猪胚胎细胞核移植

选用杜洛克２￣１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ、１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％，５５．３％和３４．５％。     

猪2—细胞胚胎电融合

以湖北白猪为试验动物,研究了不同处理对猪２－细胞胚胎电融合的影响,结果表明;融合液的离子强度,电场强度,脉冲时程和交流电处理等均影响电融合的效率,以非电解质的甘露醇溶液为融合液,融合前交流脉冲处理,直流电场强度为１５００－２０００Ｖ／ｃｍ和脉冲时程为４０－６０μｓ时可获得较高的融合效率。     

猪胚胎细胞核移植

选用杜洛克２～１６细胞期胚胎卵裂球作核供体，湖北白猪卵母细胞作核受体，通过显微操作和电融合法构成重组胚。体外培养时，以融合前２ｈ，１ｈ激活及融合前不激活的卵母细胞做核受体的重组胚，发育率分别为６４．６％（３１／４８），５５．３％（２６／４７）和３４．５％（１９／５５）。６１枚重组胚移入同步发情的５头受体母猪输卵管，１头于妊娠１１７ｄ产下５头核移植仔猪。结果表明，激活卵母细胞作核受体优于未激活卵母细胞。成熟卵母细胞的胞质对于移入的核具有重排能力     

猪卵母细胞、胚胎玻璃化冷冻初步研究

本试验研究了不同冷冻承载工具,玻璃化溶液处理时间和不同发育阶段对猪卵母细胞超低温冷冻保存的影响。(1)比较凝胶上样管(gel-loadingtip;GLT)、开放式拉长麦管(openpulledstraw;OPS)、玻璃微细管(glassmicropipette;GMP)保存法对卵母细胞冷冻效果的影响。(2)比较在EFS40中处理30s,1min,2min对卵母细胞冷冻效果的影响。(3)比较MII期和GV期的卵母细胞冷冻效果。结果表明,(1)GLT法体外存活率为52.8%略优于OPS法(50.5%)和GMP法(51.1%)。(2)解冻后30s组和1min组的体外存活率分别为48.82%、43.9%,显著优于2min组的18.8%(p<0.05)。(3)解冻后MII期体外存活率为53.6%,显著优于GV期的22.0%(p<0.05)。(4)冷冻对猪卵母细胞的发育潜能影响较大,用新鲜精液进行体外受精,仅有4.9%的受精卵分裂,极显著低于对照组的49.5%(P<0.01);并且发育至4细胞期的比例为1.7%,未能发育至8细胞期。胚胎在25%VS1冷冻液中平衡20分钟后将胚胎在65%VS1冷冻液中平衡20秒,然后将胚胎再放入到100%VS1冷冻液中在30秒的时间内装入GLT管投入到液氮中进行保存。扩张囊胚的冷冻效果要明显优于孵化囊胚。     

猪胚胎体外培养体系优化对胚胎干细胞建系的影响

为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养; N2B27组,孤雌激活的胚胎全程N2B27培养体系中培养; PZM-3-N2B27组,孤雌胚胎在PZM-3培养体系中培养至桑葚胚后更换为N2B27培养体系。结果表明,N2B27组无法获得囊胚,但PZM-3-N2B27组胚胎可正常发育至囊胚,囊胚率未显著提高,但囊胚细胞总数显著提高(P<0.05)。PZM-3-N2B27组获得孤雌囊胚用于建立猪胚胎干细胞系,显著提高原代克隆形成率(P<0.05),获得猪胚胎干细胞系呈碱性磷酸酶阳性,表达Oct4、Sox2和Nanog等多能性基因。结果表明,采用PZM-3和N2B27培养体系结合获得的猪孤雌囊胚利于猪胚胎干细胞系建立。研究为进一步优化猪胚胎体外培养体系,获得初始态胚胎干细胞系提供参考。     

猪胚胎细胞核移植重组胚发育能力的研究

选用香猪2-～16-细胞期卵裂球作核供体,上海白猪卵母细胞作核受体.通过显微操作和电融合技术构成重组胚.体外培养时,以融合前1h激活、融合前2h激活及融合前不激活的卵母细胞作核受体的重组胚,发育率分别为65.8%,53.1%,33.3%.以体内、体外成熟卵母细胞作核受体胞质时,其重组胚的发育能力无显著变化(P＞0.05).作为核供体的胚胎对于重组胚的发育能力有显著影响,母体合子转变以后的胚胎作为核供体时,重组胚的发育能力下降;分别以不同细胞期胚胎(2-,4-,8-和16-细胞)的卵裂球作为核供体的NT胚发育率有显著差异(P＜0.05),以2-～4-细胞胚胎卵裂球作核供体最合适.     

