几种重金属离子对半滑舌鳎胚胎发育和仔稚鱼的毒性效应

利用半滑舌鳎胚胎为试验材料,研究了Cu、Hg、Zn、Cd、Pb5种重金属对胚胎发育的毒性效应。胚胎在0.01、0.08和0.1mg/LCu2 溶液中孵化率较低,与对照组差异显著(P≤0.05);除0.125、0.25和0.5mg/LCd2 会促进胚胎发育速率外,其余4种重金属都会在不同程度上减慢胚胎孵化速率。重金属离子在胚胎发育过程中引起了各种各样的畸形现象,如眼睛残缺、胚胎异常死亡、胚体解体模糊、胚胎尾部弯曲;初孵仔鱼不能破膜而出,初孵仔鱼脊椎弯曲成“S”形、“V”形、“L”形等。综合孵化率、仔鱼畸形率和胚胎畸形程度等指标可以得出5种重金属对胚胎的毒性大小依次为:Cu>Hg>Cd>Zn>Pb。还研究了Hg、Cu、Cd、Pb、Zn等5种重金属对半滑舌鳎初孵仔鱼、10d仔鱼和20d稚鱼急性(96h)毒性影响,并计算了几种重金属对半滑舌鳎仔稚鱼的半数致死浓度(LC50)和安全浓度。     

水温对半滑舌鳎性腺组织发育的影响

探讨了不同温度(19,21,23,25和27 ℃)对半滑舌鳎的性腺组织发育的影响。在受精后39～106 d对半滑舌鳎进行温度控制处理,通过石蜡组织切片,对半滑舌鳎早期性腺分化发育进行组织学观察。发现在19 ℃饲养条件下,受精后46 d(pfd46)半滑舌鳎性腺原始生殖细胞数量增加,有分化成卵巢的倾向;在该条件下,pfd82半滑舌鳎性腺开始分化为精巢。pfd82时,27 ℃条件下的幼鱼卵巢中卵原细胞数目大量增殖;精巢中精小叶多而密,结缔组织间隔清晰。pfd129时,27 ℃处理的幼鱼卵巢发育到Ⅱ期,其他温度处理组仍处于Ⅰ期卵巢,但随着温度的提高,卵巢中卵母细胞数目增多,且由散乱分布变为有序的排列在卵巢小叶中;精巢中贮精囊数量增多,囊腔中精子增多。pfd142时,高温处理组幼鱼性腺发育最快,其Ⅱ期卵巢中卵母细胞数目最多,精巢中后期生精细胞偏多,精子几乎分布到各个精小叶中,且贮精囊结构发达,内纳高密度精子,在周围输精管中也分布着精子。结果表明,温度影响了半滑舌鳎性腺发育程度,二者呈现线性关系,在适当温度范围内,性腺发育速度随着温度升高而加快。     

光照强度对半滑舌鳎血液指标的影响

本试验研究了不同光照强度对半滑舌鳎血液指标的影响。设置6个光照强度梯度,分别为正常养殖组（养殖场内的光照强度10-30lx,光周期为6L：18D）、0、150、600、1300和2000 lx组,光照周期为12L：12D。在试验的第0、24、48、96和192 h取血,检测血浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、白蛋白/球蛋白（A/G）、溶菌酶(LZM)、血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)等指标。结果显示,光照强度为600、1300、2000 lx组T-SOD、CAT、GSH在胁迫24 h后降至最低,随后逐渐上升; MDA含量在胁迫48 h后升至最高并与0 h差异显著(p<0.05),随后逐渐上升与初始值接近。光照强度为0、150、600 lx组LZM活力在胁迫48 h后最低并与0 h差异显著(p<0.05)。光照强度为0、150 lx组A/G值在试验期间与0 h差异显著(p<0.05)。Glu、TG、CHO浓度在试验期间有波动,但显著不差异(p>0.05)。光照强度为150、600、1300、2000 lx组在胁迫24 h后ALT活力与0 h差异显著(p<0.05)并维持在较高水平。光照强度为600、1300、2000 lx组在胁迫24 h后AST活力与0 h差异显著(p<0.05)并维持在较高水平。     

