细胞和个体水平沉默效应的差异(英文)

[目的]研究3种不同长度的四联shRNA载体及其在细胞与个体水平的沉默效应差异。[方法]以EGFP为靶标基因,用hU6、mU6、h7SK、hH14种启动子,构建21、27、29bp的3种四联沉默载体,通过转染Vero细胞和注射小鼠肌肉,以实时荧光定量PCR的方法检测绿色荧光蛋白基因的mRNA水平。[结果]3种载体都有很强的沉默效应;其在细胞水平上的沉默效应远高于个体水平上;可以通过未成年鼠的肌肉注射进行转基因。[结论]多位点串联表达shRNA是一种可以达到较好干扰效果的方法;肌肉注射将是一个简便的转基因途径。     

三疣梭子蟹雌雄个体遗传差异的SRAP分析

应用三疣梭子蟹SRAP-PCR优化体系,从88个SRAP引物组合中筛选出17个组合对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)雌、雄个体遗传差异进行分析,共获得146个位点,雌性个体获得139个位点,多态位点比例为69.78;雄性个体检测到129个位点,多态位点比例达79.07。雌性和雄性的Nei''s基因多样性分别为0.2315和0.2682,Shannon''s信息指数为0.3478和0.4026,雌雄个体间的相似系数为0.5959~0.8417,遗传距离为0.1583~0.4041。用TFPGA软件绘制了个体间的聚类图。另外在5个SRAP选择扩增组合中发现了6个位点在雌雄个体间扩增差异较大,其中4个位点显性条带个体为雄性的比例为12.5%~20%;2个位点显性条带个体为雌性的比例为100%。     

抗病毒RNA沉默和病毒拮抗RNA沉默策略研究进展

RNA沉默通指在转录或转录后水平上由RNA介导、序列特异性地降解靶标RNA从而抑制基因表达的过程。在动物、真菌和植物中,RNA沉默是通过小RNA的形成来抵御病毒侵染的,病毒自身可以作为RNA沉默的诱导子和靶标。病毒通过进化形成积极的和消极的策略来对抗RNA沉默。为此,主要讨论了siRNAs和miRNAs介导的抗病毒RNA沉默以及病毒蛋白和RNA介导的沉默抑制作用,有助于阐明病毒侵染与寄主之间的相互关系,为抗病毒研究奠定基础。     

旱育和水育法育秧苗期个体素质差异的研究

用汕优６３和扬稻４号为试验材料，采用旱育法和水育法育秧，在苗期共６次分别对两个试验材料的旱育秧苗和水育秧苗的个体素质进行观测，初步总结出旱育和水育法育秧苗期个体素质上的差异。     

植物转基因沉默现象的发生机制

随着转基因技术的发展及应用,转入目的基因在越来越多的植物上发生不表达或表达不完全等沉默现象。从基因沉默现象的定义入手,通过论述基因沉默现象的发现,在染色体DNA水平、转录水平和转录后水平三种不同层次上探讨了转基因现象发生的原因。认为转基因沉默现象是三个层次相互作用的结果,且和环境等外部因素有关,在核酸水平上均是DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA相互作用的结果。     

沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞杀伤肾癌细胞的研究

目的:研究SOCS1沉默并负载MAGEA3抗原的树突状细胞(DC)特异性抗肿瘤效应中的作用。方法:采用基因克隆技术构建细胞因子信号抑制因子(SOCS1)基因RNA干扰和慢病毒载体,转染人脐血来源的DC,采用Western-Blot鉴定SOCS1的沉默情况,再负载MAGE-A3抗原肽,应用MTT法评估沉默SOCS1并负载MAGE-A3抗原的DC刺激T细胞增殖的能力及杀伤靶细胞的效应。结果:沉默SOCS1及负载MAGE-A3抗原的脐血树突状细胞组杀伤肾癌细胞能力显著高于其他组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SOCS1沉默并负载MAGE-A3抗原的DC疫苗可以产生高效而特异性的抗肾癌免疫应答。     

病毒诱导的基因沉默

    "病毒诱导的基因沉默"(virus-induced gene silencing,VIGS)一词最早用于描述被病毒侵染的植物的"恢复"现象,是一种植物抗病毒侵染的自然机制,现在已被开发成通过插入目的基因片段的重组病毒抑制植物内源基因表达的遗传技术,用于基因功能分析VIGS由小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)驱动,siRNA单链与RNA诱导的沉默复合物(RNA induced silencing complex,RISC)结合后,特异性地和与siRNA同源的靶标RNA结合,并降解RNA模板已有源于15种不同类型病毒的VIGS载体得到开发和应用在VIGS栽体中插入的目的片段、重组VIGS病毒载体的植物导入方法、沉默处理时的寄主生育期、沉默处理后的植物培育条件等均显著影响VIGS的效率作为一种新型的基因鉴定和功能研究技术工具,VIGS具有无需事先知道目的基因全长序列、获取表型迅速、无需构建转基因植株等诸多优点,已越来越广泛地被应用于植物基因功能研究     

