17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-2(SBD-2)表达的可能信号通路研究

【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRNA表达水平的变化。【结果】10-8 mol/L 17β-雌二醇可显著上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2mRNA的表达(P<0.05);雌激素受体拮抗剂ICI182780、NF-κΒ阻断剂PDTC、PKC阻断剂H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-2的上调作用,PKA阻断剂KT-5720对17β-雌二醇介导的SBD-2上调无明显影响。【结论】17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2的表达由雌激素核受体、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导,而PKA不参与17β-雌二醇对SBD-2的上调作用。     

软鳍新光唇鱼在孤立环境下17β-雌二醇的分泌行为

17-β雌二醇在鱼类性发育过程中具有控制鱼类性别分化和生殖活动的重要作用。该试验通过检测养殖水体,发现当软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)进入孤立环境中时,水体中会出现较多的17β-雌二醇,而群居状态下无法检测到足够多的雌二醇。同时这种现象在不同时期也存在差异,繁殖期个体在孤立环境下的雌二醇环境浓度为(3.66±1.08)ng/L,远少于性发育期孤立环境下的个体的雌二醇分泌量(43.52±4.79)ng/L,但两个时期孤立状态下生活7d后的水体中17β-雌二醇含量均有显著下降(P0.05)。     

17β-雌二醇对半滑舌鳎性分化和生长的影响

试验将25日龄半滑舌鳎稚鱼放入不同浓度（1、3、10和30μg&#183;L^-1）的17β-雌二醇水溶液中,每天浸泡2h,连续处理65d。研究17β-雌二醇对半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Gunther）性分化、性比、生长和死亡率的影响。结果表明,17β-雌二醇使半滑舌鳎卵巢分化提前约5d,使精巢分化推迟20d;4种浓度17β-雌二醇处理组（1、3、10和30μg&#183;L^-1）的雌性率分别为74％、82％、88％和97％,与对照组相比差异显著（P〈0．05）。同时,17β-雌二醇处理对半滑舌鳎的早期生长和死亡率无显著影响。     

版纳微型猪发情周期外周血清促黄体素、孕酮、17β-雌二醇含量的变化

用放射免疫分析法测定了6头版纳微型猪母猪发情周期外周血清中促黄体素（LH）、孕酮和17β-雌二醇的含量和变化。血清 LH的含量,在黄体期其值很低,到发情开始后当天增至 3.85± 2.01ng/ml;孕酮含量的变化,在周期的黄体期,其值最高为22.0±2.54ng/ml,而在发情日最低,为0.183±0.023ng/ml;17β-雌二醇含量在发情前 1天达到高峰,为 39. 85± 12. 61ng/ml。     

雌激素对双齿围沙蚕性比、生长和卵母细胞发育的影响

将性未分化的双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis暴露在双酚A和17β-雌二醇两种雌激素下,研究了雌激素对双齿围沙蚕雌雄比例、个体生长、死亡率及卵母细胞发育的影响。结果表明,两种雌激素各浓度下的试验组沙蚕均为雌性。与对照组相比,双酚A浓度为50、100μg/L时,对沙蚕有极显著的促生长作用（P〈0.01）;浓度为10、150μg/L时,对沙蚕的促生长作用显著（P〈0.05）;浓度为200μg/L时,对沙蚕的促生长作用不明显;沙蚕的死亡率随双酚A浓度的提高而增加。与对照组相比,当17-β雌二醇浓度为1、5、15 mg/L时,对沙蚕有极显著的促生长作用（P〈0.01）;浓度为30 mg/L时,对沙蚕的促生长作用显著（P〈0.05）;浓度为45 mg/L时,对沙蚕的促生长作用不明显;随着浓度的提高,沙蚕的死亡率明显加大。双酚A浓度为10~150μg/L、17β-雌二醇浓度为1~30 mg/L时,对沙蚕卵母细胞的生长有明显的促进作用（P〈0.01）;而双酚A浓度为200μg/L（P〈0.05）和17β-雌二醇浓度为45 mg/L（P〈0.01）时对卵母细胞的生长有抑制作用。     

