A型流感病毒神经氨酸酶蛋白功能研究进展

A型流感病毒(IAV)的宿主谱广泛,对人类健康和畜禽养殖均构成严重威胁。神经氨酸酶(neuraminidase, NA)作为IAV囊膜表面主要的糖蛋白之一,在病毒的感染过程中至关重要,是常用的抗病毒药物作用靶点。以往关于NA蛋白的研究主要聚焦于其通过切割宿主细胞表面唾液酸与血凝素(hemagglutinin, HA)之间的α-2,6或α-2,3糖苷键以促进新生病毒粒子释放的功能方面,而近来不断有证据表明,神经氨酸酶蛋白在受体结合和宿主适应性方面同样发挥关键作用。论文综述了神经氨酸酶蛋白的结构特征,并对神经氨酸酶蛋白的酶催化活性、受体结合功能以及与HA蛋白的功能平衡方面进行了总结,以期为深入理解IAV感染的分子机制提供参考。     

A型流感病毒聚合酶研究进展

A型流感病毒(Influenza A virus,IV)基因组为单负链线状分节段RNA,总长约13 600个核苷酸(nt).根据襄膜上血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性的不同,可分为16个H亚型(H1～H16)和9个N亚型(N1～N9).A型流感病毒可突破种问障碍适应新的宿主,从而导致新的血清型毒株流行.1918年、1957年和1968年3次大规模流感疫病的暴发,给人们敲响了警钟.在此背景下,疫苗不断更新、预防流感病毒的药物相继问世,但目前的疫苗和治疗药物并不能完全阻止流感病毒对人类的感染,新疫苗的研制和新药物靶点的发现具有明显的滞后性.     

A型流感病毒反义遗传学研究进展

1流感病毒的组成结构A型流感病毒是正粘病毒科的主要成员之一。A型流感病毒基因组由长短不一的8条单股负链RNA穴ssRNA雪片段组成。流感病毒粒子是多形态的,直径大约80～120nm。在病毒粒子囊膜表面有3种蛋白:血凝素蛋白(HA),神经氨酸酶蛋白以离子通道蛋白M2;在病毒囊膜下面衬有大量的基质蛋白M1。聚合酶复合体穴RNP雪由病毒基因组RNA穴vR鄄NA雪、NP、PB2、PB1和PA蛋白组成。1.1流感病毒的生命周期流感病毒反义遗传学操作是建立在对流感病毒生命周期的彻底阐明的基础之上的。流感病毒的生命周期的第一步是病毒粒子表面的血凝素糖…     

抗流感病毒的中药研究

禽流感(AI)是由流感病毒(AIV)引起的一种烈性传染病,已给养禽业造成了巨大损失,还威胁着人类健康.自1997年和1999年AIV直接感染人和引起致死事件以来,已被国际兽疫局确定为Ⅰ类烈性传染病.因AIV表面的红细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA)不断发生变异,故AI的病毒株很多,目前已发现有16个H亚型和9个N亚型.不同的亚型毒株之间又无交叉保护作用,所以研制AI疫苗较为困难.     

抗流感及禽流感病毒新药"帕拉米韦"研究进展

帕拉米韦（Peramivir）是一种以流感病毒表面糖蛋白神经氨酸酶为作用靶点的新型环戊烷类抗流感药物.本文综述了帕拉米韦的合成工艺、作用机理、药效学、药动学、临床研究及毒副作用等方面的研究进展.     

反向遗传操作技术在流感病毒研究中的应用进展

流感病毒属于正粘病毒科,流感病毒属,为单股、负链、分段的RNA病毒。按照病毒核蛋白和基质蛋白的不同可分为A、B和C三个型。A型流感病毒又可根据病毒粒子血凝     

畜禽用抗流感病毒药物研究进展

近几十年来,兽医临床治疗细菌性感染与抗寄生虫化疗取得了辉煌的成绩,这与大量的安全、有效的抗菌药物及抗寄生虫药物的研制成功密切相关;与此相比,只有为数不多的抗病毒药物被证明具有临床价值,这样的药物只可用于有限的几种适应症。其中,畜禽流感病毒感染的预防与治疗药物随着人类抗流感病毒药物的发展,逐渐成为兽医临床上具有应用价值的一类药物。本文对此作一简要综述。一、三环胺类三环胺类包括金刚烷胺、金刚乙胺等衍生物。这两种药物从60年代及80年代上市以来,广泛应用于A型流感病毒所致感染的预防与治疗。该类药物对于一些RNA病毒…     

