改进的DNA指纹技术在玉米杂交种纯度鉴定上的应用研究

本试验以幼苗为对照,利用CTAB法建立了一套简单、快速的玉米干种子DNA提取程序,该程序提取的DNA分子量大小与幼苗法相当,能够利用SSR引物进行扩增,可应用于玉米杂交种纯度检测。     

利用SSR标记鉴定玉米杂交种南校18号种子纯度

以南校18号玉米杂交种及其亲本自交系为材料,对胚芽和干种子的DNA进行提取,对24对SSR引物进行筛选,获得适合该杂交种纯度鉴定的SSR引物。结果表明,在快速检测中,从干种子胚提取DNA更加便捷、快速,无DNA降解,可用于PCR扩增反应;24对SSR引物中,有3对特异性引物6mmc0241、umc2025、phi323152可用于南校18号杂交种和亲本自交系的纯度鉴定。因此,应用SSR标记结合单籽粒DNA快速提取方法,可以快捷、准确地鉴定玉米杂交种种子纯度。     

一种简便实用的玉米干种子基因组DNA提取方法

利用改良的CTAB法提取玉米干种子基因组DNA,DNA样品经紫外光谱吸收、琼脂糖凝胶电泳、PCR和酶切检测,表明获得的DNA样品纯度较好、无明显降解,DNA质量可满足下游分子生物学实验要求,证实该方法是提取玉米基因组DNA的一种有效方法.     

玉米基因组DNA不同提取方法及提取部位的比较研究

分别探讨CTAB法和SDS法对玉米不同部位基因组DNA的提取效果。综合比较了2种方法提取的DNA浓度、纯度及完整性,结果表明SDS法是比较适合玉米基因组DNA提取的方法;同时比较了以玉米叶片、幼根和成熟胚为材料提取的DNA质量,发现以新鲜叶片为材料提取的DNA浓度和纯度较高,更适合用于玉米基因组DNA的提取。     

燕麦种子基因组DNA不同提取方法的比较

为缩短DNA提取时间,省去种子萌发到幼苗培养等一系列过程,以燕麦种子为材料,用5种方法提取其基因组DNA,通过紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度,琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,以ITS2为引物将燕麦种子基因组DNA进行PCR扩增。结果表明:5种方法中除了传统CTAB法,其余方法都可以提取到燕麦种子基因组DNA,但不同方法提取到的基因组DNA的纯度、浓度存在差异,试剂盒法提取的DNA质量最好、纯度最高,但提取的DNA量少且成本高,改良CTAB法和高盐低pH法提取的DNA的纯度相近,都有少量的蛋白质和糖类的污染,改良SDS法提取的DNA纯度最低。     

利用SSR标记鉴定郑单958杂交一代种子纯度的研究

以郑单958玉米杂交种及其亲本和12对玉米SSR位点引物为材料,筛选出适合该杂交种纯度鉴定的SSR引物,并对利用嫩芽和干种子为材料提取DNA的效果进行了比较,建立了一套利用SSR标记技术快速、简便进行玉米杂交种纯度鉴定的技术规程。     

快速提取玉米DNA方法的研究

[目的]为了探索一种快速、简便,能够用于SSR分析的玉米DNA提取法。[方法]采用改进的常规DNA提取法和DNA快速提取法提取玉米种子胚和黄化苗叶片中的DNA,进行SSR分析,通过琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR产物进行检测。[结果]用常规法提取时,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提1次就可获得质量好和浓度高的DNA;无须抽提,直接吸取上清液,可得到高浓度的DNA,也能满足SSR分析的需要;同样的提取法,SDS的提取效果比CTAB好。对快速提取法进行分析表明,相同的提取液和提取方法,采用种子胚提取的DNA浓度和质量明显高于叶片DNA。[结论]该研究为SSR在玉米种质及纯度鉴定上的应用提供了技术上的保证,有利于该项技术的普及和推广。     

整粒和半粒青稞种子DNA的提取及RAPD检测

【目的】从青稞种子中提取高质量的基因组DNA。【方法】以半粒无胚青稞种子和整粒青稞种子为材料,用6种不同的方法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,紫外分光光度计法检测DNA的浓度和纯度,并对提取的DNA进行了RAPD-PCR扩增检测,同时将剩下的半粒有胚青稞种子进行萌发实验。【结果】从半粒和整粒青稞种子中都可以提取到高质量的DNA,用提取的DNA作为RAPD-PCR扩增检测模板,得到的扩增产物条带清晰,多态性条带丰富,其质量满足RAPD分子标记的要求。【结论】高盐低p H法提取的DNA质量最好,是这6种方法中的最佳方法;半粒青稞有胚种子也能够正常生根发芽,可作为遗传实验的材料。     

