植物源病毒抑制剂WCT-II控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT- 直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体,经枯斑半叶法接种和电镜检测发现,处理后的病毒致病力明显下降,病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象,WCT- 对TMV的枯斑抑制率为86.6%;WCT- 处理烟草后,其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现,处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明,WCT- 不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用,而且能诱导植物产生病程相关蛋白,提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ防治烟草花叶病毒的机理初探

植物源病毒抑制物WCT—Ⅱ喷施于接种烟草花叶病毒(TW)的烟草上，与仅接种TWV未经WCT—Ⅱ处理的发病对照相比，烟草叶片中叶绿素含量提高了58．0％，碱溶性胞内几丁质酶和碱溶性胞间几丁质酶活性分别提高27．0％和40．7％，碱溶性胞内和酸溶性胞间 β-1，3-葡聚糖酶活性分别提高22．1％和140．0％。上述研究结果表明，WCT—Ⅱ能启动植物的一系列抗病防御反应，诱导植物产生抗病性。     

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸（SA）诱导烟草对烟草花叶病毒（TMV）的抗性．间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量．并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明．水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低．随着病毒挑战接种后时间延长．病毒含量增多．第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后．处理叶片（T-SA）与其上部未处理叶片（N-SA）比较，枯斑数基本一致。均比对照处理明显减少。     

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸(SA)诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)的抗性,间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量,并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明,水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低,随着病毒挑战接种后时间延长,病毒含量增多,第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后,处理叶片(T-SA)与其上部未处理叶片(N-SA)比较,枯斑数基本一致,均比对照处理明显减少。     

植物源抗病毒制剂 VA 对烟草花叶病毒(TMV)体外钝化作用的初步研究

用植物源抗病毒制剂VA与烟草花叶病毒 (TMV)混合 ,经枯斑半叶法接种 ,结果证明 ,VA对TMV有较强的体外钝化作用 ,体外钝化后的枯斑抑制率为 80 .0 % ;用苯酚氯仿法提取TMV的核酸后 ,按一定的比例与VA混合 ,经枯斑半叶法接种测得枯斑抑制率为 43.8%～ 77.9% ;TMV与VA混合后用RNase处理 ,测得侵染率为 78.6 % ,比未用RNase处理的对照降低了 2 1.4% ,由此说明VA具有一定的体外脱衣壳作用 ;又经电镜观察发现VA可使部分TMV粒体发生断裂或粗细不均、略变弯曲等畸变现象。     

丹皮酚对烟草花叶病毒的抑制作用

从牡丹皮中提纯的丹皮酚结晶(0.6 mg.mL-1)与烟草花叶病毒(Tobacco m osaic virus,TMV)混合10 m in后对TMV枯斑抑制率达80%以上,说明丹皮酚对叶圆片中的病毒复制具有抑制作用;电镜下观察丹皮酚与TMV混合对粒体形态没有影响;丹皮酚与TMV混合后透析病毒可恢复侵染力,表明丹皮酚对病毒没有直接毒害作用;用丹皮酚喷施叶面不影响病毒侵染;低含量丹皮酚可阻碍TMV-CP的体外聚合,对TMV-RNA无体外抑制侵染作用.据此推测,丹皮酚对TMV的抑制作用可能主要是通过其与TMV-CP结合而影响病毒粒体对叶片表面侵染位点的识别,或影响植株体内TMV-CP亚基的体内聚合.     

VA系统诱导烟草对TMV抗性与细胞内防御酶系统的关系

枯斑三生烟(Nicotiana tabacum L.“Samsum”NN)经植物源抗病毒剂VA诱导处理后第7天(清水处理作对照)，在其长出的新叶上接种烟草花叶病毒(TMV)。结果表明，VA可以诱导枯斑三生烟对TMV产生系统抗性，其枯斑抑制率可达57．25％，枯斑出现时间推迟10h。超氧物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POX)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)3种酶的活性均比对照明显提高，其中48h时增加幅度最大；VA处理使枯斑三生烟叶片内的丙二醛(MDA)含量降低，其中接种48h时降低幅度最大。此外，在接种TMV后的12h内，清水对照的枯斑三生烟新叶中POX和SOD活性呈下降趋势，PAL活性几乎无变化，随后呈上升趋势，而经VA处理的枯斑三生烟新叶中的POX、SOD和PAL，活性自接种后，一直呈上升趋势，且上升幅度也高于对照；MDA含量的变化与3种酶活性的变化呈相反趋势。     

