鹿茸水溶性蛋白质提取条件的优化及组分

以梅花鹿(Cervus nippon Temminck)鹿茸为原料,采用缓冲溶液提取水溶性蛋白质,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken设计试验优化鹿茸水溶性蛋白质的提取条件,采用Sephadex G-100凝胶层析和SDSPAGE电泳对提取物组分进行分析。结果表明:鹿茸水溶性蛋白质的最佳提取工艺条件为p H=9.18,料液比1.0 g∶60.4 m L,提取时间5.9 h,在此条件下蛋白提取量为90.84 mg·g-1。采用Sephadex G-100凝胶层析对鹿茸水溶性蛋白质进行分离得到3个吸收峰,经SDS-PAGE电泳测定,其相对分子质量分别为66 000、29 000、14 000。鹿茸水溶性蛋白质主要为小分子蛋白质。     

苦瓜子衣色素蛋白提取及抗氧化能力研究

[目的]研究苦瓜子衣色素蛋白的最佳提取工艺及其抗氧化能力,为天然色素的开发应用提供参考。[方法]采用乙酸乙酯法提取苦瓜子衣色素,双水相法提取苦瓜子衣色素蛋白,经DEAE-52阴离子层析、Sephadex G-100凝胶柱层析得到纯化蛋白,参考芬顿法测定其抗氧化能力。[结果]确定苦瓜子衣色素提取的最佳条件为温度50℃,料液比1∶40(g∶m L),时间30 min,该条件下提取率最高,为45.54%。双水相法中硫酸铵质量分数为35%,聚乙二醇质量分数为30%,提取得到苦瓜子衣色素粗蛋白,经过层析得到分子量为74.10 k D的纯化蛋白。抗氧化试验表明,纯化苦瓜子衣色素蛋白具有抗氧化能力,且随着质量浓度的增加抗氧化性增强。[结论]该试验采用新兴的双水相法提取苦瓜子衣色素蛋白,简化了提取工艺,减少了蛋白质的流失;抗氧化试验为从天然色素中制备高品质无污染的抗氧化制剂奠定了理论基础。     

香菇多糖的纯化和结构分析

香菇中提取到的水溶性粗多糖,用Ｓｅｖａｇ法结合酶法去蛋白,透析,甲醇分级得到２个多糖级分,分别命名为Ｌｅｎ１和Ｌｅｎ２。去蛋白后多糖经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析纯化得精品多糖Ｌｅｎ３,经纸层析及凝胶过滤层析表现单一区带或单一峰。经酸水解后纸层析和气相色谱分析表明Ｌｅｎ２含甘露糖、葡萄糖,摩尔比为甘露糖：葡萄糖＝１０．５０：１．００,Ｌｅｎ３含木糖、甘露糖、葡萄糖,摩尔比为木糖：甘露糖：葡萄糖＝０．６７：２．４５：１．００。２００￣４００ｎｍ紫外扫描,无核酸和蛋白吸收峰。４０００￣６５０ｃｍ＾－１红外光谱扫描,呈多糖类特征吸收峰。     

香菇多糖的纯化和结构分析

香菇中提取到的水溶性粗多糖,用Ｓｅｖａｇ法结合酶法去蛋白,透析,甲醇分级得到２个多糖级分,分别命名为Ｌｅｎ１和Ｌｅｎ２。去蛋白后多糖经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤层析纯化得精品多糖Ｌｅｎ３,经纸层析及凝胶过滤层析表现单一区带或单一峰。经酸水解后纸层析和气相色谱分析表明Ｌｅｎ２含甘露糖、葡萄糖,摩尔比为甘露糖：葡萄糖＝１０．５０：１．００,Ｌｅｎ３含木糖、甘露糖、葡萄糖,摩尔比为木糖：甘露糖：葡萄糖＝０．６７：２．４５：１．００。２００￣４００ｎｍ紫外扫描,无核酸和蛋白吸收峰。４０００￣６５０ｃｍ＾－１红外光谱扫描,呈多糖类特征吸收峰。     

珊瑚藻藻红蛋白分离纯化技术及光谱学特性

藻红蛋白(PE)具有特征性吸收光谱和荧光光谱,是一种新颖的荧光分子探针.经反复探索研究建立了盐析、离子交换层析、羟基磷灰石吸附层析和凝胶过滤层析的分离纯化方案,从珊瑚藻中分离纯化出R-藻红蛋白(R-PE),其纯度[D(565nm)/D(280nm)]高达11.     