玉米干种子基因组DNA提取方法的改进

为了实现玉米干种子基因组DNA快速提取,针对玉米干种子淀粉含量高的特点,对传统核酸CTAB提取方法进行了优化与改良,将提取的DNA进行分光光度计及琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示,DNA的OD_(260)/OD280值为1.79~1.95,OD_(260)/OD230值为1.90~2.15;琼脂糖凝胶电泳图谱清晰,条带无拖尾现象,说明采用改良方法提取的DNA质量高、无降解。以改良方法提取的DNA样品作为模板进行分子标记检测试验,结果清晰稳定,进一步证明采用改良CTAB法直接从玉米干种子中提取的DNA可以满足SSR和SNP等分子试验的要求。     

甜瓜半粒干种子DNA提取方法的优化

[目的]优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法,为甜瓜相关分子研究提供技术支持.[方法]以甜瓜半粒干种子为材料,比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果,并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化,以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度.最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果.[结果]4种提取方法中,改良CTAB法提取的DNA提取率最高,且DNA质量和纯度均高于其他提取方法.优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为:提取液CTAB浓度2%,裂解时间20 min,苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提1次,再用氯仿/异戊醇(24:1)抽提1次].在此条件下,提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好,以此为模板进行SSR分子标记分析时,电泳条带稳定、清晰,基本无杂带,可清楚区分品种间的差异.[结论]优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好,可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求.     

SSR标记技术在玉米品种纯度鉴定上的利用研究

采用玉米单粒种子DNA的提取新方法,对提取的DNA经4.5%PA胶进行电泳检测。结果表明:此法具有快速、DNA分子量大、不降解和纯度高等优点,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹鉴定技术在玉米种子纯度及玉米分子标记辅助育种中的广泛应用提供了基础。     

豫玉22玉米杂交种子纯度的SSR和SNP分子比较鉴定

为研究豫玉22玉米杂交种子的SSR和SNP两种分子标记纯度鉴定方法,为快速有效鉴定玉米种子纯度提供依据。采用SSR荧光标记法和SNP分子标记的KASP技术对豫玉22玉米杂交种子进行基因组DNA提取、引物筛选、基因型分析、纯度鉴定。豫玉22的SSR特异性引物为umc2007y4和bnlg161k8,纯度鉴定结果为97.92%。SNP特异性引物MaSNP64和MaSNP245纯度鉴定结果是98.44%。SSR和SNP分子标记鉴定豫玉22玉米杂交种子纯度的最佳方法,为拓展玉米杂交种纯度鉴定方法具有指导意义。     

用于SSR分析的大豆干种子DNA提取条件的优化

[目的]探讨适于SSR分析的大豆干种子DNA提取的最佳方法。[方法]以2个大豆品种的干种子为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取大豆基因组DNA,用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定其DNA在A230、A260和A280下的吸光值,根据A260／A230和A260／A280的比值检测DNA的纯度和浓度,并分别以两种DNA为模版进行SSR—PCR扩增。[结果]相同DNA提取条件下,SDS法提取DNA样品的纯度和浓度均高于CTAB法,SDS终浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时所提取大豆种子DNA的纯度及浓度最高,其DNA的0D260／0D280值为1．86,SDS法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足SSR扩增模板的需求。[结论]SDS浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时提取大豆干种子DNA的浓度和纯度都较高,可以满足后续的各种分子生物学操作的要求。     

SA和PEG引发处理对NaCl胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响

以冀植五号玉米种子为试验材料,用不同浓度的水杨酸(SA)溶液及聚乙二醇(PEG)溶液对种子进行引发处理。采用标准发芽试验和砂培试验,设3个NaCl浓度(0、100、200 mmol.L-1)模拟盐胁迫,研究SA和PEG引发处理对NaCl胁迫下玉米种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:随着NaCl浓度的增加,玉米的发芽率及发芽势下降,幼苗生长受到抑制,干物质积累量减少。同等NaCl浓度胁迫下,用0.25 mmol.L-1SA和15%PEG引发处理玉米种子,和对照相比,提高了种子的发芽势及发芽率,苗高、根长、地上部和根部干重显著增加,最终提高了玉米芽苗期的耐盐性。     

玉米制种田父本去杂分子标记辅助技术研究

[目的]以玉米制种田父本为研究对象,建立真实性鉴定试剂盒.[方法]采用优化的SSR分子标记技术,对制种田父本进行实证分析.[结果]利用SSR标记技术筛选出玉米的特异性引物,结合单籽粒DNA快速提取方法,建立了种子鉴定试剂盒.[结论]应用此试剂盒可快速、有效地鉴定父本的种子纯度和真实性,为田间间苗、定苗提供依据;为制种田父本去除杂株提供技术支撑.     

玉米基因组DNA快速提取方法

探讨了用NaOH裂解法从玉米单子粒胚乳中和用十二烷基肌氨酸钠法从玉米叶片中快速提取基因组DNA的方法,分析了2种方法提取的基因组DNA的效果及应用价值.结果表明,虽然得到的DNA质量基本一致,都可用于玉米品种纯度检验和分子标记辅助选择,但优化的、从叶片中快速提取的基因组DNA可长期保存,并用于多种后续序列分析工作.