小鼠和猪胚胎冷冻保存技术的研究进展

从胚胎冷冻保存技术原理对小鼠和猪胚胎冷冻发展速度相差悬殊的原因进行了概述,比较了小鼠和猪胚胎冷冻技术发展的历程及影响两种动物胚胎冷冻的因素,并展望了未来猪胚胎冷冻保存技术。以期能对今后的研究提供参考。     

Vc对猪体细胞克隆胚胎体外及体内发育的影响

[目的]提高克隆猪的大批量生产效率,优化体外与体内培养体系。[方法]将所获得的猪体细胞克隆胚胎用含不同Vc浓度的培养液培养,比较体外囊胚发育力和囊胚细胞数,筛选出合适的培养浓度,然后用此浓度培养后的胚胎进行体内手术移植,统计克隆猪的分娩率和产仔情况。[结果]克隆胚胎在激活后用40μg/m L Vc处理22 h,体外培养未显著增加囊胚率,但显著提高了囊胚细胞数。体内移植结果显示,添加Vc未提高妊娠率,但增加了窝均总仔数,克隆效率差异显著。[结论]Vc处理有利于增强体细胞克隆胚的体内和体外发育能力。     

猪流感研究进展

猪流感是由猪流感病毒引起的一种呼吸道传染病。近期出现了严重的A（H1N1）流感疫情,由于猪在人流感和禽流感之间发挥着＂混合器＂的作用,因此猪流感具有重要的公共卫生意义。该文介绍了猪流感新的流行病学资料、诊断和防制的新方法及其公共卫生上的重要意义,为更好的防制猪流感、人流感和禽流感提供参考。     

微滴中胚胎数量对猪孤雌胚早期体外发育的影响

[目的]优化猪早期胚胎培养体系,为单精子显微受精及体细胞核移植等研究提供依据。[方法]以猪的早期孤雌胚胎为材料,分别将人工激活后的70、50、30、15和5枚卵母细胞放入100μlNCSU-23培养液的微滴中进行培养,探讨了胚胎培养数量对猪早期孤雌胚发育的影响。[结果]100μl的培养微滴中培养30、50和70胚胎组,其分裂率分别为64.0%、65.2%和67.1%,显著高于5胚胎组,而与15胚胎组的差异不显著 在囊胚率方面,70胚胎组的最高,为3.0%,与50胚胎组的（1.7%）无显著差异,与5、15和30胚胎组的差异显著 各组的囊胚细胞数之间没有显著差异。[结论]在该研究条件下,当微滴体积为100μl时,培养50~70枚猪孤雌胚胎的效果最好,即,胚胎数∶培养滴体积=（1∶1.43~2.00）。     

太湖猪早期胚胎发育及超微结构观察

选用太湖后备母猪７０头为试验组,４０头大白猪为对照组。分别于配种后不同时间收集胚胎,观察早期胚胎发育及其超微结构。结果显示：大量的母猪早期胚胎发育阶段随时间不同而不同;而在同一时间内,少量胚胎发育阶段亦有不同,说明多胎动物卵子成熟和排出时间有先有后,配种后８４ｈ胚胎进入子宫。     

山羊超数排卵及鲜胚移植研究

采用FSH(促卵泡素 )结合LH(促黄体素 ) ,以 2种组合分别对 1 9只和 1 4只两组供体山羊进行超排处理 ,得到 541枚的排卵结果 ,共回收胚胎 41 1枚 ,受精卵数为 32 0枚。 2种处理方法分别平均取得了 1 8.4枚和 1 3 .6枚的排卵结果 (p <0 .0 5)。将 32 0枚受精卵中的 1 92枚2 ,4和 8细胞胚胎通过手术法分别移植到 96只受体山羊输卵管内 ,每只受体移植 2枚胚胎 ,3种胚龄的胚胎移植后的妊娠率分别为 68.4% ,74.1 %和 84.0 % (p >0 .0 5)。     

猪圆环病毒的分子生物学研究进展

介绍了PCV的分子生物学特征,认为PCV-1和PCV-2有一定亲缘关系,但也发生了较大的变异.PCV基因组是以滚环模式进行复制,PCV-1基因组的复制依赖于Rep蛋白.叙述了PCV的分子免疫学特征,认为PCV-2感染猪后可损伤猪体免疫系统、引起免疫抑制.从分子流行病学角度得出PCV-2不同分离株的基因组通常比较稳定,但是不同地区的分离株在基因组序列上还是有所改变.对猪圆环病毒的研究提出了新的问题.     

哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

[目的]介绍哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[方法]从冷冻原理、防冻剂种类、冷冻方法、解冻方法等方面综述了哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[结果]胚胎冷冻保存的原理是阻止冷冻、解冻过程中细胞内形成致死冰晶;防冻剂的种类大致分为低分子量渗透性防冻剂、低分子量非渗透性防冻剂、大分子物质、生物活性物质;胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法、玻璃化冷冻法和快速冷冻法;解冻方法主要介绍了快速解冻。[结论]胚胎冷冻保存技术的应用愈加广泛,将对胚胎生物工程和其他生物技术产生推动作用。     

猪接触传染性胸膜肺炎临床感染血清学检测研究

[目的]总结河南省猪接触传染性胸膜肺炎的流行病学规律。[方法]2006年1月至2007年12月份历时2年,郑州牧业工程高等专科学校附属兽医院对来诊的未进行传染性胸膜肺炎疫苗接种的1 169头猪随机采血,进行猪传染性胸膜肺炎抗体水平检测。[结果]平均阳性率为21.55%,同时在被检猪中又进行了猪瘟、圆环病毒、蓝耳病、伪狂犬病、弓形体等疾病感染的检测,证实猪传染性胸膜肺炎与病毒性、细菌性、寄生虫性疾病有着不同程度的混合感染。[结论]猪在发生一种或几种传染病的情况下,由于机体抵抗力的下降,往往可以继发多种疾病。     

Lentivirus Mediated Gene Manipulation in Trophectoderm of Porcine Embryos

Development of tools that can manipulate gene expression specifically and efficiently in the trophectoderm（TE） lineage would greatly aid understanding the roles of different genetic pathways in TE versus embryonic lineages. Here, we showed first time that short-term lentivirus infection of porcine blastocysts could lead to rapid expression of transgene specifically in TE cells. Efficient TE-specific gene knockdown could also be achieved by lentivirus-mediated pol III-driven short hairpin RNA（shRNA） and TE-specific gene expression could be temporal controlled efficiently by combining this system with Tet-On system. This lentivirus lineage-specific infection system would facilitate gene function studies in porcine pre-implatation embryos by specifically knockdown or overexpression of these genes in TE.     

不同激活方法对猪孤雌胚胎单倍体率的影响

 【目的】采用不同的物理或化学方法激活猪卵母细胞,以期获得一种能有效产生猪单倍体孤雌胚胎的激活方法。【方法】试验一分别采用电激活、电激活结合细胞松弛素B(CB)、不同浓度乙醇以及不同作用时间对成熟卵母细胞进行激活处理,试验二检测电激活结合MG-132或Thimerosal和DTT对成熟卵母细胞的激活效果。【结果】试验一显示电激活结合CB组(27.34%)处理后的囊胚率显著高于电激活处理组(16.92%)(P＜0.05),且二者均显著高于所有的乙醇组(P＜0.05),乙醇处理组中以9%乙醇作用11 min效果最佳(10.20%)。试验二显示电激活结合MG-132组的囊胚发育率(24.69%)与电激活结合CB组(27.50%)没有显著差异,二者显著高于电激活结合Thimerosal和DTT组(14.10%)及电激活处理组(17.5%)(P＜0.05)。对所得囊胚进行染色体倍性分析后得出,电激活处理后的囊胚单倍体率(41.7%)与9%乙醇处理组(40%)和电激活结合Thimerosal和DTT处理组(35.3%)无显著差异,但却显著高于电激活结合CB(0)及电激活结合MG-132(6.7%)处理组(P＜0.05)。【结论】综合囊胚发育率和囊胚单倍体比率,电激活、9%乙醇、电激活结合Thimerosal、DTT和电激活结合MG-132处理组获得单倍体囊胚的总效率分别为7.3%(17.5%×41.7%)、4.1%(10.2%×40%)、5.0%(14.1%×35.3%)和1.7%(24.69%×6.7%)。电脉冲处理可能是比较理想的获得猪单倍体孤雌胚胎的激活方法。