双峰驼染色体核型初步分析

我们采用双峰驼的外周血淋巴细胞培养方法。对其染色体进行了分析研究，研究结果表明，双峰驼的染色体数目为2n＝74。并初步摸索出一个比较易行的培养操作过程，为进一步开展骆驼遗传结构研究提供了参考材料。     

骆驼外周血液淋巴细胞培养及其染色体的初步观察

本文介绍了骆驼外周血液淋巴细胞的培养方法及其效果,并检查了六峰双峰驼(公母各三峰)的染色体。初步摸索出一个比较可行的培养操作规程,结果较为满意;淋巴细胞的分裂指数母驼为7.2％,公驼为13.2％。通过对骆驼染色体进行显微摄影和数目检查,证实了骆驼体细胞染色体(2n)为74,并为进一步开展骆驼遗传结构研究提供了参考数据。     

双峰驼黄体细胞的分离与培养

为了探索双峰驼黄体细胞的percoll液分离及体外培养方法,观察黄体细胞的生物学特性,采用胶原酶消化法从双峰驼黄体组织中分离并获得妊娠期双峰驼黄体细胞,通过形态学观察确定了大小黄体细胞的生长特性.结果表明:胶原酶消化可获得数量较多,生长状态良好的双峰驼黄体细胞,而小黄体细胞的数量远远多于大黄体细胞,其形态学和生物学特性具有典型类固醇分泌细胞的特征.试验建立的体外双峰驼黄体细胞原代培养的方法,所获细胞生物学特征稳定,纯度较高,适用于体外试验研究.     

家养双峰驼SRY基因的序列分析与拷贝数研究

为探究中国家养双峰驼SRY基因的序列以及群体间拷贝数变异,对7个中国家养双峰驼群体共94个个体的SRY基因部分序列进行测序,分析SRY基因序列与其他物种的相似性;并且以CYP2A基因为内参基因,运用实时荧光定量PCR技术检测SRY基因的拷贝数。结果表明,中国家养双峰驼与人、马、猪、羊及普通牛的SRY基因相似度分别为67.7%~68.1%、68.5%~69.4%、73.8%~74.4%、73.8%~74.8%、74.1%~74.8%。在家养双峰驼SRY基因的多个拷贝中,除1个拷贝外,其余拷贝的HMG序列与羊驼、人、马、猪、绵羊及普通牛的HMG序列相比,相似度分别为97.3%、84.2%、85.6%、86.3%、87.0%、85.6%。SRY基因在中国家养双峰驼Y染色体上以多拷贝形式存在,变幅为1~9个拷贝。表明中国家养双峰驼SRY基因的HMG序列是高度保守的,而且该基因属于多拷贝基因。     

基于Cytb基因的家养双峰驼分子系统发育研究

【目的】探讨我国家养双峰驼系统进化及其与野生双峰驼的进化关系,为科学评价、保护和利用我国双峰驼的遗传资源奠定基础。【方法】测定了37峰家养双峰驼线粒体细胞色素b(Cytb)的部分基因序列,并结合GenBank中已有的家养和野生双峰驼线粒体细胞色素b基因序列,对家养双峰驼进行系统发育分析。【结果】测得的家养双峰驼Cytb基因序列1 024 bp的位点中,有14个变异位点,核苷酸多样度(Pi)为0.002 27±0.001 27,共定义了11种单倍型,单倍型多样度(Hd)为0.820±0.044,平均核苷酸差异数(k)为2.327,表明家养双峰驼群体的Cytb基因遗传多样性比较丰富。构建的NJ系统进化树显示,家养双峰驼起源于同一母系,但与野生双峰驼不是同一母系起源。【结论】我国家养双峰驼的祖先与现存的野生双峰驼并非同一个亚种。     

苏尼特家养双峰驼mtDNA Cyt b基因和D-loop序列的遗传多样性

【目的】研究苏尼特家养双峰驼的遗传多样性,以全面揭示中国双峰驼的起源进化,为科学保护和利用我国的双峰驼遗传资源奠定基础。【方法】采集15峰苏尼特家养双峰驼(10峰雄驼和5峰雌驼)的血样,提取其DNA,采用PCR方法扩增线粒体DNA（mtDNA）细胞色素b (Cyt b)基因的全序列及D-loop的671 bp序列,进行遗传多样性分析,并结合GenBank中已有的双峰驼的mtDNA Cyt b基因序列和D-loop序列进行系统发育分析。【结果】苏尼特家养双峰驼mtDNA Cyt b基因中存在10个变异位点,共形成了7种单倍型,单倍型多样度为0.857±0.065,核苷酸多样度为0.001 94±0.002 70,平均核苷酸差异数为2.210;在D-loop的671 bp序列中,存在6个变异位点,共定义了6种单倍型,单倍型多样度为0.714±0.116,核苷酸多样度为0.002 53±0.002 75,平均核苷酸差异数为 1.695。基于Cyt b基因和D-loop序列进行的系统发育分析均显示,苏尼特家养双峰驼与野生双峰驼归于2个不同的母系世系,野生双峰驼不是苏尼特家养双峰驼的直接祖先。【结论】苏尼特家养双峰驼mtDNA Cyt b基因和D-loop序列遗传多态性均比较丰富;苏尼特家养双峰驼与野生双峰驼归于2个不同的母系世系,野生双峰驼不是苏尼特家养双峰驼的直接祖先;家养双峰驼内部存在着一定的遗传分化。     