VFB抗烟草花叶病毒活性及对烟草叶片超微结构的影响

【目的】评价植物源病毒抑制剂VFB的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,并初步探讨其作用机理。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosaL.)和普通烟(Nicotiana TabacumL.)为寄主材料,采用半叶枯斑法测定了VFB对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖的抑制作用,并用透射电镜技术研究了VFB对感染TMV烟草叶片超微结构的影响。【结果】VFB对TMV具有明显的体外钝化作用,在对TMV钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别为44.41%,55.62%和64.43%;VFB对TMV侵染心叶烟具有较好的预防作用,其50倍稀释液在24和48 h的抑制率分别达到54.33%和55.60%,均优于对照药剂病毒A;VFB对TMV有一定的治疗作用,其50倍稀释液的抑制率为36.15%,略低于对照药剂病毒A。烟草叶片病理结构的超微观察表明,普通烟感染TMV后,叶片中大部分细胞结构会受到不同程度的破坏,经VFB处理的烟草,花叶症状减轻,叶片中的TMV粒子显著减少,叶绿体和线粒体的解体症状减轻,并产生大量嗜锇颗粒和膜体。【结论】VFB对TMV具有较好的抑制作用。     

多羟基双萘醛诱导西葫芦抗病中主要酶活性的变化

用植物源病毒抑制剂多羟基双萘醛处理西葫芦后,诱导了西葫芦叶片内过氧化氢酶、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性发生变化;叶片中过氧化氢酶活性受到抑制,酶活性降低30％;药剂处理,叶片中酸溶性胞内和碱溶性胞间几丁质酶活性相对于对照分别提高22.1％和20.1％;碱溶性胞内和酸溶性胞间β-1,3-葡聚糖酶活性相对于对照分别提高17.3％和76.6％。同时发现,叶片胞间可溶性酶活性峰较胞内可溶性酶活性峰出现的时间早;上述的研究结果表明,该药物能启动植物的一系列抗病防御反应,提高植物抵抗病原物侵入的能力。     

漂盘培养液中TMV含量对烟草花叶病发病情况的影响

[目的]为提高烟叶产量和品质提供参考。[方法]以普通烟K326和心叶烟为材料,用12．7、1．27、0．127、0．0127μg/ml烟草花叶病毒（TMV）液对K326进行漂盘培养,培养5、10、15、20、25d后随机取各处理K326叶片得叶片提取液,用各处理提取液接种8叶期心叶烟叶片,调查K326的发病情况及心叶烟的枯斑数。[结果]12．7ug／mlTMV处理K326表现出发病症状,其他处理未表现明显发病症状;随着培养液中TMV浓度的升高,各处理烟叶提取液接种心叶烟产生的枯斑数逐渐增多,且枯斑数随病毒接种时间的延长迅速增加;12．7、1．27μg/mlTMV处理K326叶片提取液接种20d后心叶烟枯斑数最多,0．127、0．0127μg／mlTMV处理K326叶片提取液接种25d后心叶烟枯斑数最多。[结论]烟草花叶病的发病率和病情指数与培养液中TMV的浓度有关。     

黏质沙雷氏菌次生代谢物对TMV的抑制机理

【目的】分离、纯化和鉴定黏质沙雷氏菌2A2次生代谢物中具有抑制TMV侵染力的活性成分,明确其对TMV的抑制机理。【方法】通过病毒生物学测定,确定黏质沙雷氏菌2A2菌株对TMV的抑制效率。为明确黏质沙雷氏菌2A2发酵液次生代谢物中抑制TMV侵染力的活性成分,通过TLC和硅胶柱层析对其发酵液进行了分离纯化,获得主要的次生代谢物,通过局部枯斑法测定各代谢物的生物学活性,筛选可显著抑制TMV侵染活性的物质,经NMR分析,确定其成分结构,进而确定物质组分。为进一步揭示代谢物对TMV的抑制机理,利用透射电子显微镜探索代谢物对TMV粒体形态的影响,TMV粒体与代谢物甲醇溶液混合30 min后,于透射电子显微镜下观察TMV粒体形态。同时,用代谢物甲醇溶液喷施处理寄主下部3片叶,共设5个处理：处理Ⅰ,喷施代谢物24 h后,接种TMV;处理Ⅱ,代谢物与等体积TMV汁液混合30 min后,接种叶片;处理Ⅲ,先接种TMV,24 h后喷施代谢物;处理Ⅳ,宁南霉素（50 μL•mL-1）与等体积TMV汁液混合30 min后,接种下部叶3片做阳性对照;处理Ⅴ,无菌水与等体积TMV汁液混合30 min后,接种下部叶3片做空白对照。分别在次生代谢物诱导和TMV侵染后1、3、5、7、9 d,取未经任何处理的上部叶,TRIZOL法快速提取总RNA并反转录cDNA,利用real-time RT-PCR分析样品PR基因和TMV的RNA相对表达量,进而明确代谢物处理寄主对寄主PR基因表达的影响和对TMV在寄主体内复制增殖的抑制作用。【结果】黏质沙雷氏菌2A2菌株对TMV具有显著的抑制作用。对其发酵液进行分离纯化,获得3种主要代谢物,通过局部枯斑法测定,编号为BJH-2的代谢物可显著抑制TMV的侵染活性,经NMR分析,确定了该代谢物为灵菌红素（prodigiosin）。透射电子显微镜结果显示灵菌红素可显著破坏TMV粒体,使TMV典型的杆状病毒粒体降解断裂成排列紊乱的短杆状。real-time RT-PCR结果表明,灵菌红素处理植株后,处理Ⅰ、处理Ⅱ、处理Ⅲ可诱导寄主体内PR基因表达随着时间逐渐上调,第7 天左右,三者处理的寄主体内PR1、PR2、PR4、PR5表达上调至高峰,显著高于空白对照,亦高于处理Ⅳ的阳性对照,从而提高系统抗性;灵菌红素处理植株后,处理Ⅰ、处理Ⅱ、处理Ⅲ寄主体内TMV RNA的表达量随着时间上调减缓,在接种TMV后的第9天,三者处理的寄主体内的TMV RNA含量分别是空白对照的11.98%、5.23%、15.90%,显著低于空白对照,亦低于处理Ⅳ的阳性对照。【结论】灵菌红素既对TMV在寄主体内的复制增殖具有抑制作用,又可诱导寄主产生系统抗性,整体效果高于宁南霉素,可作为防治植物病毒新的生物制剂。     

