产植酸酶菌株的筛选及酶学性质的研究

从100多个自然样品中,分离、筛选出一株高产植酸酶的曲霉(Aspergillus sp.)茵株.在30℃摇瓶发酵4 d时酶活达到6105.5 IU/mL,并对其粗酶液的性质作了研究:该酶作用的最适温度为45 ℃;最适pH为5;该酶在55℃、pH为3～7时,相对酶活大于80%;金属离子Zn2+"、Al3+、Mn2+,Cu2+等对该酶有较强的抑制作用,而Mg2+等则有一定的激活作用.     

枯草芽孢杆菌酸性内切葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质

将来源于藏猪粪便的枯草芽孢杆菌BY-4菌株接种于含4%麸皮的产酶培养基中,37℃、220r/min培养48h,发酵上清液经HiTrap Phenyl HP疏水作用层析、HiPrep 16/60Sephacryl S-100凝胶过滤层析分离纯化得到一个内切葡聚糖酶组分,纯化倍数为15.5,回收率为25.0%。经SDS-PAGE、酶谱分析鉴定,两步分离纯化后为电泳纯的纤维素酶,相对分子量约为55 000。酶学性质研究表明,该酶的最适反应pH为4.5,最适反应温度为60℃。Mg2+、Zn2+对该酶有一定的激活作用,而Mn2+、Co2+、Ag+对该酶产生了抑制作用。     

番鸭肝脏碱性磷酸酶的分离及部分性质研究

对番鸭肝脏组织的碱性磷酸酶进行分离,测定分离纯化不同阶段的碱性磷酸酶的活性。利用有机溶剂分离提纯番鸭肝脏中的碱性磷酸酶,并对其酶促动力学性质进行研究。结果表明:该酶的纯化倍数达3.1倍,比活力为476.8U/mg;催化磷酸苯二钠的水解反应时的最适温度为50℃,最适pH为9.7;米氏常数(Km)为5.28mmol/L。     

米曲霉ZW-06中性蛋白酶的粗分离及酶学性质研究

从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZW-06发酵干曲中对中性蛋白酶进行粗分离,并对其酶学性质进行研究。结果表明:用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达264443U/g;该酶的最适反应温度为45℃,最适作用pH为6.5和9.0;该酶在常温及pH6～10的环境下比较稳定;Mg2+、Mn2+和Ca2+对蛋白酶有强烈的激活作用,Fe2+和Cu2+则对其表现出强烈的抑制作用。动力学研究表明,该中性蛋白酶在pH 6.5和45℃条件下,Km为3.82mg/mL,Vmax为541U/mg·min。     

牛乳中荧光假单胞菌耐热性脂肪酶的活性影响因素

以新鲜牛乳中分离到的荧光假单胞菌为研究对象,对其分泌产生的耐热性脂肪酶进行纯化,并研究不同温度、pH值、Ca2+质量浓度对该脂肪酶活性的影响.结果表明:经过初步纯化的脂肪酶分子质量为55 kD,纯度为91.5％,并且发现该耐热性脂肪酶在50℃、30 min,63℃、30 min,72℃、20 s,90℃、10 min,121℃、0.1 MPa、20 min处理之后,相对酶活力分别为75.02％、86.21％、73.25％、17.62％、13.63％;并且该脂肪酶的最适温度为63℃,最适pH值为8.0;在荧光假单胞菌体外,Ca2+质量浓度对荧光假单胞菌脂肪酶的活力并无显著影响.     

米曲霉ZW-06中性蛋白酶白粗分离及酶学性质研究

从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZW-06发酵干曲中对中性蛋白酶进行粗分离,并对其酶学性质进行研究.结果表明用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达264443 U/g;该酶的最适反应温度为45℃,最适作用pH为6.5和9.0;该酶在常温及pH 6～10的环境下比较稳定;Mg2+、Mn2+和Ca2+对蛋白酶有强烈的激活作用,Fe2+和Cu2+则对其表现出强烈的抑制作用.动力学研究表明,该中性蛋白酶在pH 6.5和45℃条件下,Km为3.82 mg/mL,Vmax为541 U/mg·min.     

