中,如果发现猪瘟抗体阻断率小于10%的猪只所占比例越大,则预示着猪群中猪瘟带毒的比例越高。     

猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0 μg/mL和1:200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37 ℃ 1 h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1:10 000和37 ℃ 45 min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。     

猪瘟病毒垂直感染的检测

猪瘟是一种急性、高度接触性传染的一种重要传染病。近年来猪瘟流行的方式发生了改变，典型猪瘟逐渐减少，非典型猪瘟逐渐增多，表现怀孕母猪流产，产死胎、木乃伊和病弱的仔猪等，尤其是新生仔猪猪瘟，临床症状不十分明显，但发病率、病死率较高，严重危害养猪业的发展。关于新生仔猪猪瘟的发生，多认为是母猪怀孕期间感染猪瘟病毒而通过垂直传播的方式引起仔猪感染，但到目前为止未见有关新生仔猪垂直感染猪瘟病毒的直接证据。     

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较试验

目前国内外的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒种类繁多,为了给实际使用提供参考依据,用猪瘟病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺,比较了14种国内外猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的符合率。结果表明,6种阻断ELISA试剂盒符合率均可达到100%,在敏感性和特异性上整体优于间接ELISA试剂盒。     

猪瘟病毒化学发光抗体检测方法的建立与应用

旨在建立猪瘟病毒(CSFV)化学发光抗体检测方法,本研究以CSFV E2蛋白作为包被抗原,山羊抗猪IgG-HRP抗体作为酶标抗体,鲁米诺为底物溶液,优化检测方法,成功建立CSFV化学发光抗体检测方法.该方法能在室温20 min内完成对CSFV抗体血清特异性检测,灵敏度与商品化CSFV抗体检测试剂盒相当,且与A型口蹄疫病...     

Development and Optimization of Indirect ELISA Detection Method of Classical Swine Fever Virus Antibody

In this study,through a series of screening and optimization of reactions condition,an indirect ELISA method was developed for detections the antibodies against classical swine fever virus (CSFV) with the purified recombinant CSFV E2 protein.The results showed that the optimal concentration for coating antigen was 1.0 μg/mL and incubated at 37 ℃ for 1 h.The proper serum sample was diluted by 1:200 and the sealing time was 37 ℃ for 1 h.Enzyme labeled second antibody was diluted by 1:10 000 and the reaction time was 45 min incubating at 37 ℃.The D450 nm<0.30 of sample defined as negative of CSFV antibody in the serum sample.The intra-batch and inter-batch variation coefficients were 4.8% and 6.9%,respectively.It indicated that the method in this study had a high stability.Specific test showed that the indirect ELISA had no crossing reactions with the antibodies against PRV,PRRSV,PCV and PPV.80 serum samples were detected in this study,the positive coincidence rate of indirect ELISA was 83.58%,the negative coincidence rate was 76.92%,and the total coincidence rate was 80.25% compared to the results of import blocking ELISA kit.The results suggested that the established indirect ELISA method in this study had an excellent clinical application.     

猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析

猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心，猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担了国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01），全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品，并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样，由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断，并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次，若补测结果仍为“不满意”，则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家，初测满意率为92.23%，初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明，参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果，可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题，参试单位可以及时纠正错误，进一步提升猪瘟抗体的检测能力。     

Analysis of National Proficiency Testing Program for Classical Swine Fever Virus Antibody Detection by ELISA

Vaccination is the key strategy to prevent and control classical swine fever in China. Detection of vaccine-induced antibody by ELISA is the main method to assess the efficacy of vaccination. In order to evaluate the ability of individual laboratories for antibody detection against classical swine fever virus, Certification and Accreditation of the People's Republic of China organized the national proficiency testing program “Diagnostic Techniques for Classical Swine Fever” (CNCA-19-A01). The National/OIE Reference Laboratory for Classical Swine Fever (NRLCSF) that affiliated to China Institute of Veterinary Drug Control is responsible for the implementation of the program. Positive and negative samples were prepared and numbered randomly. Each participant received 4 different samples, and then the samples were tested according to their selected ELISA methods. All participants should submit their test results and the original reports to NRLCSF. If the results is unsatisfied, the participant will have another chance to retest. If the result is still unsatisfied, the participant will be considered unqualified for CSFV antibody detection. One hundred and three institutions participated this program. The accurate rate is 92.23% (95/103) for the first round of test, and 100% for the first and second tests. This result demonstrated that all participate laboratories provide competence for the detection of CSFV antibody and they could meet the requirement for CSFV diagnosis and surveillance. This proficiency testing program could help participants to investigate the reason for disagreement and implement their deficiencies.     