铜对半滑舌鳎鳃组织结构和Na+-K+-ATPase活性影响的研究

铜暴露后鳃的组织损伤包括:上皮肿胀、肥大增生、空泡化,鳃上皮游离,鳃小片融合,粘液细胞数量增加,杯状细胞数量减少,柱细胞体系破坏,红血球溢出或融合成瘤。氯细胞增生和鳃上皮细胞的肿大、增生使得鳃的血水交换屏障距离加大而导致鳃组织缺氧。试验结果表明,鳃暴露于Cu2 溶液后会出现离子调节功能、酸平衡调节和渗透调节功能的损伤。Na K ATPase活力随水中铜离子浓度的升高而降低,且与对照组差异显著(P≤0.05)。组织学上可以直接地反映水体中重金属污染对鱼类鳃的损伤,因此是一种水环境重金属污染监测的重要指标。Na K ATPase活力对水环境铜污染具有反应的敏感性,与铜离子浓度之间存在明显的剂量效应关系,其活力的变化可以作为水体重金属污染的生物指示器。     

甲醛和硫酸铜对半滑舌鳎的急性毒性试验

以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther)为研究对象进行96h的急性毒性试验,探究甲醛和硫酸铜处理后半滑舌鳎的半数致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)。实验结果表明,甲醛处理48h、96h后半滑舌鳎的LC50分别为375.68mg·L-1、351.74mg·L-1,SC为35.174mg·L-1;硫酸铜处理48h、96h后LC50分别为2.81mg·L-1、2.58mg·L-1,SC为0.258mg·L-1。     

急性温度胁迫对半滑舌鳎血液指标的影响

为研究急性温度胁迫对半滑舌鳎血液生理指标的影响,将半滑舌鳎在17 ℃海水中驯化2周后直接放入21 ℃(T21)、24 ℃(T24)、27 ℃(T27)的海水中热冲击1.5 h,再放回17 ℃海水中饲养.分别在温度胁迫前(对照)、温度胁迫后0、6、12、24、48、96 h,尾柄采血,检测血浆中总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、白蛋白/球蛋白(A/G)、溶菌酶(LZM)、血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)等指标.试验结果表明,温度胁迫后SOD先降后升,胁迫后12 h降至最低;CAT在胁迫后12 h急剧下降,之后维持较低水平;温度胁迫后GSH和MDA先升高后降至对照水平;T21、T24组GSH在胁迫后12 h升至最高,T27组24 h升至最高;MDA在胁迫后6 h升至最高;温度胁迫后6 h LZM急剧升高,之后维持较高水平;温度胁迫后A/G先降后升,12 h降至最低,96 h恢复至对照组水平;Glu在胁迫后6 h急剧降低,之后维持在较低水平;TG在胁迫后出现波动,并有恢复至对照组水平的趋势;CHO在胁迫后整体呈下降趋势.ALT在胁迫后先升(12 h达峰值)后降,T21和T24组在48 h恢复至对照组水平,T27组在96 h仍高于对照组.T27组AST先升高(6 h达峰值)后恢复至对照组水平,T21和T24组AST在胁迫后无明显变化.     

关于半滑舌鳎人工繁殖的几点思考

半滑舌鳎是很有发展前途的水产养殖新品种,因其自然资源的枯竭,人工繁殖就显得尤为重要。本文从半滑舌鳎亲鱼培养、幼体培育等方面介绍了半滑舌鳎繁殖的几个关键技术。     

地下深井水对半滑舌鳎生长的影响试验

用纯地下深井水、不同比例混合井水和自然海水进行半滑舌鳎养殖对比试验,结果表明:当地下深井水在养殖用水中的比例为50%以下时,不会对半滑舌鳎的生长发育造成太大影响.     

pH及温度对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性的影响

研究了不同pH及温度对半滑舌鳎幼鱼三种主要消化酶活性的影响。实验结果显示半滑舌鳎胃、肝胰腺、肠蛋白酶的最适pH分别是3.0、7.5、8.0;淀粉酶的最适pH分别是8.0、7.5、7.5。随着温度的增加,半滑舌鳎消化酶的活性均呈现先升高后下降的趋势,半滑舌鳎胃、肝胰腺、肠蛋白酶的最适温度分别是50℃、45℃、40℃;脂肪酶最适温度分别是35℃、45℃、40℃;胃和肠淀粉酶最适温度均为20℃;而在15～30℃范围内,肝胰腺均呈现高的淀粉酶活性。不同组织酶活力比较:蛋白酶活力以肝胰腺>胃>肠;淀粉酶活力是肠>胃>肝胰腺;脂肪酶活力以胃>肝胰腺和肠,肠道中以前肠的消化酶活力最高。     