基于比较基因组学分析的方法定位及注释双峰驼MHC基因

【目的】定位并注释双峰驼主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因序列,为进一步研究双峰驼MHC基因提供科学依据。【方法】运用比较基因组学方法,提取人类MHC(HLA)基因编码序列和牛MHC(BoLA)基因编码序列并分别与双峰驼转录本进行blastn基因序列比对,识别出相似度较高的scaffolds,通过分析HLA、BoLA基因序列比对在这些scaffolds上的位置顺序,对多条scaffolds进行拼接,得到双峰驼MHC的Pseudo chromosome;再分别提取HLA、BoLA全基因组序列与双峰驼已拼接的scaffolds进行基因组共线性分析,利用lastz建立起的Pseudo chromosome与HLA、BoLA全基因组序列的线性关系判断筛选出的scaffolds是否准确;然后通过分析MHC基因在两物种间的线性关系,在双峰驼参考基因组中提取出MHC基因序列,并对这些序列进行基因注释;最后根据得到的双峰驼MHC基因绘制系统进化树,研究其基因间的进化关系。【结果】通过对HLA、BoLA基因编码序列与双峰驼转录本用blastn进行序列比对,识别出了相似度较高的3条scaffolds,即NW_011511766.1(全长4.1M)、NW_011515227.1(全长1.2M)和NW_011514613.1(全长15K),对其拼接得到双峰驼MHC的Pseudo chromosome;利用lastz共线性分析,识别出HLA基因序列和BoLA基因序列并比对出其在双峰驼MHC基因的共线性区域。该区域与拼接得到的Pseudo chromosome一致,证明筛选出的scaffolds是准确的。并且发现Class-Ⅰ类和Class-Ⅲ类基因集中分布在NW_011515227.1上,而Class-Ⅱ类基因集中分布在NW_011511766.1和NW_011514613.1上,进一步分析得知Class-Ⅱ类基因主要分布在NW_011511766.1的3.5—4.1M的位置;将存在共线性区域的序列提取出来,与比对到双峰驼上的MHC基因的编码序列进行blat分析,结果在双峰驼基因组中共识别出24个与牛BoLA基因高度相似的基因,其中Ⅰ类基因1个,Ⅱ类10个,Ⅲ类基因13个。对双峰驼这24个MHC基因进行信息注释并绘制系统进化树,结果显示注释的Class-Ⅰ类和Class-Ⅱ类基因在同一分支。【结论】通过比较基因组学方法定位并注释了双峰驼的MHC基因,将双峰驼MHC基因序列定位到了3条scaffolds上,找到并注释了24个MHC基因,绘制了双峰驼MHC的Pseudo chromosome,为进一步研究双峰驼MHC基因奠定了理论基础。     

双峰驼瘤胃微生物总DNA的提取与纯化

[目的]提取高质量的双峰驼瘤胃微生物总DNA,为采用免培养技术研究双峰驼瘤胃微生物奠定基础.[方法]采集双峰驼瘤胃内容物,用酶解(溶菌酶、蛋白酶K)、冻融和表面活性剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、溴化十六烷三甲基铵(Cetyltrimethyl Ammonium Bromide,CTAB)多种处理相结合,提取微生物总DNA,并用Omega Gel Extraction kit纯化.[结果]提取到的瘤胃微生物总DNA片段大于23 kb,纯化后的DNA可用于PCR,酶切及克隆等进一步的分子生物学研究.[结论]用该提取方法得到的总DNA能够满足分子生物学试验的要求.     

双峰驼体尺性状的聚类分析

[目的]了解双峰驼的体尺性状.[方法]选取阿拉善戈壁双峰驼、苏尼特双峰驼、阿拉善沙漠双峰驼、青海双峰驼4个地方双峰驼共计161峰,测量其体长、体高、体重、胸围、管围等性状,利用SPSS软件对以上5个体尺指标进行聚类分析.[结果]双峰驼的体高、体长、胸围、管围、体重之间的相关系数均达到极显著水平,尤其是体重与胸围、体重与体长的相关系数为强正相关.双峰驼的体尺性状聚类结果为3亚类,第1亚类包括体重、体长、胸围,第2亚类只包括体高,第3亚类只包括管围.[结论]试验结果为双峰驼选种选育提供了理论依据.     

