秋水仙素诱导甘菊多倍体研究

以甘菊种子为试验材料,研究了不同秋水仙素浓度和处理时间对甘菊多倍体诱导的影响。结果表明:500mg/L的秋水仙素水溶液浸渍种子12h,变异率为23%,达到了极显著差异。根尖染色体压片检查表明,四倍体染色体数为2n=4x=36,并且获得了同源四倍体甘菊1株(2n=4x=36)。四倍体植株表现出叶片下表皮气孔保卫细胞变大,叶绿体数变多,叶片变小,花径变大,舌状花数目减少,管状花数目增多。     

秋水仙素诱导地锦多倍体研究

用不同浓度秋水仙素处理不同萌发时期地锦体细胞胚胎及丛生芽苗诱导多倍体,对多倍体植株进行染色体数目及稳定性检测。结果表明:(1)秋水仙素对地锦体胚及丛生芽的生长有不同程度抑制作用,对根系生长的抑制尤为明显。以0.05%秋水仙素处理48h以上对地锦体胚萌发有显著抑制作用,0.1%浓度处理96h产生完全抑制。(2)0.05%秋水仙素处理1cm体胚48h可诱导3.3%地锦体胚产生多倍体嵌合植株,多倍细胞比率40%。以0.1%秋水仙素处理地锦丛生芽24h,多倍体诱导率可达13.3%,多倍细胞比率62.5%~75%。说明秋水仙素处理丛生芽效果要好于处理体胚。(3)本实验诱导的多倍体植株全为混倍体,多倍细胞占40%~75%,但在无性增殖中有逐代下降趋势。(4)多倍体植株中出现4裂和5裂叶片的变异体。     

秋水仙素诱导石斛多倍体的初步研究

本实验以秋水仙素为诱导剂,对石斛杂交种Dendrobium utopia ‘Messenger’×Den. whiterabbit ‘Sakurahime’的二倍体试管苗进行了多倍体诱导、细胞学观察及染色体鉴定等研究。结果表明,当秋水仙素浓度为0.4 ~0.6mg/L时石斛的诱导率较高,最高时可达62.2%。变异植株的叶片变短变厚,假鳞茎明显增粗。在显微镜下观察到变异株的气孔长度和宽度约增加21.44%和28.30%,保卫细胞的长度和宽度约增加30.88%和24.98%。     

秋水仙素处理兰花原球茎对其生长和诱变效应的影响

本研究表明 ,秋水仙素处理对原球茎生长和分化起抑制作用 ;浓度越高 ,抑制作用越强 ,处理时间不同 ,抑制作用也不同。秋水仙素处理后的再生植株群体中 ,平均变异植株的百分率为 9 0 6% ,是对照材料的 3 7倍。变异植株的类型包括植株粗壮、多叶、叶片变宽、变厚、叶片墨绿色、矮化、线艺和叶艺等。处理浓度为 0 1 0 %、时间为 48h时 ,植株变异率最高。     

叠氮化钠诱变对离体蝴蝶兰类原球茎生理的影响

以2、4、6和8mmol/L的叠氮化钠浸泡6h处理蝴蝶兰类原球茎后进行组织培养,测定了处理组和对照的蝴蝶兰类原球茎中脯氨酸、丙二醛和可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力。结果表明,经叠氮化钠处理的类原球茎中的超氧化物歧化酶活力、脯氨酸和丙二醛含量均有上升,而过氧化氢酶活力与可溶性糖含量均有下降,并呈现浓度梯度效应。叠氮化钠诱变的半致死剂量介于4～8mmol/L之间,其中4mmol/L的叠氮化钠对蝴蝶兰类原球茎生理损伤较小,因此认为4mmol/L的叠氮化钠是诱变蝴蝶兰类原球茎较为合理的浓度。     

蝴蝶兰类原球茎DNA总甲基化水平测定方法的研究

探讨DNA提取中不同蛋白质变性剂对胞嘧啶(C)和5-甲基胞嘧啶(5mC)色谱的影响,建立蝴蝶兰类原球茎DNA总甲基化水平的HPLC测定方法。本实验采用2种CTAB法(蛋白质变性剂不含酚和含酚)提取基因组DNA,水解后分别以反相HPLC测定C和5mC含量。色谱条件为:色谱柱HypersilBDS Cl8,甲醇-10mmol/L戊烷磺酸钠-三乙胺(6∶90∶0.2,V/V)为流动相,流速0.5ml/min,检测波长273nm。应用不含酚变性剂所提取DNA的水解液C和5mC能较有效分离。以本试验优化的DNA提取方法和HPLC色谱条件,基因组DNA水解液的C和5mC色谱可得到较好的效果。     