半滑舌鳎结节病的初步研究

阐述了半滑舌鳎结节病的典型症状、流行情况,进行了病原学探索性研究,初步确定该病不是由病毒引起。对于患病鱼体肝脏、肾脏和脾脏的组织进行了病理分析,认为病原侵入鱼体主要组织造成组织病变,是导致其死亡的主要原因。     

饥饿对半滑舌鳎仔鱼生长和发育的影响

实验室条件下,利用观察行为变化、测量记录外部形态特征和组织切片等方法研究了饥饿条件下半滑舌鳎仔鱼(初孵仔鱼,10,16d)的存活与生长特征、卵黄利用、鳔的发育、消化系统和游泳行为的变化。结果表明,仔鱼对饥饿的行为反应可分为3个阶段,即表层集群游动觅食阶段,缓慢游动反应迟钝阶段和外部形态变化并多数伏底静止阶段。饥饿条件下,初孵仔鱼、10和16d仔鱼的全部死亡时间分别为13、8和11d;半数死亡时间分别为7.8、3.5和7.4d,说明10d仔鱼阶段为半滑舌鳎早期发育阶段中较为敏感的阶段;饥饿会延缓初孵仔鱼对卵黄的利用速率;随着饥饿时间的延伸,鳔的体积与正常条件下仔鱼鳔的体积差异显著(P<0.05),但对仔鱼开鳔时间和最终开鳔率无影响。组织切片观察表明,饥饿条件下仔鱼肠道绒毛和上皮细胞高度下降;肝脏细胞主要为核占据细胞质几乎消失。外部形态上,饥饿仔鱼体长较短,头大且身体窄瘦,肩胛骨异常突出,肠极度收缩,长期饥饿后所有仔稚鱼具有脑后部下陷的共同特征,可以作为早期仔鱼饥饿的标志。根据饥饿仔鱼行为学和形态学的变化,可以初步地评价半滑舌鳎早期发育阶段的营养水平,从而为人工育苗中正确指导投饵提供依据。     

关于半滑舌鳎人工繁殖的几点思考

半滑舌鳎是很有发展前途的水产养殖新品种,因其自然资源的枯竭,人工繁殖就显得尤其重要。文章从半滑舌鳎亲鱼培育、幼体培育等方面介绍了半滑舌鳎繁殖的几个关键技术。     

光照周期对半滑舌鳎生长和抗氧化指标的影响

在水温25.2～28.2℃下,将半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)(体质量120.65±1.57g)饲养于底面积为0.75m2的圆形水族内(30尾/箱),用黑塑料布遮光,研究了4种光照周期(0L/24D,6L/18D,18L/6D,24L/0D)对生长和抗氧化指标的影响。28 d的饲养结果表明:光照周期为6L/18D时,饲料系数最低、增重率和净增重最大;光照周期为18L/6D时,血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力最高,而在24L/0D光照周期下,肝脏中SOD比活力最高,在四种光照周期下,脾脏、肾脏SOD比活力差异不显著(P>0.05);光照周期为6L/18D时,血清过氧化氢酶(CAT)活力最高,6L/18D组鱼脾脏中CAT比活力显著高于其他组(P<0.05);肝脏、肾脏中CAT的比活力差异不显著(P>0.05);肝脏的还原型谷胱甘肽(GSH)含量均显著高于血清、脾脏和肾脏,6L/18D组鱼肝脏中(GSH含量显著高于0L/24D组和24L/0D组(P<0.05);6L/18D组血清中丙二醛(MDA)含量显著低于其他组(P<0.05),肝脏中0L/24D组MDA含量最低,18L/6D组MDA含量显著高于0L/24D组(P<0.05),6L/18D组鱼脾脏、肾脏中MDA含量最低。光照周期为6L/18D时最适合半滑舌鳎生长。     

半滑舌鳎性腺的组织学研究

采用组织切片,对半滑舌鳎性腺的组织学结构进行了观察研究。结果表明,半滑舌鳎的精巢为小叶型,精巢内的生殖细胞分为五种。其精原细胞存在于精小叶的内壁上,精母细胞和成熟的精子细胞位于精小囊中。精子成熟后,精小囊破裂释放精子进入小叶腔,完成发育过程。半滑舌鳎卵巢外有被膜包裹,其被膜的结缔组织可明显地分为内外两层。内层的结缔组织、血管与原始生殖细胞一同伸进卵巢内部形成许多产卵板。产卵板以卵巢腔为中心向四周呈辐射状排列,上有原始生殖细胞分化形成卵原细胞和不同时相的卵母细胞。半滑舌鳎卵巢中的卵母细胞的发育可以分为5个时相。本文描述了各时相卵母细胞的形态学特征。并阐述了半滑舌鳎的产卵类型。     