枯草芽孢杆菌S6抗棉花枯萎病菌拮抗蛋白的分离纯化与抑菌活性研究

为了探寻枯草芽孢杆菌S6菌中对棉花枯萎病菌有拮抗作用的蛋白,将S6菌进行液体发酵培养,初步提取得到了粗蛋白提取液。粗提液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-50脱盐、Sephadex G-100凝胶层析、DEAE-52纤维素离子交换层析,得到了对棉花枯萎病菌有高效拮抗作用的蛋白质,纯化倍数达17。形成分离纯化S6菌株的棉花枯萎病菌拮抗蛋白的可靠技术路线,为研究和生产防治棉花枯萎病菌的生物制剂提供了理论基础。     

蔗糖酶的提取工艺及性质研究

采用SDS抽提法从酵母中提取蔗糖酶,通过正交试验对SDS摩尔浓度、pH值、提取温度、提取时间进行优化,确定最佳提取工艺条件是SDS摩尔浓度为0.5mmol/L,温度40℃,提取时间10h,pH值5.5。制得的粗酶经醇沉后,采用Q-琼脂糖凝胶FF阴离子交换层析方法得到纯化的酵母蔗糖酶,纯化倍数为18.7倍,对蔗糖酶的性质也进行了研究。     

新疆白芸豆中凝集素的提取及纯化工艺

为了研究新疆白芸豆中凝集素的提取及纯化工艺,以凝集素特异性活力为评价指标,通过单因素及响应面分析法对新疆白芸豆中的凝集素进行研究。结果表明,新疆白芸豆中凝集素提取的最佳工艺参数为料液比1 g∶10 m L、p H值7.5、提取时间20 h、提取液为磷酸盐缓冲溶液(PB),在该条件下模型预测凝集素特异性活力为1 209.04 HU/mg,实际试验值为1 193.62 HU/mg。利用二乙氨乙基(DEAE)A-50阴离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析进行纯化,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,确定目标凝集素的分子量为30~40 ku。     

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺.采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离3种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度.结果显示,层析纯化后SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2 235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76％;卵转铁蛋白抑菌率为48.84％.该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产.     

雪莲中水溶性多糖提取及纯化的工艺优化

目的对比不同温度、液料比以及提取时间等条件对于雪莲组织中水溶性多糖提取率的影响，研究从雪莲组织中提取水溶性多糖的最佳工艺，并对提取的粗多糖进行脱蛋白纯化．方法以产自新疆昭苏天山雪莲为材料，以多糖的得率为评价指标，采用正交试验方法，探讨不同条件下对雪莲组织中水溶性多糖提取起到明显作用的因素，采用Sevage法结合酶法对提取的粗多糖进行纯化．结果在浸提时间为2．5h、温度80℃、液料比例为14mL：1g的条件下，提取粗多糖得率最高为6．91％，该粗多糖中总糖的质量分数为18．47％，该条件为提取的最佳工艺条件．对粗多糖进行纯化，除去其中蛋白质，回收率为71．4％．结论本次实验确定了雪莲组织中水溶性多糖提取的最佳工艺条件，经过进一步的脱蛋白纯化处理，为实验室下一步的组分分离以及探讨雪莲多糖的药理作用奠定了基础．     

红参加工中皂苷的脱羧降解反应及其产物的研究

从鲜人参中提取分离出天然皂苷,模拟红参加工工艺过程,探讨红参加工中天然皂苷成分转化过程,以揭示出皂苷成分转化机理。方法：将红参粉以甲醇提取,乙醚脱脂,正丁醇萃取;水层通过大孔树脂（Ｄ１０１型）吸附,水洗除去水溶性发质和糖分。再经过硅胶柱层析和阳离子交换树脂柱层析,获得丙二酸单酰基人参皂苷。模拟红参加工工艺过程得转化物,对该转化物进行分离鉴定,诸如化学试验、ＩＲ、ＦＤ－ＭＳ等仪器分析。结果表明：从鲜人参中分离出丙二酸单酰基人参皂苷－Ｒｂ２和－Ｒｂ２等皂苷,通过模拟红参加工试验发现在７５℃烘干过程,丙二酸单酰基人参皂苷－Ｒｂ２转化为乙酰基人参皂苷－Ｒｂ２,即人参皂苷Ｒｓ１。结论：人参皂苷Ｒｓ１是红参加工烘干阶段产生的,对其分解产物的分析有二氧化碳放出,说明该反应是丙二酸单酰基人参皂苷上的丙二元到遇热发生脱羧降解反应     

人参蛋白质不同提取方法及含量的比较

[目的]优选人参蛋白质提取的最佳方法,并比较不同生长年份对人参蛋白质含量的影响。[方法]比较丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizol提取法5种人参蛋白质的提取方法,及不同生长年份的人参蛋白质,采用Bradford方法测定蛋白质含量,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白。[结果]丙酮提取法得到的蛋白质纯度最高,电泳条带最清晰完整,且人参蛋白质的含量随生长年份增加而升高。[结论]丙酮沉淀法是一种较好的适用于人参蛋白质提取的方法,5年生人参蛋白质含量最高。     

林下参种子油化学成分的GC-MS分析

目的分离鉴定林下参种子油中的化学成分。方法采用硅胶柱层析法分离出林下参种子油,应用GC-MS技术进行成分分析。结果林下参种子油经分离鉴定出26种化合物。结论林下参种子油中主要成分为不饱和脂肪酸类化合物。     

