β-微管蛋白联合ITS序列在金花菌鉴定中的应用

"金花"是曲霉属(Aspergillus)真菌在砖茶内部经"发花"工艺形成的黄色闭囊壳,"金花"菌原为茯砖茶所特有的一种真菌。目前对于金花菌群的分离鉴定多是通过形态学特征或ITS序列等方法,其鉴定结果存在较大差异。本课题组通过β-微管蛋白联合ITS序列对来源于茯砖茶和普洱茶的"金花菌"进行了生物学地位的鉴定。根据分离菌株的菌落特征、显微形态的观察、ITS序列和β-微管蛋白基因(BenA)的测序及系统进化树的构建,结果表明:单纯通过ITS序列比对,会产生多种鉴定结果,而通过β-微管蛋白基因(BenA)序列可弥补ITS序列在曲霉属真菌种间鉴定的不足,两者结合可很好地对曲霉属真菌进行种间鉴定。此研究结果可为"金花菌"分离鉴定方法提供参考。     

普洱茶中真菌种群的分离与分子鉴定

采用平板稀释法以孟加拉红(DRBC)和18%的甘油琼脂(DG18)两种培养基对60个普洱茶样品中的真菌种群进行了分离,种群分离结果显示:样品中真菌种群数量变化值范围为1.6×103～1.16×105cfu/g;应用分子生物学的手段,对分离到的71株真菌做了分子鉴定,鉴定结果表明:这些真菌分别属于19个属,40个种,主要是曲霉属13种,青霉属7种,其他属20种。数量上占优势的真菌种群是酵母和曲霉属的不同种。这些真菌的安全性有待进一步评估。     

西藏高原主要麦类作物真菌毒素污染与产毒真菌分布研究

为探明西藏麦类作物中真菌毒素污染程度及产毒真菌种类与分布,以青稞、小麦为研究对象,对其籽粒中多种毒素进行分析,并对毒素污染阳性样品进行真菌分离鉴定。结果表明,2018年毒素总检出率为20.13%;杂色曲霉毒素检出率最高,为10.74%;OTA超标率最高,为3.36%;小麦的毒素检出率和超标率都高于青稞,二者的污染毒素种类以OTA、ZEN、ST为主。西藏高原42份被真菌毒素污染的农作物籽粒中共分离到199份真菌,分属23属67种真菌,青霉属为优势属,曲霉属次之。     

芝麻种子带菌检测及药剂消毒处理效果

采用吸水纸检测法对我国6个芝麻主产区的13个广泛栽培的芝麻品种进行了带菌检测,并测定了5种杀菌剂对芝麻种子的消毒效果。结果表明,芝麻种子外部携带真菌的主要类群包括镰孢属（Fusarium spp.）、棒孢属（Corynespora spp.）、长蠕孢属（Helminthosporium spp.）、壳球孢属（Macrophomina spp.）、链格孢属（Alternaria spp.）、曲霉属（Aspergillus spp.）和青霉属（Penicillium spp.）,其中引起芝麻茎点枯病的壳球孢属分离频率和带菌率最高。种子内部携带的真菌类群主要包括镰孢属、棒孢属、壳球孢属和曲霉属等,引起芝麻叶枯病的棒孢属真菌分离频率和带菌率最高。供试的5种杀菌剂对芝麻种子均有一定的消毒效果,其中50 %扑海因和80%多菌灵处理对芝麻种子消毒效果最显著。     

高通量测序研究霉变黑毛茶的真菌多样性

为了解高湿条件下霉变黑毛茶的微生物情况,通过人工促霉培养和Illumina Miseq高通量测序技术研究了黑毛茶霉变过程的真菌多样性,并探讨了不同OTU(Operational Taxonomic Unit)阈值划分对真菌多样性生物信息学分析的影响。结果表明,高湿条件下霉变黑毛茶的真菌分类学地位集中于2门(Ascomycot,Basidiomycota)6属(Aspergillus,Galactomyces,Ogataea,Debaryomyces,Pichia和Cryptococcus),其中曲霉属(Aspergillus)真菌相对丰度值最大,达98%以上。不同OTU阈值划分水平导致了同一样本的分类学地位、多样性指数及群落结构组成的分析结果存在差异。相似性0.97水平下的OTU聚类真菌群落Shannon多样性指数为0.15~0.43,0.99水平下Shannon多样性指数为0.28~0.58。曲霉属(Aspergillus)真菌为高湿条件下导致仓储黑毛茶霉变的优势真菌种群。     