PC12细胞诱导的神经缺血细胞Smad7-siRNA及沉默效果的检测

目的探讨诱导PC12细胞分化的神经细胞靶向沉默Smad7基因特性,同时进行沉默效果检测．方法以Smad7基因为靶目标,设计合成3条siRNA序列,进行细胞转染,利用Rea1time—PCR和Westernblot技术检测沉默效果,筛选出最有效的干扰序列,同时检测出最佳的转染浓度和转染时间．结果针对Smad7基因设计合成及筛选出靶向沉默Smad7基因的干扰序列（siRNA1）;siRNA1的最佳转染浓度是4μg／mL;siRNA1的最佳转染时间是24h;siRNA1对Smad7的抑制效果优于其他干扰序列．结论siRNA1能有效沉默Smad7基因;lipofecta—mineTM2000可成功将siRNA1转染至神经细胞,转染效率较高;利用siRNA技术能有效抑制神经细胞．     

两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应

目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。     

个体基因杂合度对山西白猪体重和体尺性状的影响

选用FAO-ISAG联合推荐的21个微卫星标记分析了山西白猪128个个体的基因型,利用中性微卫星座位计算个体基因杂合度,采用单变量动物模型分析个体基因杂合度水平对山西白猪初生重、断奶重、6月龄体重、体长、体高、胸围和活体背膘厚等7个性状的影响。结果表明,个体基因杂合度水平仅对初生重有显著影响(P<0.05),杂合度水平为6时(杂合度为0.568),初生重最高,但该类个体后期生长发育慢,6月龄体重较低;杂合度水平为3(杂合度为0.373)的个体,生长发育良好,且6月龄背膘较薄,符合育种目标和市场需求。     

不同播期对花生单株性状和产量的影响

2007-2009年,每年从4月15日到6月15日间安排7次播期试验。各播期处理单株性状和群体产量比较结果表明：4月25日至5月5日播种能够避开“倒春寒”危害,保证有较多的双饱果、较少的烂（芽）果,获得较高的产量。     

基于个体视角下的苏北农村住房需求层次分析

利用SPSS软件对问卷调查数据的统计,分析了苏北地区农村居民的住房现状、需求及其与居民属性的相关关系,通过聚类将调查的居民分为4个组群,在此基础上重。长分析各组群居民的住房需求和差异。结果表明,苏北农村目前以院落式瓦房或平房为主要住宅类型,对于未来的需求是希望能居崔雀院落式2～3层的独立楼房。不同组群居民的需求存在差异,年龄、文化层次、经济条件等是影响居民住房需求层次的主要原因,相关性分析反映出文化层次越高、经济条件越好、居住现状好的居民对住房的需求层次越高,年龄越大的居民、越是固守农耕的居民越不愿意集中居住。     

苏啤3号基本苗对群个体质量及产量的影响

为了研究不同播种密度的基本苗对苏啤3号群个体质量与产量的影响。设120万1、80万2、40万3、00万和360万/hm25个播种密度基本苗处理,通过田间试验研究基本苗与不同生育时期总苗数、单株分蘖(成穗)数、叶龄、株高、次生根条数、干物质积累量、抽穗期单茎叶面积、叶面积系数和粒叶比以及产量及其构成因素的相关性。随基本苗的增加,不同生育时期的总苗数和有效穗数增加,单株分蘖(成穗)、次生根数、单株干物质积累量、单穗粒数、千粒重等不断减少,叶龄、株高变化不明显。个体与群体有相互补充作用,当个体弱而群体强或群体强而个体弱时,都可能取得理想产量。综合考虑,基本苗为270万/hm2时,对江苏里下河地区的啤麦生产最有利。     

个人所得税自行申报存在问题及对策

分析了个人所得税自行申报存在问题,并提出了具体的对策.     

多媒体学习中冗余效应与个体差异性的实验研究

在以往研究的基础上,通过教学实验来考察多媒体计算机教学环境下,学习不同呈现方式的视频教学录像片的学习者的个体差异性(只把学习者按照其医学知识经验水平的高低进行划分),以及冗余效应是否显著。     

黄颡鱼个体繁殖力的研究

于2010年3～5月在东江水系采集了47尾性腺处于IV期的黄颡鱼雌性样本,对其个体繁殖力及个体繁殖力与生物学指标的关系进行了研究。结果显示,样本的体长范围为9.6～16.6cm,体重范围为21.99～97.15g;绝对繁殖力(F)在864～19967粒,平均为4748粒;体长相对繁殖力(FL)在81～1202粒/cm,平均为386粒/cm;体重相对繁殖力(FW)在38～284粒/g,平均为147粒/g;绝对繁殖力和体长相对繁殖力与体长、体重、纯体重及性腺重等生物学指标显著相关,而体重相对繁殖力除与性腺重密切相关外,与其他生物学指标的相关性不显著。     

70cm温度与百叶箱温度的差异分析

通过对德州2008年1月1日～12月31日70 cm高度温度与百叶箱温度的差值分析,发现二者差值存在明显的日变化和年变化：08：00,冬半年,T70比T150低或接近,在-0.58～0.36 ℃变化;夏半年,T70比T150高,在0.52～0.88 ℃变化。14：00,全年T70比T150都高出较多,在1.06～2.00 ℃变化。20：00,全年在-0.51～-1.79 ℃变化。日平均温度差值变化趋势与08：00相似,1～3月和9～12月,二者差值在-0.15～0.41 ℃变化;4～8月在0.46～0.61 ℃变化。由于多数农作物如小麦、大豆、水稻、棉花、辣椒、茄子、西红柿等的生长高度在70 cm左右,所以70 cm高度温度更能为其建立生长、发育、成熟、采摘的气象指标。由此说明,气象部门不但要保留原来的百叶箱温度观测,还应该根据当地规模化生产特点开展相应层次的气象要素观测,为防灾减灾提供更加准确的气象观测数据。