利用HPLC／MS对野山参和林下参皂苷的分析

为了明确野山参和林下参中人参皂苷的组成特征及差异所在,利用高效液相色谱-质谱联用仪对野山参和林下参中电苷进行分析测定。结果表明：野山参和林下参中均含有常见的9种人参皂苷（Re、Rg1、Ro、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rd）,野山参中还检测到三七皂苷R1、R2和R3以及丙二酰基人参皂苷Rb1和Rc,林下参仅检测到了丙二酰基人参皂苷Rh1、Rc和Rd,没有检测到三七皂苷R1和R3;林下参中Re含量显著高于野山参,平均含量为5．042g／mg,二者达到极显著差异（P〈0．01）,野山参和林下参中其它8种人参皂苷含量差别不大。     

田七素在加工红参中的变化及其转化机理

试验研究了田七素在红参加工炮制中的变化及其转化机理。以甲醇为溶剂,采用渗淋法进行提取;正丁醇萃取,Sephadex-LH-20凝胶柱分离,经UV、IR、^1H-NMR、^13C-NMR和MS／FD鉴定,应用氨基酸自动分析仪对其含量进行测定。结果表明：田七素在鲜人参和生晒参中的含量为0.51％、0.50％,加工成红参后含量降低为0.26％,其机理在于田七素受热发生脱羧降解反应,生成1-醛基-二氨基丙酸,并生成CO2和H2O,从而降低人参的毒性。这一结果揭示了人参加工炮制减毒作用的另外一个机理。     

人参及制品中二硫代氨基甲酸盐类杀菌剂残留量的测定研究

采用顶空气相色谱分析技术测定了二硫代氨基甲酸盐类杀菌剂在人参及制品中的农药残留量。测定结果表明：该方法最低检出限为0．1mg／kg,回收率均大于80．9％,二硫代氨基甲酸盐类在人参中残留量均小于0．42mg／kg。该方法具有简便、快速、准确、干扰小等特点。     

人参皂苷Ro的制备及含量测定

建立快速制备人参皂苷Ro的方法,并对人参的不同种类、不同部位、不同组织及鲜人参储藏过程中人参皂苷Ro的含量变化进行测定。采用D101大孔吸附树脂柱、中压柱层析等方法分离制备人参皂苷Ro,HPLC法测定人参皂苷Ro的含量,LC/MS分析结果。中压柱层析法制备人参皂苷Ro效果好,简单快速。人参皂苷Ro的含量差异为:生晒参鲜人参蜜制参红参;芦头支须主根毛须;表皮韧皮部木质部;随储藏期的延长人参皂苷Ro含量减少。     

西洋参特有成分--拟人参皂苷F11的分离、鉴定与含量测定

为了筛选西洋参的特有成分，以利对西洋参生药及其制品的定性鉴别和含量测定，为研制开发新药提供理论依据，本试验采用大孔树脂法和硅胶柱层析分离法对西洋参甲醇提取物进行分离纯化，将所得单体应用质谱、^13C-核磁共振谱、电子轰击质谱（EL-MS）鉴定，并用高效薄层层析法比较了人参、西洋参和三七的甲醇提取物，用薄层扫描法对西洋参各部位拟人参皂苷F11的含量进行了测定。结果表明：西洋参特有皂苷成分为拟人参皂苷F11,在西洋参的花蕾、花柄、果肉、茎叶和根中的含量依次为2．34％，1．93％，1．54％，0．97％和0．28％。     

人参皂苷Rh2葡萄糖基转移酶活性测定体系的建立

[目的]建立人参细胞中尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）：人参皂苷Rh2葡萄糖基转移酶（UGRh2GT）活性测定体系。[方法]以人参皂苷Rh2为底物,以UDPG为葡萄糖供体,选取合适的温度和pH值,用提取的人参细胞酶液催化Rh2生成Rg3,采用高效液相色谱法（HPLC）测定Rg3的生成量,色谱柱为C18柱（150mm×4.6mm）,流动相为乙腈和水,梯度洗脱。[结果]人参细胞中UGRh2GT活性测定体系的最优pH值是9.3,最优温度是34.1℃。[结论]建立的酶活测定体系能够较好较方便地测定UGRh2GT的比活。     

乙撑硫脲在人参和土壤中残留分析与消解动态

通过田间试验和液相色谱分析技术研究了75%代森锰锌WP的杂质及代谢物乙撑硫脲在人参和土壤中残留分析与消解动态。试验结果表明:当75%代森锰锌WP的施药剂量为推荐剂量的2倍(6 250 g/hm2)时,其杂质及代谢物乙撑硫脲在人参和土壤中原始沉积量分别为0.025和0.032 mg/kg,半衰期分别为18.1和14.2 d。当使用75%代森锰锌WP施药1次,测得人参中乙撑硫脲残留量均低于欧洲规定的农药最高残留限量值(0.05mg/kg),按照推荐剂量3 125 g/hm2处理,建议我国乙撑硫脲在人参上的最大残留限量值可暂定为0.02～0.04 mg/kg,施药次数为1次。