快中子辐射对蝴蝶兰原球茎和茎段增殖分化的影响

为了获得蝴蝶兰新种质以及开辟新的蝴蝶兰育种方法,利用快中子脉冲堆对蝴蝶兰不同品种原球茎和幼苗茎段进行辐照处理,结果表明:通过对处理材料的回归分析得到,火鸟原球茎的半致死注量为3279×108·cm-2,内山姑娘原球茎的半致死注量为4063×108·cm-2,火鸟茎段的半致死注量为2239×108·cm-2,内山姑娘茎段的半致死注量为2298×108·cm-2。辐射敏感性表现为火鸟内山姑娘,幼苗茎段原球茎。对于原球茎,辐照注量小于600×108·cm-2,对其增殖和分化有一定的促进作用;对于茎段,辐照注量小于600×108·cm-2,对其所形成的幼苗的生根没有影响,但小于300×108·cm-2,对所形成幼苗的增殖有促进作用。高注量(2500×108·cm-2)辐照对原球茎的增殖和分化以及对茎段所形成的幼苗的增殖和生根均有显著的抑制作用。     

杉木多倍体变异苗诱导及倍性鉴定

为了探究秋水仙素处理对杉木萌动种子的诱变效应,以3种杉木种子为材料,用0.9%的秋水仙素溶液浸泡处理后播种,60d后统计变异苗得率并用流式细胞仪检测变异苗不同部位的细胞倍性。结果表明,经秋水仙素溶液浸泡处理后,3种来源的杉木种子变异苗得率差异显著,全同胞种子Z3#得率最高,为23.45%;3种来源的杉木种子经秋水仙素处理后所得的变异苗均表现为胚根短缩,下胚轴下部明显膨大。流式细胞仪检测表明,胚根部分57.2%的细胞为混倍体细胞,下胚轴下部42.04%的细胞为四倍体细胞,下胚轴中部四倍体细胞所占比例为9.15%,下胚轴上部和子叶部分的细胞均为二倍体细胞;秋水仙素溶液浸泡种子可诱导获得表型特征及细胞倍性发生明显变异的变异苗。本研究结果为进一步开展杉木同源多倍体新种质的创制奠定了基础。     

秋水仙素对黑麦有丝分裂及多倍体诱导的影响

本文研究了秋水仙素在不同浓度(0.01%、0.05%、0.10%、0.15%、0.20%)和不同处理时间(12、24、36、48、60和72h)对黑麦根尖细胞染色体、中期分裂指数、细胞加倍指数的影响。结果表明,秋水仙素处理使黑麦根尖细胞内染色体数目发生了变化,观察到的细胞内染色体数有14、28及56条不等;0.15%的秋水仙素处理24h,细胞的中期分裂指数最大,达到0.202%,同浓度秋水仙素处理36h,细胞加倍指数最高,达到0.096%。     

不同脱水条件下蝴蝶兰类原球茎的失水程度与耐脱水性

为了解蝴蝶兰类原球茎(PLB)耐脱水性规律,本研究通过取一定数目、鲜重的PLB样品分别经不同相对湿度或时间脱水后进行相关测定,结果表明经相对湿度52%下脱水2d的PLB含水率13.31g/gdw(脱水重/鲜重比值40.62%)是质膜损伤和胁迫致死的临界含水率。虽然不同脱水条件使材料达到接近的含水率,但较高湿度脱水对PLB组织细胞伤害较小。相较于含水率指标,PLB脱水重/鲜重比值与相对电导率、成活率有良好的线性关系。进一步的研究表明PLB脱水处理前用水浸泡不能明显提高脱水后的PLB脱水重/鲜重比值,但能明显提高成活率。从实验结果我们可以得出,慢速脱水蝴蝶兰PLB可减轻脱水损伤,降低脱水损伤对PLB起始含水率的敏感性;采用PLB脱水重/鲜重比值替代含水率表示材料失水程度是可取的。     

蝴蝶兰的种子培养

在MS，KC，花宝三种基本培养基中，MS最适合蝴蝶兰种子的萌发，加香蕉汁150g/L可明显提高种子发芽率并促进幼苗生长；MS＋BA 3mg/L NAA 0.05mg/L也有利于蝴蝶兰种子的萌发及幼苗生长；活性炭可有效防止幼苗变褐死亡；多效唑1．5mg/L可以促进幼苗根的形成，使试管苗移载成活率达95％以上。     

黄毛草莓叶片离体再生及其同源四倍体的诱导

为探究黄毛草莓叶片离体再生率及其同源四倍体的诱导效果,以黄毛草莓试管苗叶片和离体芽尖为材料,研究了不同激素配比对叶片离体再生的影响以及不同秋水仙素浓度和处理时间对其染色体的加倍效果。结果表明,黄毛草莓离体叶片在MS+1.0 mg·L-1TDZ+0.1 mg·L-1IBA的培养基上不定芽的再生率最高,为73.19%;0.15%秋水仙素处理草莓离体芽尖48 h诱导效果最佳,诱导率达13.33%,获得了经染色体计数确定为四倍体的株系12个,四倍体基因组DNA含量发生了倍增,染色体数量由14(2n=2x=14)条增加到28(2n=4x=28)条。与二倍体相比,四倍体黄毛草莓叶片更大更厚,颜色更深,叶形指数减小,气孔变大,叶绿素含量升高,整体植株生长势较强。黄毛草莓同源四倍体株系的获得为黄毛草莓的进一步研究奠定了基础。     

