饲用木聚糖酶生产菌株的筛选及部分酶学性质的研究

运用平板初筛和发酵复筛的方法,从6株斜面保存菌中,筛选出3株产木聚糖酶的菌种:康氏木霉3.590,康氏木霉3.549和里氏木霉QM9414。其中康氏木霉3.590产木聚糖酶活力最高,达40.78152U/mL,并对其酶学性质进行了初步研究,得到其反应的最适温度和最适pH值分别为60℃和5.6。     

青海高原产纤维素酶康氏木霉的酶促动力学研究

对分离自青海省东部土壤的产纤维素酶康氏木霉(Trichoderma koningii)0143p株进行产酶条件优化及酶促动力学特性研究。结果表明，T.koningii 0143p菌株在麦麸为碳源、尿素为氮源、起始pH值为7．0、28℃培养6d的条件下产酶量最高。在此产酶优化条件下，0143p菌株的湿固体发酵物滤纸酶活力(FPA)可达32pmol／min，为原产酶条件的1．6倍；酶作用的最适温度为50～55℃，最适pH4．8。T.koningii 0143p菌株可作为纤维素酶解饲料的酶源菌，具有良好的饲用前景。     

康宁木霉产木聚糖酶的稳定性研究

本文研究了不同无机离子、pH值和温度对康宁木霉(Trichoderma koningii)产木聚糖酶稳定性的影响.结果表明:(1)不同种类、不同浓度的无机离子对木聚糖酶的活性表现出不同程度的激活或抑制作用.Cu2+、Mn2+和Ba2+可抑制木聚糖酶活性,而Co2+、Na+、K+、Fe2+、Ca2+和Mg2+可激活木聚糖酶活性.(2)不同pH和温度对木聚糖酶的活性也有显著影响.康宁木霉产木聚糖酶的最适保存pH和温度分别是7.0和30℃.且在pH 5～8时相对酶活可保持80%以上.     

青海高原产纤维素酶菌的选育

从11株分离自青海省东部森林的产纤维素酶真菌中，筛选出产纤维嗉酶性能优良的0143菌株，根据其形态学特征及培养特性，鉴定为康氏木霉(Trichoderma koningii)，该菌湿固体发酵物的滤纸酶活力(FPA)为15μmol／min。0143菌株经亚硝基胍诱变后，获得突变株0143p，其湿固体发酵物FPA为20μmol／min，是原菌株的1．33倍。该菌无毒副作用，可应用于饲料中，作为饲料用酶源菌。     

秸秆还田土壤真菌的分离和鉴定

为了获得产纤维素酶活性高的土著菌株,试验采用传统的微生物分离培养方法从秸秆还田小麦土壤中分离到1株纤维素酶活力较高的真菌,并进行了分子鉴定。结果表明:该菌株的羧甲基纤维素钠酶活、滤纸酶活均较高,通过18S rDNA序列分析发现与拟康氏木霉(Trichoderma pseudokoningii)的相似性达到100%,鉴定为拟康氏木霉。     

康宁木霉液态发酵产纤维素酶条件及部分酶性质的研究

<正>1材料和方法1.1菌种康宁木霉3.2774(Trichoderma koningii3.2774)购自中科院微生物研究所菌种保藏中心。1.2培养基斜面培养基:麦芽汁琼脂培养基。     

康氏木霉诱变株(NN—15B_7)酶粉的致突变性研究

给小鼠一次口服康氏木霉诱变株(NN—15B_7)粗酶粉,结果LD_(50)>15g/kg体重,属无毒物.Ames试验,康氏木霉纯酶粉3.83～5000μg/皿的5个试验组,对组胺酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA_(97) 、TA_(98)、TA_(100)三株菌在加与不加S_9活化系统中,回变菌落数与自发回变菌落数相近,无剂量效应关系.微核试验,用康氏木霉粗酶粉1.25、2.5和5g/kg体重连续2d给小鼠口服,结果各试验组微核率(1.6‰～1.8‰)均在正常范围内,PCE/RBC比值也与阴性对照组无显著差异.精子畸形试验,精子畸形率(1.88%～1.96%)与阴性对照组(1.78%)比较无显著差异,与阳性对照组(8.35%)比较差异非常显著(P<0.01).因此认为,康氏木霉诱变株(NN—15B_7)酶粉无毒性,无致突变性.     

康氏木霉诱变前后纤维素酶组分的分离提纯

康氏木霉NN-15B_7株是康氏木霉854-B_2株经多次理化因素诱变,最后搭载卫星在太空条件作用下筛选出来的变异株.为比较诱变前后两个菌株所产纤维素酶的异同,本实验采用系列分离的方法,首先对其酶组分进行了分离提纯.粗酶粉经Scphadex G75凝胶过滤、DEAE-Scphadex A50离子交换层析和SP-Scphadex C50离子交换层析,分离得到了纯的C_1酶和Cx酶.经鉴定,C_1酶中含有微量Cx酶活力,PAG圆盘电泳只显示1条区带;Cx酶中均测不出C_1酶和β—葡萄糖苷酶活力,PAG圆盘电泳显示4条区带.诱变前后两株纤维素酶的组分分布未见差异.     

对桑椹菌核病病原菌有拮抗作用的木霉菌菌株筛选及生防效果试验

桑椹菌核病是果桑生产的重要病害,筛选对病原菌有拮抗作用的木霉菌进行生物防治,对确保果桑生产的稳产与桑果的食用安全都具有重要意义。从不同果桑种植区域的桑椹菌核病发病桑园采集桑树根际土壤样品,通过土壤稀释涂布法及形态学特征观察分离到48株木霉菌。采用对峙培养的方法,研究48株初筛菌株对桑椹菌核病病原菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的重寄生能力,筛选出20株具有较强拮抗能力的木霉菌菌株,并进行分子生物学分类鉴定,有7株菌株与哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、9株菌株与棘孢木霉(Trichoderma asperellum)、1株菌株与黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)、1株菌株与橘绿木霉(Trichoderma citrinoviride)、1株菌株与绿木霉(Trichoderma virens)有较高的相似度。采用玻璃纸法检测20株木霉菌菌株中,有8株菌株的菌丝分泌物对核盘菌处理6 d内的抑制率稳定在80%以上。进一步从中筛选出哈茨木霉Tr16、绿木霉Tr48、棘孢木霉Tr50共3株拮抗作用明显的菌株,利用其发酵液进行桑椹菌核病的田间防效试验,结果显示Tr16和Tr50菌株发酵液的10倍稀释液对桑椹菌核病的防治效果分别为91.27%、82.53%,优于80%多菌灵500倍稀释液的防治效果,具有一定的实用开发潜力。     

棘孢木霉葡聚糖酶基因Glu1的克隆及原核表达

从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536中克隆获得一个葡聚糖酶基因Glu1,其cDNA全长984bp,编码327个氨基酸。该葡聚糖酶属于Glyco-hydro-12家族,推测为β-1,4-葡聚糖酶,与深绿木霉IMI 206040的Glycohydro-12家族蛋白(XP_013940397.1)有91%相似性,且亲缘关系较近。运用qRT-PCR技术检测9种诱导条件下棘孢木霉Glu1基因的表达水平,结果表明,Glu1基因能参与棘孢木霉对山新杨(Populus davidiana×P.alba var.pyramidlis)或杨树病原菌的识别。构建原核表达载体并获得重组蛋白rGlu1。酶活特性分析结果表明,该酶最适pH为4.5,最适温度为45℃,且酶活性随诱导时间延长逐渐升高,在5h达到稳定。