福建省蔬菜根结线虫卵囊寄生真菌鉴定

调查了福建省部分地区的蔬菜根结线虫卵囊寄生真菌。从8种蔬菜病根上采集根结线虫卵囊样品624份,分离到真菌401株,除34株不产孢及疑难种未鉴定外,已鉴定的真菌有18个属：镰孢菌、拟青霉、根霉、曲霉、厚垣孢普可尼亚菌、丝核菌、弯孢、毛霉、刚毛孢、木霉、链格孢、拟盘多毛孢、青霉、炭疽菌、黑孢霉、小克银汉霉、枝孢霉、横隔霉。镰刀菌属、曲霉属、木霉属为优势真菌,分别占总分离数的31.2%、10.2%、12.7%;淡紫拟青霉和厚垣孢普可尼亚菌分别占8.1%和4.5%。     

29株具有抗菌和细胞毒活性红树林真菌的鉴定

从海南省文昌红树林分离到29株具有抗白色念珠菌和(或)细胞毒活性的真菌,分别采用形态观察、生理生化特征和核酸序列分析进行鉴定。结果表明,29株真菌中,有7株曲霉属(Aspergillus),16株青霉属(Penicillium),1株正青霉属(Eupenicillium)、1株新萨托菌属(Neosartorya)、1株拟青霉属(Paecilomyces Bainier),还有3株暂不能定属。     

化感水稻内生真菌的分离鉴定及其发酵产物的生物学效应研究

以化感水稻品种‘PI312777’‘6173’和‘6180’为研究对象,从水稻根、茎和叶中分离获得70株内生真菌,采用形态学观察和rDNA-ITS区序列分析,对内生真菌进行分类鉴定。进一步以化感水稻‘PI312777’分离得到的粘红酵母和塔宾曲霉为试验菌株,通过不同稀释倍数的真菌发酵液对非化感水稻进行MS半固体培养基育苗试验,研究化感水稻内生真菌发酵产物对非化感水稻萌发率、株高等形态指标及苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）活性的影响。结果表明,从供试化感水稻品种中共分离得到17种内生真菌,经rDNA-ITS系统发育树分析鉴定为10个属,这些内生真菌主要分布在曲霉属（Aspergillus）（29.63%）、青霉属（Penicillium）（16.67%）和镰刀菌属（Fusarium）（12.96%）。不同稀释浓度塔宾曲霉发酵液对水稻幼苗生长均有促生作用,其中50倍稀释浓度处理可显著提高水稻幼苗的株高、根长及POD酶活性。粘红酵母菌发酵液5倍稀释浓度可显著提高水稻幼苗的PAL酶活性并对水稻幼苗有促生作用。稗稻共生条件下,塔宾曲霉和粘红酵母发酵稀释液对水稻均有促生效应。本研究可为化感水稻内生真菌进一步应用于水稻生产实践提供有益指导。     

茯砖压制过程中的发花与防霉

茯砖茶不同于青砖、米砖等紧压茶,在干燥过程中要生长繁殖一种金黄色的霉菌,俗称“金花”或“黄花”,它是冠突曲霉的有性孢子,呈黄色粉末状。冠突曲霉是一种真菌,属子囊菌纲,曲菌科。它的生长繁     

金花普洱茶微生物组成谱的ITS和16sRNA基因文库研究

近来以改良工艺制备的"金花普洱茶"外观有大量金色炫目的"金花"点缀,但其表面金花是不是冠突散囊菌以及这种茶叶的微生物组成谱均亟需评价。因此,以该金花普洱茶为研究对象,采用高通量二代测序技术检测真菌ITS和细菌16s RNA基因序列,可以分析该种茶叶中真菌和细菌组成谱。结果显示金花普洱茶富含曲霉属真菌,其中最高丰度的极有可能为冠突散囊菌,由此导致其他真菌含量极低,而假单胞菌属、乳酸菌属、大肠杆菌属和盐单胞菌属为最具优势的细菌。     