辣根过氧化物酶催化氧化17β-雌二醇的研究

[目的]优化辣根过氧化物酶（HRP）催化氧化17β-雌二醇（E2）的体系。[方法]研究反应体系pH值、反应温度、H2O2浓度、反应时间、HRP浓度和E2初始浓度对E2去除效果的影响。[结果]HRP能有效催化H2O2氧化水体中的E2。HRP酶催化氧化E2的适宜条件是：pH值为6.5,反应温度25℃,H2O2与E2摩尔反应计量比（MH2O2∶ME2）为1∶2。增大HRP和E2起始反应浓度,以及适度增加H2O2用量,反应速度会明显加快,但过量的H2O2会抑制HRP的催化活性,减小E2去除率。在[E2]初始=0.07342mmol/L,[HRP]=0.07342U/ml,pH值为6.5,反应温度为25℃和MH2O2∶ME2=1∶2条件下,反应60min,E2去除率达到94.8%。[结论]该研究可为提高H2O2氧化水体中E2的去除率提供科学依据。     

17β-雌二醇在土壤中迁移特征的研究

[目的]为了研究内源甾体雌激素在土壤中的迁移特征。[方法]以17β-雌二醇为对象,采用模拟土柱开展淋滤试验。[结果]表层土壤雌二醇在淋滤过程向深层土壤迁移,土壤有机质对雌二醇的迁移具有迟滞作用;当滤速为O．05L／（s·m2）、雌二醇添加量为1．25mg、淋滤时间为200min时,砂性土壤和黏性土壤中（距顶层土壤1．0m）雌二醇的残留浓度分别为0．06和0．18mg／kg;淋滤液中的腐植酸与土壤中的有机质发生竞争吸附,对E2的迁移起促进作用;而淋滤液中的无机盐（KCI）因促进土壤对E2的吸附,使得雌二醇在土壤中的迁移性能减弱。[结论]该研究可为土壤环境中雌激素污染控制提供科学依据。     

海水青鳉雌激素受体基因的克隆、组织表达特性及环境雌激素EE2对其表达的影响

为了获得海水青鳉Oryzias melastigma雌激素受体的基因信息及其表达特性,采用RACE-PCR技术和实时荧光定量PCR方法,进行了雌激素受体基因的克隆、表达特性分析及其在17α-炔雌醇(EE2)暴露下的基因响应研究。结果表明:海水青鳉雌激素受体基因与其他脊椎动物雌激素受体基因同源性较高,特别是DNA结合结构域(DBD)在进化上高度保守,配体结合结构域(LBD)次之;OM-ERα/β1/β2在所检测的10种组织中均有表达,其中在青鳉肝脏、性腺、脾脏和肠中表达量较高;OM-ERα在肝脏中的表达和OM-ERβ1/β2在性腺中的表达,雌雄间存在显著性差异(P0.05);在EE2浓度为5、50、500ng/L的水体中暴露96 h后,海水青鳉仔鱼中的分子标志物卵黄蛋白原基因(vtg1)被显著诱导(P0.05),且呈浓度依赖关系;中浓度(50 ng/L)的EE2诱导仔鱼OM-ERβ1基因表达,OM-ERβ2对EE2暴露呈现低浓度诱导、高浓度抑制的趋势;攻毒试验结果表明,OM-ERα和vtg1之间存在一种正相关关系,暗示EE2可能主要通过ERα调控vtg1基因的表达;EE2攻毒下,β亚型存在一种倒U型的剂量-反应关系。研究表明:克隆获得的海水青鳉3个雌激素受体亚型基因OM-ERα/β1/β2,为后续开展海水模式鱼类雌激素受体相关研究提供了基础信息;OM-ERα/β1/β2的组织表达特性及EE2对仔鱼OM-ERα/β1/β2表达的不同调控,显示出海水青鳉3种ER亚型基因存在着不同的生理功能,且其对环境污染物的应答模式不同。     

关中奶山羊精液中四种激素水平的季节性变化

应用放射免疫分析法(RIA)测定了关中奶山羊公羊(n=11)全年精液中睾酮(T)、17β-雌二醇(17β-E_2)、孕酮(p_4)和皮质醇(F)水平。T水平在8～11月份平均为9.35ng/ml,12～7月份平均为2.13ng/ml(p<0.001)。17β-E_2浓度在6,10月份极显著地高于其他月份(p<0.01);P_4含量在4～8月份极显著地高于9～8月份(P<0.01);F浓度在8～12月份平均为11.04ng/ml,1～7月份平均为8.12ng/ml(p<0.001)。     