模猪场猪瘟野毒感染情况调查

利用ELISA方法对广西6个规模猪场送检的1626份猪血清进行猪瘟野毒感染情况调查。结果6个规模猪场均存在猪瘟野毒感染,其中母猪感染率为7.86%~29.21%,平均为17.52%,种公猪感染率为0%~23.52%,平均为11.83%,育肥猪感染率为5%~22.45%,平均为15.5%,断奶仔猪感染率为8.24%~18.57%,平均为12.69%。此检测结果与猪场临床发病情况基本一致,病猪多表现为繁殖障碍型、温和型的非典型猪瘟。     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

将纯化后的猪瘟病毒免疫4只SPF级BALB/c小鼠,无菌取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经半固体培养基克隆化和间接ELISA筛选,最终获得了4株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果显示4株单克隆抗体效价均较高,并与其他病毒及PK-15细胞培养物无交叉反应。Western blotting结果证实3株单克隆抗体可特异性识别猪瘟病毒。间接免疫荧光试验可在细胞膜内观察到特异性绿色荧光,表明3株单克隆抗体与猪瘟病毒具有良好的反应性。该研究为猪瘟病毒新型诊断试剂开发奠定了基础。     

鉴别非洲猪瘟病毒和猪瘟病毒野毒株二重TaqMan MGB实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法,用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针,经优化反应条件,建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法,验证方法的敏感性、特异性和稳定性,对50份临床样品进行检测,并与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法进行比较分析。结果显示：建立的鉴别ASFV和CSFV野毒株二重FQ-PCR检测方法在10⁰~10⁶拷贝·μL^-1模板范围内有良好的线性关系;对ASFV和CSFV基因出现阳性扩增信号,但对猪瘟病毒疫苗株、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、副猪嗜血杆菌等病原对照未出现扩增;批内、批间试验变异系数在1.18%~2.08%,重复性良好;对ASFV和CSFV的最低检测模板浓度均为10拷贝·μL^-1;利用建立的二重FQ-PCR方法对50份临床样品进行检测,检测结果与猪瘟国标方法及OIE推荐的非洲猪瘟检测方法结果完全一致。本研究成功建立了鉴别ASFV和CSFV野毒株二重TaqMan MGB FQ-PCR方法,为ASFV和CSFV野毒株的鉴别诊断提供了快速、敏感、特异且能满足临床检测需求的检测方法。     

间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用

间接ELISA以其灵敏、特异、简单、快速、稳定、高通量及易于操作等优点,在猪瘟免疫猪群抗体水平监测、猪瘟的快速诊断与流行病学调查中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就间接ELISA方法及其在猪瘟诊断上的应用概况做一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

猪瘟病毒核酸检测国家级能力验证结果分析

对猪瘟病毒核酸的检测是实验室检测猪瘟感染的主要手段。为全面考察动物疫病检测机构对猪瘟病毒核酸的检测能力，国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织了A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01），该项目由中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担。参考实验室负责制备了检测样品，并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样，不限定检测方法，参试实验室对各个盲样进行定性判断，并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测一次，若补测结果仍为“不满意”，则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次猪瘟病毒核酸检测的实验室共有97家，初测满意率为93.81%，初测和补测的总体满意率为98.97%。此次能力验证结果表明，我国90%以上猪瘟检测机构能够提供正确的检测结果，可以满足猪瘟诊断和监测的需求。对不达标机构，通过本次能力验证项目查找出了存在的问题，帮助该单位及时纠正错误，进一步提升猪瘟诊断能力。