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1.
甘草RAPD-PCR反应体系正交优化研究(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]建立一套适合甘草分子学研究的RAPD-PCR反应体系。[方法]以甘草种质为试材,采用正交试验法设计,对影响RAPD-PCR扩增的主要因素dNTPs、引物、Taq酶和DNA模板进行优化筛选。[结果]总体积25μl的甘草RAPD-PCR最佳反应体系为:10×PCR缓冲液(含MgCl2)2.5μl,10mmol/LdNTPs2.5μl,50ng DNA2μl,10μmol/L引物2μl,5UTaq酶0.4μl。对引物的退火温度进行了梯度筛选,34℃时扩增效果较好。[结论]进行甘草RAPD-PCR反应体系的正交优化非常有效。 相似文献
2.
黄皮RAPD-PCR反应体系的优化 总被引:2,自引:0,他引:2
以5′-GTCGTTCCTG-3′为随机引物,以酸黄皮为试材,对黄皮RAPD反应体系进行了优化研究,结果表明:20μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2 、随机引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度和用量分别为2.0 U、2.5 mmol/L、0.5 umol/L、50 ng、0.20 mmol/L。适宜的扩增程序为94℃预变性3 min,1个循环;94℃变性45 s,36℃退火45 s,72℃延伸1 min,38个循环;72℃后延伸7 min。 相似文献
3.
为了建立一套适宜于白僵菌(Beauveria bassiana)退化研究的RAPD-PCR反应体系及反应程序,通过采用L16(45)正交试验及退火温度和循环次数的单因素优化对反应体系中的各因素进行优化组合。结果表明:20μL PCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为,10×Buffer 2μL,MgCl2(25 mmol/L)2.4μL,4种dNTP(各2.5mmol/L)0.8μL,随机引物(10μmol/L)1.4μL,TaqDNA聚合酶(5 U/μL)0.4μL,模板DNA(10 mg/L)1μL。反应条件为,94℃预变性2 min,94℃变性30 s,38℃退火40 s,72℃延伸1 min,循环次数40次,72℃延伸5 min。 相似文献
4.
以CTAB法提取卷丹百合的基因组DNA,采用正交试验对影响卷丹百合RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化。结果表明,最佳的RAPD-PCR反应体系(20μl)中含:10×buffer 2μl,模板DNA60 ng,Mg2+1.875 mmol/L,dNTP 0.8 mmol/L,引物30 ng及Taq酶0.5 U。 相似文献
5.
以东北蓖麻为材料建立蓖麻RAPD反应优化体系,用于蓖麻遗传多样性分析.用CTAB提取蓖麻基因组DNA,采用正交试验对影响蓖麻RAPD-PCR扩增的反应组分浓度进行优化.结果表明最佳的蓖麻RAPD-PCR反应体系(25μ1)中含10xbuffer 2.5μ1,模板DNA 4ng/μ1,dNTP 0.4mmol/L,引物0.321μmol/L及Taq酶0.1U/μ1.扩增程序为94℃预变性2min;94℃变性30s,35℃退火30s,72℃延伸1min20s;40个循环;72℃延伸5min.通过正交体系优化,获得了较优的蓖麻凡RAPD-PCR反应体系,为蓖麻RAPD分子标记提供了理论基础. 相似文献
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洋葱(Allium cepa L.)RAPD-PCR反应体系及扩增程序的优化 总被引:3,自引:0,他引:3
为建立多态性高、稳定性好的洋葱RAPD-PCR反应体系,采用正交设计,研究了Taq酶、Mg2 、引物和dNTP 4种RAPD-PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,在此基础上对模板DNA用量、扩增程序中退火温度和反应循环次数进行了筛选。试验结果表明,洋葱20μl RAPD-PCR优化反应体系为1×Buffer、2.0 mmo1/L Mg2 、1.0 UTaqDNA聚合酶、200μmo1/L dNTP、0.6μmo1/L引物、2%甘油和15 ng DNA模板;PCR扩增程序为94℃预变性4 m in;94℃变性30 s,35℃退火40 s,72℃延长1.5 m in,45个循环;72℃保温延伸7 m in。 相似文献
8.
杜鹃花属植物基因组DNA RAPD-PCR反应体系的优化 总被引:1,自引:0,他引:1
试验通过系统比较研究,确立了杜鹃属植物RAPD-PCR的最佳反应体系,即20μL反应体系中:模板DNA(10 g.L-1)1.5μL;10×PCR buffer 2μL;Taq酶(0.5 U.μL-1)0.3μL;引物(0.8μmol.L-1)4μL;MgCl2(25 mmol.L-1)1.8μL;dNTPs(dATP、dCTP、dTTP、dGTP各含1.0 mmol.L-1)0.6μL。经试验验证,该反应体系重复性高,扩增条带亮度均匀,弥散现象少。 相似文献
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用正交设计法优化辣椒ISSR-PCR反应体系 总被引:3,自引:0,他引:3
采用正交设计L16(45)对辣椒ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物浓度)在4水平上进行优化试验。结果表明,最佳反应体系为:在25μl总反应体系中,含1×PCR缓冲液、2.0 mmol Mg2+、1.5 unitTaqDNA聚合酶、0.25 mmoldNTP、0.48μmol引物、120 ng模扳DNA。扩增程序为:95℃预变性5 min;94℃变性45 s,51℃退火1 min,72℃延伸2min,进行38个循环;最后72℃延伸10 min。新优化的辣椒ISSR-PCR反应体系和程序有很好的重复性和稳定性。此研究为今后利用ISSR技术对辣椒进行种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位提供了一个较理想的应用方案。 相似文献
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牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计 总被引:11,自引:1,他引:11
以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μmol/L引物,10~20 ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,45~60(℃不同引物退火温度各异)复性45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的退火温度。 相似文献
14.
以芦笋(Asparagus offinalis L.)为材料,对影响SRAP—PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP—vcR析的最佳反应体系:20μL的反应体积中包括0.2mmol/LdNTPs0.4gL;1UTaqDNA酶1.0gL;1.5mmol/LMg2 1.2μg;上下引物各30ng,每个引物O.5此;60ng模板DNA1.1.0μL;10Buffer2.0凼无菌双蒸水13.4此。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。 相似文献
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以芦笋(Asparagus officinalis L.)为材料,对影响SRAP-PCR扩增结果的因素dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA进行了正交优化设计的研究。结果表明,适合芦笋SRAP-PCR分析的最佳反应体系:20μL的反应体积中包括0.2mmol/LdNTPs0.4μL;1UTaqDNA酶1.0μL;1.5mmol/LMg2+1.2μL;上下引物各30ng,每个引物0.5μL;60ng模板DNA1.0μL;10×Buffer2.0μL;无菌双蒸水13.4μL。为今后利用SRAP标记技术研究芦笋的遗传多样性奠定基础。 相似文献