八门湾红树林土壤可培养真菌的多样性分析

以文昌市八门湾红树林海莲林区和海漆林区土壤样品作为研究对象,采用稀释平板分离法对土壤样品中的真菌进行了分离,通过形态学观察和ITS-rDNA序列分析对分离得到的真菌进行鉴定,通过生态学指数统计分析,研究了红树林土壤可培养真菌的优势类群及多样性,共分离到真菌206株,包括21个属和无孢类群.两种生境土壤中真菌的主要优势类群是青霉属(Penicillium)、曲霉属(Apergillus)和木霉属(Trichoderma);Shannon-Wiener多样性指数(H’)为1.688～2.281、Pielou均匀度指数(JSW)为0.745～0.864、Margalef丰富度指数(DMA)为1.755～3.415;相似性系数分析结果显示不同土壤样品间真菌种属组成相似性系数(Cs)在0.545～0.737,表明土壤可培养真菌种属组成存在空间上的差异;分离得到的菌株中DF12098和HF12701与Genbank中已经报道的基因序列相似性分别为93％和97％,具有进一步研究的价值,以确定是否是新的微生物菌种资源.     

橡胶树RRIM600品系的内生真菌多样性

从海南省儋州市的橡胶树RRIM600品系上,采集花、叶、枝、果、根组织分离内生真菌,共分离了504个组织块,获得内生真菌545株.根据形态特征对482株产生孢子的菌株进行鉴定,分别归入21个属,大部分为半知菌,共19属,其中丝孢纲真菌12属,腔孢纲真菌7属;少数为子囊菌,共2属.初步研究结果表明:拟茎点霉属(Phmopsis)为橡胶树5种组织中的优势属,刺盘孢属(Colletorichum)为叶片组织中的优势属,侧多隔孢属(Pleurophragmium)为根组织中的优势属.这5种组织中的内生真菌定殖率为50%～100%、分离率为0.74～1.52.内生真菌群落组成的相似性比较结果表明,部分内生真菌具有一定的组织偏好性.     

对辽宁省玉米种子携带的真菌研究

以辽宁省广泛栽培的32个玉米品种的种子为材料进行种子带菌分析,采用保湿培养检验法和分离培养检验法分别对种子表面附带真菌及内部寄藏真菌进行分离和鉴定。在供试的32个玉米品种种子上共分离得到14属真菌,分别为枝顶孢属(Acremonium)、刺毛霉属(Actinomucor)、链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、平脐蠕孢属(Bipolaris)、毛壳属(Chaetomium)、附球菌属(Epicoccum)、镰孢菌属(Fusarium)、串棒霉属(Gonatobotrys)、毛霉属(Mucor)、黑孢菌属(Nigrospora)、青霉属(Penicillium)、根霉属(Rhizopus)及木霉属(Trichoderma)。种子表面附带真菌以镰孢菌分离频率最高,可高达90%以上;其次是曲霉菌、青霉菌及木霉菌。而在内部寄藏真菌中则以曲霉菌和青霉菌分离频率较高;其次是镰孢菌和毛壳菌,其它各属则仅在一个或几个玉米品种中分离得到。     

不同油菜品种种子带菌检测

以油菜主产区的10个主栽品种的种子为材料,将吸水纸检测法与分子指纹分析相结合,对种子携带的真菌进行分离和鉴定。结果表明,供试油菜种子携带有7属9种真菌,其优势菌群为镰刀菌属（Fusarium sp.）、链格孢属 （Alternaria sp.）以及青霉属（Penicillium sp.）,且不同油菜品种之间种子所携带的真菌种类有较大差异。     

轮作和连作田大豆胞囊线虫胞囊上真菌定殖动态

研究沈阳市汪家乡连作6年和轮作大豆田中胞囊数量以及大豆不同生长期胞囊上定殖真菌的种群及数量变化.结果表明:在整个大豆生长期中,不饱满胞囊量高于饱满胞囊量.连作田中胞囊总量、不饱满胞囊世高于轮作田.从胞囊上分离列的真菌以镰孢菌居多,在大豆不同生长时期镰孢菌属的分离频率不同,其中潦孢镰菌Fu-sarium.oxysporum为优势利,且连作田中数量多于轮作田;除镰孢菌属真菌外,轮作田中胞囊上分离到的青霉属和粘帚霉属真菌数量最多,还分离到毛霉属、毛壳菌属和拟青霉属;而连作用中胞囊上分离到的真菌中粘帚霉属数量最多,其他各属真菌的数量都很少,其中轮枝菌属和腐质霉属存轮作用胞囊上未分离到.镰孢菌的定殖数量与胞囊的饱满程度有关,而青霉、粘帚霉和拟青霉等其他真菌种群也影响到胞囊的饱满程度.     