金丝桃素体外抗H9N2亚型禽流感病毒活性研究

研究金丝桃素体外抗H9N2亚型禽流感病毒的活性。用MTT法观察金丝桃素预防、治疗、以及体外直接作用15 min 4种给药方式对感染H9N2亚型禽流感病毒的细胞的保护效果,以及用荧光酶标法测定金丝桃素对禽流感病毒神经氨酸酶的抑制活性。结果表明,金丝桃素的4种给药方式在体外对感染禽流感病毒的细胞的的保护率分别为6.43%、5.31%、39.89%、69.04%。金丝桃素对禽流感病毒神经氨酸酶活性的抑制,IC50为0.58 mg/mL。表明金丝桃素对感染H9N2亚型禽流感病毒的细胞有一定保护的作用,且对神经氨酸酶的活性有较显著的抑制作用。     

马流感病毒(A/Equine/Qinghai/1/94)神经氨酸酶基因的克隆与同源性分析

本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶(NA)基因序列，设计并合成一对特异性引物，经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株(A／Equine／Qinghai／1／94)NA基因，将片段连接到PGEM—T-easy载体并转化DH5a，提取阳性菌落的质粒经EcRol酶切和PCR鉴定其大小均为1．4Kb左右，对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现，我国马流感病毒青海株与A／Equine／Alaska/1／91、A／Equim／Tennessee/5／86和A／Equine／Algiers/72等关系较近，核苷酸同源率为98．2％—97．4％；与我国马流感吉林株(A／Equine／Jilin／1／89)关系较远，核苷酸同源率仅为72．0％；而与H7N7亚型马流感病毒A／Equine／Prague／1／56核苷酸同源率仅为38．0％。     

国外有关禽流感病毒的研究概况

A型流感病毒能感染多种动物，包括禽类、猪、马、海鸥和鲸鱼。感染禽类的流感病毒被称之为禽流感病毒。所有的A型流感病毒亚型都能在野鸟中持续存在，成为A型流感病毒的天然宿主。根据流感病毒的表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)，目     

糖复合物抗流感病毒活性研究

糖复合物及其生物学功能在现代生物工程和制药工业中有日益增加的重要性,大量研究表明许多天然多糖、糖复合物对各种病毒有抑制作用。流感病毒严重危害畜禽和人类健康,本文主要介绍糖复合物的免疫生物功能,并从阻断病毒吸附、黏膜免疫、系统抗体免疫和免疫佐剂等角度讨论了糖复合物防治流感病毒功能。     

多重RT-PCR检测猪流感病毒及血清亚型

根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段。根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系。经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断。特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2ng。采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%。     

A型流感病毒蛋白研究进展

流感是由A型流感病毒引起的一种感染和／或疾病综合征。A型流感病毒已成为鸟类、人类和低等哺乳动物疾病的主要病原之一，其病毒基因组由8个节段组成，共编码10种以上的多肽，每种多肽都有着重要的生物学功能。     

抗流感病毒的中草药研究进展

流感是一种常见多发的呼吸道疾病。中医认为流行性感冒为疲疠之邪，属于温病范畴。中草药中的解表药、清热药以及以它们为主组成的中成药通过抗病毒、解热抗炎、镇痛及增强机体免疫功能而达到抗流感的疗效。中草药及其中成药抗流感病毒的基本原理在于扶正祛邪或驱邪扶正，通过阻断病毒繁殖过程的吸附、穿入、复制、成熟中的某一环节而直接抑制病毒，并通过提高机体的免疫功能，促进机体的特异性和非特异性免疫功能而间接抑制病毒。研究和开发抗动物流感的中草药及其中成药有极广阔的前景。     

Genetic characterization of influenza A viruses circulating in pigs and isolated in north-east Spain during the period 2006–2007

Swine influenza virus is one of the most important pathogens involved in the swine respiratory disease complex. Recent serological surveys showed a high prevalence of swine influenza strains belonging to the H₁N₁, H₁N₂ and H₃N₂ subtypes circulating in pigs in Spain. However, little is known about their genome sequence. Five swine influenza strains were isolated from some unrelated outbreaks occurred during 2006–2007, and their complete genome sequences were determined. Phylogenetic analysis revealed that they belonged to the lineages “Avian-Like” H₁N₁, “Human-Like” H₃N₂, and “Human-Like” H₁N₂, showing tight relationships with early or contemporary strains described in Europe. Notably, one virus of the H₁N₂ subtype showed genetic and antigenic divergence with the European contemporary strains or vaccinal strains of the same subtype, suggesting that some local and divergent clusters of the virus may pass unnoticed in routinary subtyping. Finally, analysis on the entire pattern of genome segments suggested that a second reassortment event could have influenced the evolution of that divergent H₁N₂ strain.     