莆田黑猪精液中NAGase酶学特性研究

试验对以莆田黑猪精液为材料分离纯化得到的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)进行了理化特性研究。经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G100分子筛层析获得PAGE电泳纯化的NAGase酶制剂。以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-GlcNAc)为底物,研究酶催化水解的相关性质。分离纯化获得的酶制剂比活力为1561.42 U/mg,分子质量为58 ku,只有1个亚基,等电点pI为9.13。酶的最适pH为5.6,最适温度为45 ℃,酶在pH 3.6～7.8之间稳定,当pH>8时迅速失活,在50 ℃以下处理30 min酶活力保存稳定,高于50 ℃时,酶活力迅速降低。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,米氏常数K_m为0.82 mmol/L,最大反应速度V_m为39.23 μmol/(L·min)。催化pNP-GlcNAc反应的活化能为27.30 kJ/mol。金属离子中Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺对酶活力无明显影响,Zn²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺对酶有抑制作用。     

纳豆芽孢杆菌NY-1产蛋白酶酶学性质研究

试验为研究纳豆芽孢杆菌NY-1产蛋白酶的酶学性质,在液体培养基中培养该菌株并获得粗酶液,之后分别在不同处理条件下对粗酶液中蛋白酶活性进行测定。结果表明,该酶最适反应温度为65 ℃,最适反应pH为9.0,45 ℃时有较好的热稳定性,pH 8.0~9.0有较好的pH稳定性。金属离子Mn²⁺和Zn²⁺对该蛋白酶活性有激活作用,Fe²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺对酶活性有抑制作用。     

微生物酶和小牛皱胃酶凝乳特性的研究

以黑白花奶牛的新鲜奶为原料,研究了微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度、热稳定性、酸度影响、pH稳定性、金属离子及有机溶剂的影响.结果表明微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度分别为65℃和60℃;两种酶在温度分别低于50℃和45℃时,热稳定性较好;二者的活力随酸度增加而上升,并且在pH值为4时其稳定性最好;Ca2+、Fe2+是两种酶的激活剂,Cu2+是二者的抑制剂,Na+、Mg2+对二者无显著影响;丙酮有一定的促凝乳作用.     

嗜酸乳杆菌突变株产共轭亚油酸异构酶的纯化研究

以嗜酸乳杆菌NCFM和Lakcid作为出发菌株,通过紫外诱变及化学诱变筛选得到突变株.代谢亚油酸生成共轭亚油酸(CLA),研究转化过程中的关键性酶-亚油酸异构酶的酶学性质,采用硫酸铵沉淀、透析等对该酶进行纯化,用SDS-PAGE测得该酶的亚基分子量为60.5 ku;并得出该酶的最适温度是44℃,最适pH是6.0左右,金属离子Fe2+、K+对异构酶的反应有促进作用,Zn2+等对反应都起抑制作用.     

反刍动物饲用高产蛋白酵母菌株的分离和筛选

青贮饲料和酒糟饲料富含酵母菌,从中分离优化筛选出高产蛋白菌株可作为反刍动物饲用酵母菌。作者通过正交试验,对分离菌株进行培养条件的优化,从中筛选出1株高产蛋白菌株为酿酒酵母菌（saccharomyces cerevisiae）,在温度30℃、初始pH为5、葡萄糖浓度2%、大豆蛋白胨浓度1%、麦芽汁粉0.3%、酵母膏0.3%、接菌量3%,转速180 r/min时,生物产量达到最高,细胞蛋白达到60.54 mg N/dl,菌体细胞达到1.7×10⁹个/ml。     

Cloning,expression and characterization of a feruloyl esterase C from Penicillium chrysogenum

Objective:To clone feruloyl esterase gene C from Penicillium chrysogenum and characterize the general properties of the enzyme.Methods:The feruloyl esterase C gene was amplified by PCR based on the Penicillium chrysogenum feruloyl esterase C gene sequence and cloned into the expression vector p PIC9K,resulting the recombinant plasmid p PIC9K-Pcfae C.The recombiant plasmid was linerized and transformed into P.pastoris by electroporation.The transformants was screened based on the transparent zone technology.The screened transformants was then induced by methanol.the enzymatic properties of the protein were then measured.Results:SDS-PAGE analysis showed that the molecular mass of the enzyme was about 30 k D.The length of the gene was 762 bp.It comprised one open reading framwork(ORF)and annotated to encode 249 amino acid.The optimal temperature and p H was found to be 40℃and 6,respectively.Moreover,the recombinant enzyme was stable at 40-50℃and p H 5-7.Conclusion:The enzyme successfully expressed in P.pastoris could laid theoretical foundation in food,fodder and paper making industry.     

猪β2m在pMAL-p2X系统中的表达与纯化

试验分别从pH、温度、菌体密度、IPTG浓度、诱导时间等条件对β2m在pMAL-p2X的表达进行优化,表达蛋白经过Amylose树脂柱进行纯化。结果发现,β2m在pMAL-p2X的最佳表达条件为:pH=7.5、T(温度)=37 ℃、D_{600 nm}=0.3、IPTG=0.5 mmol/L和t(诱导时间)=5 h;在最佳表达条件下β2m的相对表达含量可达到45%;纯化后的融合蛋白纯度达到90%以上。     