海南省不同地区橡胶树内生真菌多样性研究

从海南省10个县市的15个不同地点采集橡胶树RRIM600品系的叶、枝、果、根等组织进行分离培养，共获得内生真菌507株，415株能够产生孢子，根据形态特征鉴定为18个属，23个种，其中丝孢纲真菌9个属，10个种；腔孢纲真菌6个属，9个种；子囊菌门真菌3个属，4个种。初步研究表明：在所研究不同地区的橡胶树中，穗黑孢霉(Nigrospora oryzae)、树状多节孢(Nodulisporium sylviform)、刺盘孢(Colletotrichum sp.)均有分布。不同地区橡胶树内生真菌定殖率为17     

渥堆过程中主要微生物对云南普洱茶品质形成的研究

对云南普洱茶渥堆过程中的微生物研究表明：主要微生物有黑曲霉（Aspergillus niger）、青霉属（Penicllium）、根霉属（Rhizopus）、灰绿曲霉（Aspergillus gloucus）、酵母属（Saccharomyces）、土生曲霉（Aspergillus terreus）、白曲霉（Aspergillus candidus）、细菌类（Bacterium）。其中黑曲霉最多,它能产生葡萄糖淀粉酶、果胶酶、纤维素酶等;酵母次之,除它本身含有极丰富的对人体有益的营养物质、丰富的酶系统和生理活性物质外,酵母菌还能代谢产生维生素B₁、B_2、、维生素C^[1]等物质。这些微生物对普洱茶品质形成都直接或间接地起作用。     

中国荔枝采后褐变和腐烂的控制

在保持室温下,荔枝品种“Sui Dong” 和“Wai Chee” 在经过苯来特溶液热浸后,再装入松紧聚氯乙烯(PVC)袋里,就可减轻果实的褐变和腐烂.从烂果中发现到真菌有两种:曲霉属(Aspergillus)和根霉属(Rhizopus).经研究,苯来特的浓度为0.05～0.20%,溶液温度为48℃～52℃,浸泡时间为2～16分种.在商品上,处理方法可用0.05%的苯来特溶液,在52℃下浸泡两分钟.     

六堡茶真菌多样性分析和优势真菌的分离筛选

为解析新工艺下六堡茶的安全性和优越性,本试验研究选取9种广西梧州六堡茶,通过高通量测序技术发现4个门、6个纲、6个目、8个科、8个属的真菌类群,其中曲霉属、芽生葡萄孢酵母属及节担菌属为优势菌属。从9个样品中共分离20株优势菌,鉴定为琉球曲霉和塔宾曲霉,其中琉球曲霉CHA 12的淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶以及酯酶活性相对较高,其发酵液和茶叶中未检出常见的毒素。安全、稳定的功能优势菌为新工艺下高品质六堡茶奠定了基础。     

甘蔗内生菌分离鉴定及功能多样性研究

为探究甘蔗内生菌多样性组成及相关特性,本研究采用稀释涂板法分离并结合形态观察和分子标记(gyrB,rpoB, ITS, 16S rDNA)进行鉴定。结果表明,从12个栽培品种(系)和5个野生种无性系的根、茎、叶组织中共分离到细菌589株、放线菌34株和真菌46株;细菌中固氮菌有41株,溶磷菌有98株,解钾菌有52株,对黄曲霉和禾谷镰刀菌具有拮抗作用分别有44株和35株。内生细菌分属21个属,其中芽孢杆菌属、伯克氏菌属、肠杆菌属和泛菌属为优势属;内生真菌分属于枝顶孢属、链格孢属、曲霉属、镰刀菌属、枝孢属等17个属,而放线菌仅为链霉菌属。具有潜在植物益生功能的菌株主要集中在芽孢杆菌属、伯克氏菌属、肠杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、类芽孢杆菌属及泛菌属。本研究显示甘蔗栽培品种(系)和野生种无性系均含有丰富的内生菌资源,且栽培品种(系)所含内生菌在数量和多样性上均高于野生种无性系;12个栽培品种(系)间所分离到的内生细菌大部分相同,但也存在差异。通过初步的功能鉴定,筛选出一些具有应用潜力的益生微生物,为开发相应功能的生物菌剂奠定基础。