影响鸡新城疫灭活疫苗病毒含量的主要因素探讨

鸡新城疫灭活疫苗生产中半成品病毒效价受诸多因素的影响,如非免种蛋的母源抗体,种毒的效价,后孵化温度、湿度,种毒的稀释倍数,鸡胚不同死亡时间段等,本文主要针对鸡胚不同死亡时间段、种毒稀释倍数、后孵化温度进行探讨.结果表明:在相同条件下,鸡胚在96 h收获胚液的病毒含量最高,在96 h后病毒含量并没有明显提高,为了缩短生产时间,节省劳力,可在96h时收获鸡胚;在相同条件下,种毒稀释1万或2万倍时,收获的胚液病毒含量最高;在同等条件下,鸡胚后孵化温度在37℃、37.5℃时胚液病毒含量最高.     

鸡新城疫活疫苗种毒HB1株和F株保存期试验

对不同保存年代的鸡新城疫活疫苗种毒HB1株（Ⅱ系）和F株（Ⅲ系）各3批进行了病毒含量测定和免疫原性试验。3批不同保存年代的鸡新城疫病毒HB1株和F株病毒含量均≥108.4EID50/0.1 mL,最小免疫量均≤2500 EID50。结果表明,鸡新城疫病毒HB1株和F株毒种在-70℃分别保存16年和19年,病毒含量和免疫原性仍符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》（二〇〇〇年版）规定。     

鸡新城疫La Sota株、传染性支气管炎W93株二联活疫苗研究 Ⅲ．疫苗免疫期试验

分别用3批鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗(La Sota W93)，ND La Sota单苗和IB W93单苗免疫SPF鸡，并于免疫后第3、7、14、30、90、150天分别用NDV和NIBV强毒攻击。结果表明，二联活疫苗(La Sota W93)于免疫后7-150d可获得与相应单苗同样的保护力。     

鸡新城疫CS2株活疫苗中间试制及区域试验

在北京市兽医生物药品厂进行中间生产试验,按照《鸡新城疫CS2 株活疫苗制造及检验试行规程》(草案)扩大生产疫苗共7 批,计94.3万羽,检验全部合格。在北京地区进行区域试验,选择了7个鸡场8 个鸡群,共免疫12.59 万羽,免疫后10～15d,HI抗体几何平均值(GMT)达到1∶46～1∶832; 80d 达到1∶99 以上。疫苗安全有效。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗（La Sota株＋M41株＋L株）

青岛澳兰百特生物工程有限公司自2004年成立了科技攻关小组,开始了对鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感H9亚型三联灭活疫苗（La Sota株＋M41株＋L株）【以下简称新-支-流（H9亚型）】的研究工作。经过不懈的努力,终于完成了对该三联灭活疫苗制苗用毒种的筛选、安全性鉴定、免疫原性鉴定、代次控制,以及三联灭活疫苗的生产工艺研究、安全和效力检验、免疫剂量、免疫期、保存期试验、中间试制等工作,并进行了临床试验,积累了必要的试验数据,取得了详实的研究结果。     

鸡新城疫La Sota株、传染性支气管炎W_(93)株二联活疫苗研究 Ⅲ.疫苗免疫期试验

分别用3批鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗(LaSota+W93),NDLaSota单苗和IBW93单苗免疫SPF鸡,并于免疫后第3、7、14、30、90、150天分别用NDV和NIBV强毒攻击。结果表明,二联活疫苗(LaSota+W93)于免疫后7～150d可获得与相应单苗同样的保护力。     

NDV地方分离株与La Sota株抗原交叉性研究

用新城疫弱毒疫苗株La Sota阳性血清测定NDVMM,NDVLD,NDV-NH3株新城疫病毒地方分离株和标准株La Sota,F48E9的HI效价,以La Sota阳性血清对La Sota疫苗株的HI效价为参照,分析NDV地方分离株与疫苗株抗原交叉性。结果表明,NDV-MM,NDV-LD 2个野毒株HI效价与NDV-LD HI效价相近,但比La Sota HI效价低2．3个～2．7个滴度;NDV-NH与F48E9 HI效价相近,比La SotaHI效价低4．2个～4．3个滴度,提示以上3个野毒株与疫苗株之间的抗原相关性差异较大。动物免疫保护试验结果表明,经La Sota免疫（HI效价〉2^5）后攻毒保护率为80％-100％。     