酒精阳性乳患牛血清及乳清离子和微量元素分析

通过检测不同酒精阳性乳血清和乳清中Ca²⁺、Mg²⁺、Na⁺、K⁺浓度及Cu、Zn、Fe、Mn含量,探讨其与酒精阳性乳的关系,结果显示,酒精阳性乳患牛体内的微量元素Zn、Cu和Fe代谢紊乱,会导致抗氧化酶的活性降低、毒性产物含量升高而使自由基代谢平衡紊乱,且Zn、Cu含量的缺乏会降低机体的免疫力;患牛乳中过多的Ca²⁺、Mg²⁺中和酪蛋白微胶粒表面的电荷,导致酪蛋白稳定性下降,致使乳胶体聚集能力增强;这些都易导致酒精阳性乳的形成。     

日粮添加棉酚对哈萨克羊水代谢影响的研究

试验选用5只2岁、体重约40 kg的健康雄性哈萨克羊,单笼饲养。试验共4期(每期18 d,共72 d),第1期不添加棉酚,第2、3、4期在混合精料中分别添加984、1353、1722 mg/d棉酚。结果表明,随着棉酚添加量的增加,试验羊的饮水量、排尿量、麦秸采食量、排粪量及粪中含水量无明显变化(P>0.05);抗利尿激素、肾素、皮质酮水平无显著变化(P>0.05),促肾上腺皮质激素、醛固酮水平在前3期呈下降的趋势,第4期与第3期相比显著上升(P<0.05);血清中Na⁺水平在2、3期明显下降(P<0.05),第4期恢复到第1期水平,血清中Cl^-水平呈下降趋势,Ca²⁺水平也呈下降趋势,在4期试验中K⁺、无机磷、Mg²⁺含量无明显变化(P>0.05);尿中Na⁺、无机磷含量无变化(P>0.05),Cl^-含量前3期上升,第4期恢复到第1期水平,K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺含量第4期较前3期均显著下降(P<0.05)。     

兔腰大肌和鸡胸大肌三聚磷酸酶特性的比较研究

分离纯化兔腰大肌和鸡胸大肌中的三聚磷酸盐酶(TPPase),比较不同物种TTPase的酶学特性和作用条件。试验结果,显示兔腰大肌和鸡胸大肌的TPPase的最适温度分别为35℃和30℃;最适pH分别是6和5。Mg2+对兔腰大肌和鸡胸大肌的TPPase都有激活作用,在0~20 mmol/L范围内,鸡胸大肌TPPase活性随Mg2+浓度增加而缓慢上升,3 mmol/L的Mg2+对兔腰大肌TPPase激活作用最明显。Ca2+对兔腰大肌TPPase有激活作用,而对鸡胸大肌TPPase有抑制作用。高浓度的EDTA-Na4和KIO3对两种肉TPPase都有明显的抑制效果。EDTA-Na2对兔腰大肌TPPase的活性没有显著影响,但在高于0.5 mmol/L时,对鸡胸大肌TPPase的活性抑制效果明显。     

家蚕磷酸吡哆醇氧化酶在E.coli中的表达及酶学特征研究

磷酸吡哆醇氧化酶(pyridoxine-5′-phosphate oxidase,PNPO)是维生素B6(VB6)代谢的关键酶。采用重组质粒pET32a(+)-PNPO原核表达家蚕(Bombyx mori)PNPO,经Ni2+亲和层析纯化后对其基本酶学性质进行分析。结果表明,纯化后的家蚕重组PNPO经SDS-PAGE鉴定为单一条带,比活力为529.81nmol/(min·mg)蛋白,纯化倍数为7.1倍;该酶的最适反应温度为40℃,在50℃以下稳定;在pH8.0～9.0之间酶活力最高,pH6.0～10.0之间活力保持稳定。该结果有助于进一步开展家蚕PNPO的催化作用和表达调控机制的研究。     

三叶草叶蛋白提取工艺优化研究

作者选用三叶草为试验材料,通过正交试验L9(3⁴)分别对料水比、加盐比、不同pH和絮凝温度4个因素进行优化。以叶蛋白提取率、蛋白质量分数为指标,以期获得三叶草叶蛋白提取的最佳优化工艺参数。正交试验表明,提取三叶草叶蛋白的最佳提取工艺为A₃B₃C₁D₂,即料水比为1∶3、加盐量为5%、pH为3.0、絮凝温度为70 ℃为最佳的提取工艺组合。本研究初步用正交试验的方法对三叶草叶蛋白的最佳提取工艺进行了优化研究,为三叶草叶蛋白的开发应用提供了理论依据。     

单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性研究及单克隆抗体的制备

原核表达单增李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,检测ActA的免疫原性,以表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,并对单抗的亚型、效价、亲合力及特异性进行测定。结果表明,成功表达了ActA蛋白;表达蛋白诱导了特异性的细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性;共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类;腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64000,2B9为1∶32000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107M-1、5.67×107M-1和7.15×106M-1;3G6、2B4和4E10为Lm特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗可用于Lm检测方法的建立。