秋水仙素诱导青岛百合四倍体研究

以青岛百合试管苗为试验材料,采用浸泡法和混培法研究了秋水仙素对青岛百合进行染色体加倍的诱导效果。结果表明:以0.05 %的秋水仙素浸泡处理24h的诱导效果最佳,诱导频率高达53.3%;经秋水仙素诱导的多倍体与正常二倍体植株比较,植株叶片变大,根系粗壮,气孔显著增大而单位面积气孔数减少。对变异材料的细胞学研究发现, 四倍体植株的染色体数目为2n=4x=48。     

紫锥菊多倍体诱导与鉴定

本实验以紫锥菊愈伤组织上刚分化出的不定芽为材料,用不同浓度秋水仙素溶液对其进行诱导,确定最佳处理浓度和处理时间,并对诱导的多倍体与二倍体进行形态、显微、染色体及过氧化氢酶（CAT）活性的比较鉴定。结果表明：0．025％秋水仙素浓度处理24h的诱导效果最好,诱导率达42．85％;多倍体植株叶片肥厚、根粗壮,气孔面积极显著地大于二倍体植株,染色体数从24～28条不等,CAT平均酶活性是二倍体的2．1倍。     

利用抑制消减杂交法筛选低夜温诱导的蝴蝶兰生殖发育相关基因

花芽的发育是花品质形成与调控的生物学基础,温度是影响蝴蝶兰(Phalaenopsis hybrida)花芽分化与发育乃至花朵开放的重要因素。为鉴定低夜温诱导蝴蝶兰花梗芽分化和发育相关基因,以蝴蝶兰兄弟女孩品种为材料,利用抑制削减杂交技术,构建低夜温诱导的花梗芽与营养生长期顶叶的正向差减文库。PCR验证后,挑取300个阳性单克隆进行测序和分析,共获得207条非冗余序列(Gen Bank登录号:JK720764~JK720970)。这些基因覆盖了宽广功能范围的开花相关基因,提供了从营养生长期向生殖生长期转变相关分子机理方面的有益信息。Real-timePCR检测了具不同功能的23个基因在营养生长期顶叶和不同大小花梗芽中的表达水平。这些基因的表达量变化趋势不同,但在一定大小花梗芽中的表达量较营养生长期顶叶均有上调。与在营养生长期顶叶中的表达量相比,flowering locusT(FT)、APETALA1(AP1)、茉莉酮酸酯-O-甲基转移酶(JMT)基因和NADH泛醌氧化还原酶基因在各阶段花梗芽中的表达量均显著上调,表明这4个基因可能在低夜温诱导蝴蝶兰花梗芽分化和发育中起重要作用。本研究为深入探究低夜温诱导蝴蝶兰开花的分子机理提供了重要的基础资料。     

木薯同源四倍体的离体诱导及鉴定

为获得木薯新品种四倍体种质资源,以木薯主栽品种南植199组培苗单芽茎段为试验材料,利用秋水仙素诱导同源四倍体,统计不同浓度秋水仙素对外植体成活率和诱导效果的影响,并对二倍体与同源四倍体进行形态学、解剖学和生理生化方面的比较。结果表明,外植体成活率随秋水仙素浓度升高而降低,0.05~0.10 g·L^-1是秋水仙素诱导木薯同源四倍体的适宜浓度范围。本研究获得了10个同源四倍体株系和1个嵌合体株系。与二倍体木薯相比,四倍体木薯叶片增厚,叶型变宽,保卫细胞增大,叶绿素含量增加。本研究拓宽了木薯种质资源,并为诱导鉴定木薯四倍体提供了一套高效的技术方法。     

Ca^2＋、ABA预处理蝴蝶兰类原球茎的脱水保护系统比较及信号传导关系

CaCl2和ABA溶液及两者联合分别预处理蝴蝶兰类原球茎（PLB）后脱水,对比PLB脱水前后的成活率、脱水保护系统指标变化及Ca^2＋与ABA信号传导关系。结果表明,CaCl2和ABA溶液及两者联合预处理均能明显提高PLB脱水后的成活率。CaCl2和ABA溶液对可溶性糖、蔗糖、还原糖、SOD和总抗氧化能力有相同的效应趋势,对可溶性蛋白、热稳定蛋白含量及POD、CAT活性的作用趋势有所差异。ABA溶液提高PLB耐脱水性的能力被胞质Ca^2＋螯合剂BAPT～AM和钙调蛋白拮抗剂氯丙嗪所削弱,Ca^2＋预处理提高PLB耐脱水能力被ABA合成抑制剂环丙嘧啶醇削弱。在蝴蝶兰PLB的耐脱水性诱导中,Ca^2＋和ABA具有基本相同的生理生化基础,在信号传递中两者互相关联,CaCl2取代ABA用于提高PLB耐脱水性是可行的。