鸡新城疫-禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+HP株)的灭活试验

为了研究鸡新城疫-禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+HP株)中两种病毒的最佳甲醛灭活浓度和灭活时间,试验选取四种甲醛最终浓度0.1%、0.2%、0.4%、0.8%,分别对两种抗原进行灭活,在灭活10 h、12 h、14 h、16 h、18 h、24 h、30 h、36h、42 h分别取样,对每个样品进行灭活检验和血凝价测定。从试验结果得出,新城疫病毒(La Sota株)最适合的甲醛浓度为0.1%,灭活时间为16 h;禽流感病毒(H9亚型HP株)最适合甲醛浓度为0.1%,灭活时间为18 h。     

鸡新城疫(La Sota株)浓缩油乳剂灭活疫苗的研究

鸡新城疫（ND）对幼龄鸡和育成鸡均危害较大，免疫接种是控制新城疫的主要手段，而常规的灭活疫苗接种剂量大，产生抗体水平低，易造成鸡群的应激反应。为了解决此问题，进行了鸡新城疫浓缩油乳剂灭活疫苗的研究，现将研究情况报道如下。     

通过鸡新城疫La Sota株的干扰作用鉴定传染性支气管炎病毒

传染性支气管炎病毒(IBV)干扰鸡新城疫病毒(NDV)在鸡胚上的生长现象已被作为一种诊断传染性支气管炎的方法。用IBV—NDV干扰试验对十五株来自疑为传染性支气管炎鸡群的病毒进行分析:接种IBV10小时后再接种NDV La Sota毒株,后通过血凝(HA)试验测定,有八株能干扰La Sota在鸡胚上的生长。 IBV这种干扰作用具有特异性,因为它可被相应的IBV抗血清所抑制。此种方法证明干扰作用是敏感的。在一些IBV继代代数少的情况下、虽然IBV不引起鸡胚产生病变,但可干扰NDV的HA活性。此外,血清学反应IBV阴性的样品不能干扰NDV在鸡胚上的生长。从以上情况看,对于分离IBV野毒来说,IBV—NDV干扰试验显然是一种改进的诊断方法。     

鸡新城疫病毒的分离和鉴定

旨在为发病鸡场找到致病原,本研究利用SPF鸡胚从发病鸡组织中分离到1株病毒,病毒对1%鸡红细胞的血凝价为28,病毒的ELD50为107.83/0.1 m L,病毒可以被新城疫病毒阳性血清特异性中和,攻击该病毒的SPF鸡表现出典型的新城疫病毒感染症状,RT-PCR鉴定显示该病毒为新城疫病毒。     

鸡、支二联灭活疫苗（La Sota＋M41株）鸡、支、减三联灭活疫苗（La Sota＋M41株＋京911株）

我国是养鸡大国,鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征一直是危害我国养鸡业的重要传染病,目前防治这几种病的联苗尚不多见。用单苗防疫费时费力,而且多次免疫会对鸡群造成一定的应激,使生产性能下降。     

非典型鸡新城疫的病因研究初报（一）

应用血清学、生物学方法、从我省产蛋量下降、HI抗体在1：128以上的疑似非典型鸡新城疫（CND）病鸡群中分离到1株病毒，经鉴定和致病力测定，明确是1株ND强毒，毒力与F48E9相近，然后采用该株野毒感染不同抗体水平的3批蛋鸡及肉鸡，结果3批蛋鸡均是低抗体滴度组（1：10－1：40）发生了CND症状，感染后6－7天开始产蛋停止，经15－17天后才恢复产蛋，高抗体滴定组（1：80以上）无明显变化，无抗体对照组出现典型鸡新城疫变化，全部死亡；病毒感染后第6、10天监测HI抗体，结果低滴度组第6天达1：80－1：160，第10天达1：160－1：1280。试验结果表明，我们分离到的NDV，既可引起典型的ND，也可引起非典型的ND；高HI抗体蛋鸡产生非典型鸡新城疫的病因之一，是由于存在低抗体鸡群而发生了CND，其高HI抗体有竞争是由于强毒感染后产生的抗体。     