上海典型畜禽场周边河流雌激素污染特征研究

为了探究畜禽养殖场周边河流中雌激素类物质的污染特征,利用固相萃取-高效液相色谱-串联质谱(SPE-HPLC-MS/MS)方法,对上海市三个典型畜禽养殖场(猪场、鸡场、奶牛场)周边河流上下游地表水中雌激素的种类和含量进行测定。结果显示,天然雌激素E1(雌酮)、E2(雌二醇)和E3(雌三醇)在各个采样点均被检出,浓度范围分别为21.66~73.40、8.75~55.96、4.56~23.90 ng·L~(-1);人工合成雌激素EE2(乙炔基雌二醇)的检出率为99.44%,浓度范围是ND~19.42 ng·L~(-1),DES(己烯雌酚)的检出率为27.78%,浓度范围是ND~3.23 ng·L~(-1)。采用EEQ(雌二醇当量)评价各水体中雌激素类物质的总体雌激素活性,结果显示,所有采样点EEQ的浓度范围为54.15~194.61 ng·L~(-1),在三个养殖场周边河流中,EE2对EEQ的贡献率均为最高。综合分析表明,三个典型畜禽场周边河流均受到不同程度的雌激素污染,且猪场和奶牛场周边河流中雌激素活性较高。典型猪场和典型奶牛场是E2的主要排放源,典型猪场是E1的主要排放源,而典型鸡场对周边河流产生的雌激素污染较小。     

17β-雌二醇对半滑舌鳎性分化和生长的影响

试验将25日龄半滑舌鳎稚鱼放入不同浓度(1、3、10和30μg·L-1)的17β-雌二醇水溶液中,每天浸泡2h,连续处理65d,研究17β-雌二醇对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther)性分化、性比、生长和死亡率的影响。结果表明,17β-雌二醇使半滑舌鳎卵巢分化提前约5d,使精巢分化推迟20d;4种浓度17β-雌二醇处理组(1、3、10和30μg·L-1)的雌性率分别为74%、82%、88%和97%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。同时,17β-雌二醇处理对半滑舌鳎的早期生长和死亡率无显著影响。     

鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium sp.)JCR5降解17α-乙炔基雌二醇的代谢途径

从北京某避孕药厂污水处理站曝气池的活性污泥中分离得到1株能够以17α-乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol,EE2)为唯一碳源和能源生长的菌株JCR5.通过对其形态特征、生理生化以及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium sp.).菌株JCR5在10d内对初始底物浓度为30 mg·L^-1EE2的降解率可达87%.该菌株能够利用甾体雌激素(甾酮、17β-雌二醇、雌三醇     

安徽省奶牛养殖场粪便中甾体雌激素污染特征研究

[目的]研究安徽省奶牛养殖场粪便中甾体雌激素的污染特征.[方法]利用气相色谱-质谱联用测定了安徽省6个规模化奶牛养殖场奶牛粪便及养殖场周边水样和粪便堆积场土样中雌激素的种类和浓度.[结果]奶牛粪便中的甾体雌激素主要以雌酮(E1)、17α-雌二醇(17α-E2)和17β-雌二醇(17β-E2)3种形式存在,其中17α-E2的含量最高.不同生理时期奶牛粪便中雌激素排放总量分别为青年期奶牛432.90 μg/kg,泌乳期奶牛为1 114.51 μg/kg,干奶期奶牛1 540.13 μg/kg,不同养殖场中奶牛的雌激素排放总量及E1、17α-E2和17β-E2所占比例无明显差异.奶牛日平均雌激素排放17β-E2当量值为931.51μg/(头·d),以此推算可知安徽省奶牛养殖场通过粪便排放的年雌激素当量为23.24 kg/a.奶牛养殖场附近水塘水样及粪便堆积场土样中17β-E2当量总浓度分别为1 252.02ng/L和1 424.21 μg/kg,表明粪便不加任何处理堆置存放存在潜在的环境风险.[结论]该研究可为安徽省奶牛养殖场的科学管理及甾体雌激素的有效去除提供技术参考.     