野生双峰驼的圈养报告

对圈养条件下野生双峰驼的基本形态特征,饲养、繁殖以及疾病防治等方面进行了研究,并对圈养野生双峰驼和家驼在体形特征方面做了比较分析。     

山羊与绵羊的染色体核型比较

采用外周血淋巴细胞培养法 ,对关中奶山羊和同羊的染色体核型进行分析。结果表明 ,关中奶山羊染色体数 2 n=60 ,其中有 2 9对常染色体和 1对性染色体 ,常染色体都为端部着丝点染色体。X染色体为第二对最大的端部着丝点染色体 ,Y染色体为唯一的、最小的中部着丝点染色体。同羊二倍体染色体数 2 n=5 4,其中包括 2 6对常染色体和 1对性染色体 ,常染色体中有 3对为中着丝点染色体 ,2 3对为端着丝点染色体 ,X染色体为最大的近端着丝点染色体 ,Y染色体为最小的亚中着丝点染色体     

双峰驼染色体组型分析

我们采用外周血淋巴细胞培养方法对双峰驼的染色体进行了分析。结果初步证实染色体数为2n=74,常染色体36对,臂数NF=132;性染色体一对,组成为xx/xy型。36对常染色体中有15对为亚端着丝点,9对为亚中着丝点,6对端部着丝点和6对中部着丝点。x染色体为中部着丝点,y染色体为端部着丝点。     

蒙古马染色体核型初步分析

本文采用外周血淋巴细胞短期培养方法,对蒙古马染色体进行了核型分析。分析结果表明,蒙古马的二倍体细胞染色体数为2n=64。其中有31对常染色体和1对性染色体(XY型)。31对常染色体中有13对为中部着丝点染色体和18对为端都着丝点染色体。X为近中着丝点染色体,Y为端部着丝点染色体。     

普氏野马染色体核型及多态性的研究

本文对普氏野马的染色体核型及多态性作了观察。结果表明，在二倍体细胞中有３２对常染色体，总臂数（ＮＦ）为８８，以臂比值将它们分Ａ、Ｂ、Ｃ３组。野马与家马比较，常染体总臂数相同，差别在于家马多一对中部着丝点染色体。     

青山羊染色体G—带型研究

本文采用外周血淋巴细胞培养技术,分析了青山羊染色体核型和 G—带带型,结果是:青山羊二倍体染色体2n=60,常染色体全部为端着丝粒染色体,X 染色体为第三号,是端着丝粒染色体,Y 染色体最小,是中部着丝粒染色体,用胰酶吉姆萨带显示青山羊 G—带型,并绘制了青山羊中期染色体 G—带模式图。     

特种野猪染色体核型研究

[目的]为特种野猪的遗传学研究、基因定位提供依据。[方法]用外周血培养方法制备染色体标本,对宁波特种野猪的染色体核型进行了分析。[结果]特种野猪染色体数目为38,其中,A组由1~5号5对染色体组成,属于近中着丝点染色体(SM);B组由6~7号2对染色体组成,属于近端部着丝点染色体(ST);C组由8~13号6对染色体组成,属于中部着丝点染色体(M);D组由14~18号5对染色体组成,属于端部着丝点染色体(T);X染色体为近中部着丝点染色体;Y染色体为中部着丝点染色体。特种野猪染色体数目与家猪相同,但核型有些差异。特种野猪的中部着丝点染色体有6对,端部着丝点染色体有5对,与家猪的正好相反。[结论]特种野猪的核型可能是一些罗伯逊易位个体与正常核型个体间反复杂交,染色体重新组合的结果。     

海门白山羊染色体核型研究及C-带分析

采用外周血淋巴细胞培养及染色体分带技术,分析了海门白山羊的染色体核型与C-带。结果表明,海门白山羊二倍体染色体数为2n=60,常染色体和X染色体均为端部着丝粒染色体,X染色体的大小介于1号和2号染色体之间,Y染色体最小,为中部着丝粒染色体,公羊核型为60,XY,母羊为60,XX。大部分常染色体和X,Y染色体着丝粒部位显示阳性C-带,但不同染色体的阳性C-带区域大小不同。     

滩羊染色体组型的研究

应用血液白细胞培养法对滩羊的核型进行研究,结果证实滩羊染色体数2n=54,其中有26对常染色体和1对性染色体(xx/xy型)。26对常染色体中有3对为最大的中部着丝点染色体和23对端部着丝点染色体;x为最大的端部着丝点染色体,y为最小的中部着丝点染色体。我们初步认为湖羊、滩羊和蒙古羊的起源相同。     

关中马的染色体核型分析

采用外周血淋巴细胞培养法 ,对关中马的染色体核型进行了研究。结果表明 ,关中马的二倍体染色体数目为 2 n=6 4,公马核型为 6 4,XY;母马核型为 6 4,XX,包括 31对常染色体和 1对性染色体。 31对常染色体中 ,13对为中部或亚中部着丝点染色体 ,18对为端部着丝点染色体 ;1对性染色体中 ,X染色体为 1条第二大的亚中部着丝点染色体 ,Y染色体为最小的端部着丝点染色体。     

鸡冠鱼尉的染色体组型分析

采用脾脏细胞空气干燥法制片，Ｇｉｅｍｓａ染色，对生活于近海沿岸的滩涂鱼类鸡冠鱼尉染色体组型进行分析．其染色体数目２ｎ＝４８，ＮＦ＝７８，其中有９对中部着丝点染色体，９对亚中部着丝点染色体和６对端部着丝点染色体．未发现随体染色体和异形性染色体