抗病毒剂VA诱导烟草对TMV的抗性与Ca2+的关系

以枯斑三生烟为材料,抗病毒剂VA为诱导剂,用细胞化学沉淀法测定了VA对烟草叶片细胞中Ca^2 分布的影响,并探讨了Ca^2 在植物诱导抗病性中的作用。结果发现,枯斑三生烟健叶中的Ca^2 主要分布于细胞间隙和液泡,喷施VA可以增加健叶细胞间隙中的Ca^2 。接种TMV后,细胞间隙中的Ca^2 逐渐向细胞内转移,在接种后48h,Ca^2 主要分布于过敏性坏死细胞和近坏死区细胞,远坏死区细胞间隙缺Ca^2 ;以后由于枯斑停止发展,远坏死区细胞逐渐恢复钙稳态,VA TMV处理比水 TMV处理恢复钙稳态快,在接种后72h就可恢复,而水 TMV处理的远坏死区要在接种后96h才恢复钙稳态。     

6种病毒抑制剂对烟草花叶病毒的抑制作用及其机制初探

采用半叶枯斑法测定6种病毒抑制剂对烟草花叶病毒(TMV)的活体治疗、保护和钝化作用,并用半定量RT-PCR检测药剂诱导烟叶中病程相关蛋白基因PR-5的表达情况。结果表明:有效成分为宁南霉素的金珠蔬美对TMV有较高的活体治疗和保护效果,在250 mg/L时枯斑抑制率分别达到了67.24%、54.55%;关于药剂对TMV的活体钝化作用,金毒冠氨基寡糖素的抑制率最高,5 mg/L时平均抑制率为60.31%。6种药剂处理烟草K326后,PR-5基因表达呈现不同程度地上调,表明它们均能诱导烟草产生对TMV的抗性。     

白花蛇舌草抗烟草花叶病毒作用机理的研究

[目的]研究白花蛇舌草提取液对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用及其防治效果,为植物源抗病毒类生物农药的研制提供依据。[方法]以心叶烟和K326为试验材料,采用常规摩擦接种,分别于接种病毒前24h和接种后24h分别喷施白花蛇舌草10倍液;接种处理3～5d后,调查枯斑数量,计算枯斑抑制率;普通烟接种处理后调查病情指数、计算防效;采用间接ELISA法[4]测定各处理的病毒浓度;将提纯的TMV与白花蛇舌草10倍液等体积混合不同时间后,采用负染法在电镜下观察病毒粒子的形态变化。[结果]对心叶烟的抑制率为84.6%,对系统寄主K326的防效为76.6%;在接种病毒前24h喷施药剂,枯斑抑制率和对系统寄主的防效分别为62.2%和61.5%;接种病毒后24h喷药试验结果表明,药剂能抑制植株体内病毒的增殖;电镜观察结果表明,病毒粒子有断裂现象,混合时间越长,破坏作用越强。[结论]白花蛇舌草对TMV还具有较强的体外抑制作用,作用时间越长,抑制率越高。     