海门山羊超排及血浆孕酮和17β-雌二醇浓度

对28只性周期正常山羊分别注射1500iu PMSG(Ⅰ组)、300iu FSH(Ⅱ组)和等量生理盐水(Ⅲ组),比较两种促性腺激素的超排效果;用放射免疫方法测定血浆孕酮(P_4)和17β-雌二醇(E_2-17β)浓度。试验发现:(1)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的排卵率依次为12.00+1.71、21.22+2.25和2.75±0.31,超排效果FSH优于PMSG。(2)PMSG和FSH处理后,P_4和E_2-17β浓度都上升,但PMSG组只有在48h后两浓度达显著水平,FSH处理只经24h就显著升高。注射PGF_(2α)后两组的P_4浓度急剧下降(ρ<0.01)。发情时P_4浓度最低,E_2-17β为最大。(3)处理当日及此后的孕酮浓度与排卵率之间无显著相关(ρ>0.05)。而发情时的E2-17β浓度与排卵率之间呈强相关(r=0.72,ρ<0.001)。     

FSH和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸 支持细胞Skp2表达的调节

 【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,这一作用在30 min时到达高峰;FSH（50 ng·mL-1）、17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）和forskolin单独作用均促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2表达的影响与FSH或17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）单独作用无显著差异（P≥0.05）,而环磷酸腺苷抑制剂（Rp-cAMP）、蛋白激酶A（PKA）抑制剂（H-89）、L-Ca2+离子通道抑制剂（verapamil）和ERK1/2抑制剂（U0126）单独作用时对Skp2蛋白和mRNA的表达与空白对照相比无显著影响（P＞0.05）,但都抑制了FSH（50 ng·mL-1）与17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2蛋白和mRNA表达的影响（P＜0.05）。H-89、verapamil单独作用对ERK1/2（细胞外信号调节的蛋白激酶1/2）活性没有影响,但降低了FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对ERK1/2活性的影响。【结论】 FSH与17β-雌二醇联合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+内流,而PKA和Ca2+内流又通过影响ERK1/2的活性进而影响Skp2的表达。     

雌性三角帆蚌Srd5a1基因的分子鉴定和功能研究

性类固醇激素与生物生殖、配子排放以及性腺发育密切相关,Srd5a1在性类固醇激素合成过程中扮演重要角色。为了探究性类固醇激素合成相关酶基因Srd5a1对雌性三角帆蚌卵巢发育的影响,本实验应用RACE克隆得到了三角帆蚌Srd5a1全长cDNA序列,通过实时荧光定量（qRT-PCR）、原位杂交技术以及不同浓度17β-雌二醇（E2）和17α-甲基睾酮（MT）激素处理来探究Srd5a1的表达特性。结果显示,Srd5a1 cDNA全长2224 bp,包括446 bp 5′-UTR,953 bp 3′-UTR,825 bp ORF,编码274个氨基酸。Srd5a1在性腺中的表达呈二态性,在卵巢中表达量更高;Srd5a1在卵巢排放期的表达量最高,极显著高于其他各时期（p ＜0.01）。原位杂交结果显示,Srd5a1在卵巢卵母细胞、卵泡以及精巢精母细胞中有表达。不同浓度E2和MT处理24天后,Srd5a1的表达发生了变化。综上,Srd5a1可能在雌性三角帆蚌卵巢卵母细胞发育成熟和配子排放中发挥一定作用,对探索三角帆蚌性腺生长发育具有重要意义,同时为实现三角帆蚌单性化养殖提供理论参考价值。     

大豆异黄酮的药理研究进展

大豆异黄酮（soybean isoflavone）主要由三羟异黄酮（genistein）、二羟异黄酮（daidzein）以及其β葡糖苷（genistin和daidzin）组成,是大豆中最具药用价值成分。在结构上类似于内源性17-β雌二醇（E2）,但其生物学效力较弱。如二羟异黄酮是E2的0．1％-1％,在体内表现弱雌激素与抗雌激素活性。     