禽流感病毒血凝素分子生物学研究进展

禽流感病毒基因组由8条单性负链RNA组成,血凝素基因是禽流感病毒基因组中变异最大的基因,禽流感病毒的抗原性和致病性很大程度上取决于该基因的变异情况。血凝素在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用,但可刺激机体产生中和抗体来中和病毒的感染力,而且血凝素诱导机体产生的体液免疫反应,对宿主抵抗禽流感起到了决定性保护作用,使目前研制血凝素基因工程疫苗成为禽流感病毒疫苗的研究热点。血凝素发挥功能之前必须裂解为两条肽链HA1和HA2,其裂解位点的氨基酸残基的组成是决定禽流感病毒致病力高低的主要因素。文章主要从血凝素的基因及其编码的蛋白、裂解位点序列和基因疫苗等角度对禽流感病毒血凝素分子生物学的研究状况进行了综述,可为禽流感的预防和治疗提供参考。     

猪流感病毒血凝素基因的研究进展

猪流感是由猪流感病毒引起的一种急性、热性、高度接触传染性呼吸道疾病,可继发和并发多种细菌病和病毒病,已日益成为危害世界猪群的主要传染病之一。猪流感病毒血凝素基因作为流感病毒表面最主要的抗原基因,其表达蛋白具有丰富的生物学作用,对流感病毒的致病性起着主导作用。作者主要对猪流感病毒血凝素基因的研究进行了综述,为进一步防治猪流感及开发新型疫苗提供帮助。     

表达H5亚型AIV HA和NA基因重组鸡痘病毒的构建及在高母源抗体商品鸡的免疫效力试验

母源抗体的干扰是重组鸡痘病毒(FPV)活载体基因工程疫苗至今未能得到推广应用的主要原因,本试验使用FPV新的复制非必需区构建的载体pP12-18构建在高母源抗体商品鸡具有较高免疫力的基因工程疫苗.将H5亚型禽流感病毒分离株的血凝素(HA)基因和神经氨酸酶(NA)基因定向插入鸡痘病毒转移载体pP12-18中,H5A和NA基因的启动子分别为PS和PE/L,获得用不同的启动子启动不同的外源基因且两基因盒方向为背向串联的重组转移载体p12LSH5HANA.将p12LSH5HANA转染至已感染鸡痘病毒282E4疫苗株(wt-FPV)的鸡胚成纤维细胞(CEF)中.p12LSH5HANA与wt-FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV-12LSH5HANA.通过在含X-Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑,获得纯化的重组病毒.经传代证实该重组病毒具有良好的遗传稳定性.用105PFU的rFPV-12LSH5HANA免疫无特定病原体(SPF)鸡,能激发机体产生有效的血凝抑制(HI)抗体.初步的动物试验表明,该重组病毒能使经滴鼻点眼攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为100%.在高母源抗体的商品鸡上,rFPV-12LSH5HANA与原有载体构建的重组疫苗rF-PV-11SH5HANA的免疫效力有显著差异,保护率分别为81.4%和45.4%.结果表明,选择FPV合适的复制非必需区构建载体是提高重组FPV在高母源抗体商品鸡免疫效力的有效策略之一.     

禽流感病毒M2蛋白的原核表达及免疫原性研究

基质蛋白M2是流感病毒的3种表面抗原之一,也是流感病毒中最为保守的蛋白之一,被认为是具有交叉保护能力的流感疫苗的理想候选抗原。论文从H9N2亚型禽流感病毒感染的狗肾传代(madindarby canine kidney,MDCK)细胞中克隆全长M2基因,并采用OE-PCR(overlap extension,PCR)得到缺失跨膜区的M2基因(sM2)。将sM2基因克隆到pGEX-KG原核表达载体,在大肠埃希菌中获得表达量较高的融合蛋白GST-sM2,而且以可溶形式存在。利用亲和层析的方法纯化蛋白,经Western blot证明,GST-sM2蛋白具有良好的免疫原性。ELISA检测发现GST-sM2能与H9、H5和H7亚型禽流感病毒抗体均发生反应。进一步将纯化蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c鼠,结果在免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体,为开发具有交叉保护力的禽流感疫苗奠定了基础。