壳寡糖类物质对烟草TMV的抑制及防御酶系的影响

在接种烟草花叶病毒(TMV)前几天,用自制的壳寡糖溶液处理心叶烟(Nicotiana glutinosa)和烟草品种NC89(Nicotiana tobaccumcvNC89),测定其在烟草上对TMV的抑制作用及引起的寄主体内防御酶系变化。结果表明:壳寡糖处理后,在心叶烟上对TMV的病斑抑制率在第10天达最高,为79.10%;在烟草品种NC89上对TMV的防效在第10天达最高,为32.41%。同时,壳寡糖处理可导致烟草品种NC89叶片的PAL、POD、PPO、SOD活性不同程度提高,可溶性蛋白含量增加。表明壳寡糖类物质可以诱导烟草对TMV的抗性,提高烟草的免疫能力。     

TMV与CMV不同组合侵染番茄后TMV致病性与浓度关系的数学模型与统计分析

由烟草花叶病毒(TMV)与黄瓜花叶病毒(CMV)三种不同组合接种番茄幼株(北京早红)后,再由接种侵染的番茄株体中分别捉取的 TMV 以不同的浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据,应用植物病毒侵染与浓度关系的理论模型 y=B_1ln(1+B_2V),采用 Gauss-Newton 法与 Marguardt 洪两种方法,分别实现了模型的参数计算,得到了三种组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的致病性与浓度关系的数学模型与最优曲线拟合,并对两种计算方法的效果进行了比较。本文还对由不同组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的不同浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据进行了统计分析,证明 TMV 与 CMV 的不同处理组合间的 TMV 侵染的半叶平均枯斑数差异是极显著的,TMV 各接种浓度间侵染的差异性也是极显著的,而这两者的交互作用侵染的差异性则不如前两种情形显著,这些结论与实验结果完全一致。     

大蒜挥发油抗烟草花叶病毒机理

从新鲜大蒜中提取的挥发油与烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)混合后可使完整的病毒粒体断裂,且对病毒衣壳蛋白的体外聚合过程有明显的抑制作用,而对病毒的核酸侵染力无显著影响,喷施大蒜挥发油可显著提高烟草体内过氧化物酶和多酚氧化酶的活性。     

苍耳多糖对烟草花叶病毒的抑制作用及对烟草几种防御酶活性的影响

水提醇沉法从苍耳幼苗中获得不同醇沉级分的苍耳多糖,枯斑半叶法在心叶烟上进行抗烟草花叶病毒(TMV)活性检测,发现苍耳多糖对TMV具有一定的抑制作用,在浓度为1.0mg/mL时,乙醇浓度为30%的条件下获得的多糖对TMV的抑制率为48.36%.测定了苍耳多糖处理普通烟后烟草叶片中过氧化物酶( POD) 、多酚氧化酶( PPO) 、苯丙氨酸解氨酶( PAL)的活性变化,发现喷施苍耳多糖后,可提高烟草叶片POD、PPO、PAL酶的活性,因此苍耳幼苗多糖可能通过诱导烟草中防御酶活性形成对TMV的抑制活性.     

金针菇发酵液和BTH对烟草抗病性的诱导作用

利用烟草-花叶病病害体系检测苯并噻唑硫代乙酸甲酯(benzothiadiazoles,BTH)、金针菇(Flammulina velutipes)发酵液提取物(JZG)诱导抗病作用。试验用盆栽珊西烟(Nicotiana tobacum,Xanthi-nc)为材料,用诱导剂处理烟草第6片叶,然后在上部未处理叶接种烟草花叶病毒(TMV),结果发现上部叶片产生的TMV枯斑数与对照相比显著减少,说明这2种诱导剂能诱导烟草植株产生系统抗病性。同时研究了BTH、JZG作为诱导剂处理烟草后寄主内几种抗病相关酶的变化,结果表明烟草叶片组织中的几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性增加,且酶活性可在处理后15 d内维持高于对照组的水平。     

烟草种质资源TI203对烟草花叶病的抗性特点

[目的]系统了解烟草种质资源TI203抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的特点,为烟草抗病育种的亲本选择提供更丰富信息.[方法]以烟草种质资源TI203为材料,采用TMV病毒接种、病情调查、病毒外壳蛋白累计量检测、TMV复制水平测定及日灼现象观察等方法,研究TI203对TMV的抗性特异性、TI203接种TMV普通株系(TMV-U1株系)后的症状、病毒复制水平等.[结果]TI203只对TMV表现无症状的抗病特点,接种马铃薯Y病毒(PVY)和黄瓜花叶病毒(CMV)则表现出典型症状.接种TMV-U1株系后14 d,Western blotting检测结果显示,TI203叶片病毒复制水平明显低于对照品种;用表达GFP的TMV侵染性克隆浸润接种发现,TI203对TMV的抗性发生在病毒复制水平.在高温和强日照条件下,TI203生长迅速的中上部叶片会发生日灼现象,且难以恢复.[结论]TI203只对TMV表现无症状,其对TMV的抗性发生在病毒复制水平.