双峰驼妊娠早期外周血浆中孕酮和雌二醇含量的变化及妊娠诊断

本试验用放射免疫分析测定了妊娠早期母驼外周血浆中孕酮、17β—雌二醇的含量,并根据本试验的资料对应用血浆孕酮浓度进行早期妊娠诊断的方法作了分析.结果表明,母驼妊娠早期孕酮水平在配种后第4天开始升高,怀孕头一个月内的峰值为10.59±8.43ng/ml;配种当天17β—雌二醇的水平为12.11±4.44pg/ml,第2天降为8.39±8.92 pg/ml(n=8),但第4天又回升到配种当天的水平,这种现象在其它动物少见。根据配种后第16天的血浆孕酮水平进行妊娠诊断,检出妊娠的准确率达100%。判定标准为1.0ng/ml,即≤1.0ng/ml 者为未孕。>1.0ng/ml 者为怀孕。     

广东四会邓村河水体中雌/雄激素物质的含量及分布

对受造纸废水污染的广东四会邓村河水体中存在的类雌/雄激素物质的数量和种类进行监测,以确定造成生活在邓村河水域的食蚊鱼发生性逆转的目标化合物.采用LC-MS/MS方法,于2011年夏季对邓村河设置包括对照点在内的4个检测点,对水体中的5种雌激素物质和10种雄激素物质的含量作了定量检测.结果显示,雌激素物质中雌二醇(17A-estradiol,E2)、雌三醇(estriol,E3)、炔雌醇(17B-ethinylestradiol,EE2)和已烯雌酚(diethy]stilbestrol,DES)在各检测点均未检出,仅检出雌酮(estrone,E1)1.97 ～5.09ng·L-1;雄激素类物质中1,4雄烯二酮(androstadienedione,ADD)、17α-勃酮(17αt-boldenone)、17β-勃酮(17β-boldenone)、雄烯二酮(androstenedione,AED)、睾酮(testosterone)、炔诺孕酮(norgestrel)、反式雄酮(epi-androsterone)、雄酮(androsterone)、孕酮(progesterone)、羟甲雄烷吡唑(stanozolol)均有检出,其含量分别为13.47～30.46、1.50～3.69、1.50～3.69、1.89～6.77、0.89～1.43、1.97～2.57、6.29～18.93、3.58～12.05、1.42～2.86、0.69～0.70 ng· L-1.各采样点被检出的雌/雄激素物质含量均高于对照点(REF)的含量,其中E1在各个点都有检出,最高含量为5.29 ng·L-1;采样点A的ADD、AED和Progesterone含量最高,分别为30.46、6.77、2.86 ng·L-1.结果表明,邓村河水主要被E1、ADD、AED和Progesterone污染,在引起该水域生活的食蚊鱼雌/雄激素生物效应中起到重要作用.     

基于畜禽粪便的有机肥中雌激素污染特征

为了解基于畜禽粪便的有机肥中残留雌激素的污染特征,防控有机肥生产中的污染风险。采集了市面上基于鸡粪、猪粪、牛粪制备的17种有机肥,测定了其有机质、氮、磷和钾含量;采用SPE-HPLC/FLD法检测了样品中雌三醇（E3）、17β-雌二醇（17β-E2）、双酚A（BPA）、炔雌醇（EE2）四种雌激素的含量,并将结果与新鲜鸡粪、猪粪、牛粪中四种雌激素含量进行对比。结果表明,鸡粪、猪粪和牛粪有机肥中均存在有机质含量偏低的样品;鸡粪有机肥中E3、17β-E2、BPA均值（干质量计）分别为270.22、2.71、87.93 μg·kg^-1;猪粪有机肥中E3、17β-E2、BPA、EE2均值为609.71、41.84、32.69、46.74 μg·kg^-1;牛粪有机肥中E3均值为50.96μg·kg^-1。畜禽粪便有机肥存在雌激素污染风险,且E3风险最大。所检测的三种畜禽粪便制备的有机肥中,牛粪有机肥雌激素含量、检出率均最低。有机肥中E3、17β-E2、BPA、EE2检出率分别为47.06%、11.76%、17.65%、5.88%,四种雌激素在新鲜粪便中检出率则为67.74%、70.97%、70.97%、58.06%,有机肥中雌激素检出率低于新鲜畜禽粪便。综上可见,基于畜禽粪便的有机肥中仍会有雌激素残留,应引起重视。