鸡新城疫La Sota、传染性支气管炎(H120+W93)二联灭活疫苗的研究

将鸡新城疫La Sota-传染性支气管炎H129二联抗原液、鸡传染性支气管炎W93抗原液分别用甲醛灭活，经浓缩后按一定比例混合，与油佐剂乳化制成二联灭活疫苗，对30日龄的雏鸡免疫，每只0．3ml，免疫接种3周后，新城疫病毒的HI抗体平均达9．7log2，免疫鸡只耐受呼吸道型、嗜肾型传染性支气管炎强毒攻击，保护率均达到90％，疫苗使用安全。     

NDV La Sota株三个病毒克隆株间生物学特性的比较研究

为比较新城疫病毒(NDV)La Sota株不同克隆株之间的生物学特性,本研究通过挑取细胞病变区对LaSota株病毒进行纯化,并获得了3个病毒克隆株。通过血凝素热稳定性试验、病毒复制动力学试验和免疫原性试验,对3个病毒克隆株进行分析比较。结果显示,不同的病毒克隆株间在这些生物学特性上存在着不同程度的差异,表明为了获得性质均一、稳定的病毒,有必要进行病毒的纯化,并根据实验目的进行比较取舍。     

同胚增殖鸡新城疫-传染性支气管炎病毒效果的研究

本试验将鸡新城疫病毒LaSota株、传染性支气管炎病毒M41强毒株按不同倍数稀释后,同胚接种10日龄易感鸡胚,接种后72、96 h分别收获病毒液,通过鸡胚半数感染量(EID50)测定病毒含量。结果表明:72、96 h收获的病毒液病毒含量差异不明显,均能达到配苗要求,但72h病毒液收量最多。本试验为生产高质量鸡新城疫-传染性支气管炎二联灭活疫苗、降低成本提供了一定参考。     

鸡新城疫La Sota株、鸡传染性支气管炎W93株二联活疫苗研究Ⅱ.接毒剂量选择试验

将鸡新城疫La Sota毒种和嗜肾型鸡传染性支气管炎W93毒种分别用生理盐水做适当稀释后，将两种病毒液等量混合，接种于同一SPF鸡胚尿囊腔内。结果表明，HBV、NDV在同一鸡胚内增殖时无互相干扰现象；收获的鸡胚液(La Sota W93)中NDV、IBV的效价分别达到相应单苗水平。     

鸡新城疫病毒B95株融合蛋白基因的克隆与序列分析

以鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）澳大利亚布里斯班分离株Ｒ９５的 ＲＮＡ为模板,运用的ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增其融合蛋白（Ｆ０）基因的ｃＤＮＡ。将扩增的Ｆ基因克隆到质粒ＰＵＣ１９中,转化入大肠杆菌ＪＭ１０９中,经ＡＩＸ平板筛选,ＰＣＲ等方法鉴定出Ｆ基因的阳性重组质粒,同时测定了Ｆ基因５’端７０９个核苷酸及３’端７６８个核苷酸的序列,对相应的氨基酸序列的研究表明,Ｂ９５株属弱毒株,含有Ｆ０中保守的疏水功能区和可糖基化位点,Ｂ９５与强毒株Ｆ４８Ｅ８株、Ｍｉｙａｄｅｒａ株和中等毒力的Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ Ｃ株的氨基酸序列的同源性在９０％左右。     

国家三类兽用新生物制品 鸡新城疫低毒力活疫苗（ZM10株）

我国普遍采取疫苗接种控制鸡新城疫．且取得了一定的效果，但仍有免疫失效而爆发鸡新城疫的报道.针对这个问题．世界各国均投入大量的精力开发最佳的疫苗和免疫程序．1955年国际兽疫局（OIE）推荐使用的鸡新城疫弱毒疫苗为缓发型（Lentogenic strain）HB1株（Hitchner,1948）．La Sota株（Bandette，1949）和F株（Aspfin，1952），各国（包括中国）应用最广泛的是HB1和La Sota株。然而在过去的40多年里．这些活苗配合灭活油乳剂苗单独或联合应用．