外源激素对半滑舌鳎早期性腺发育及生长的影响

为探讨外源激素对半滑舌鳎性腺发育、体长增长及存活率的影响,用雌二醇和甲基睾酮分别处理半滑舌鳎幼鱼,各设200μg/L,400μg/L,500μg/L三个浓度进行浸浴处理,以乙醇处理作为阴性对照组,未做任何处理的作为空白对照组,统计各组存活率并在实验的不同时间段分别观察实验鱼的体长的变化;激素处理30 d后,每隔5 d每组取样5尾,通过组织学H.E染色观察各实验组幼鱼性腺的发育情况。结果表明,在甲基睾酮和雌二醇的诱导下,半滑舌鳎幼鱼的生长情况均受到一定程度的抑制,雌二醇在半滑舌鳎幼鱼发育早期对其卵巢发育具有一定的促进作用,而甲基睾酮则起到了抑制的作用。     

温度对半滑舌鳎生长及性类固醇激素水平的影响

为了探索温度对半滑舌鳎幼鱼生长及性别的影响,本研究以半滑舌鳎家系为材料,在受精后32 d,将建立的家系鱼苗分别置于9、21、23、25和27℃水温下进行培育,在32~142 dpf测量各培育温度下半滑舌鳎幼鱼的体长和体质量,利用SPSS软件中方差分析和相关分析法多重比较分析幼鱼生长规律、温度与体长和体质量的相关性。结果表明,在98 dpf时,25℃下幼鱼生长最快,但培养至129~142 dpf时,23℃温度组生长速度显著高于其他温度组。23和25℃下的半滑舌鳎体质量特定生长率分别为4.42%和4.63%,明显高于其他温度处理组。温度与半滑舌鳎家系体长、体质量的Pearson系数分别为0.271和0.260,极显著正相关。体长、体质量与温度的关系式分别为L=1.637 6T0.378 2(R2=0.082),W=0.028 5T1.078 1(R2=0.075)。采集23℃下半滑舌鳎受精卵和3~142 dpf的鱼苗,进行性类固醇激素表达水平分析。结果显示,睾酮(T)和雌二醇(E2)含量在受精卵中最高(54.78 ng/mg和92.52 pg/g),3~32 dpf时逐渐降至最低值(4.6 ng/mg和5.43 pg/g)。至46 dpf时又显著上升到峰值[(40.81±12.64)ng/mg和(42.04±19.13)pg/g],之后显著下降。在温度控制组,32~46 dpf各个温度组鱼苗T和E2含量显著上升,46 dpf时达到峰值,但19和21℃温度组显著高于其他组,T分别为(94.70±45.06)和(85.45±37.30)ng/mg,E2分别为(83.37±17.97)和(105.80±54.90)pg/g;其他温度组T和E2含量相对较低且无显著差异。98 dpf性类固醇激素表达量显著下降,各温度组E2水平无显著差异,但19和27℃时T水平高于其他温度组。依此推测46 dpf、体长(4.99±0.75)cm时半滑舌鳎鱼苗性腺开始分化,19和27℃有可能促使鱼苗雄性化。     

益生菌对半滑舌鳎养殖水质及仔稚鱼生长的影响研究

为研究益生菌对水质因子及半滑舌鳎仔稚鱼生长指标的影响.设置添加益生菌的试验组和未添加益生菌的空白对照组进行饲喂试验,定期测定水质因子并从每组随机抽取鱼体测定其生长指标.研究发现,采用相同饵料喂食半滑舌鳎仔稚鱼,投喂益生菌对试验组pH、DO、温度、氨氮、亚硝氮没有显著影响(P＞0.05),表明添加益生菌对水质无不良影响.试验组半滑舌鳎仔稚鱼的体长增长率较对照组虽无明显差异,但增重率、肥满度和成活率显著提高(P＜0.05),表明益生菌的使用可显著提高经济效益.     

半滑舌鳎精子冷冻保存

半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2．8mol／L的二甲基亚砜（DMSO）、甘油（Gly）和1,2-丙二醇（PG）冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS＋2．8mol／L DMSO以1：0．5、1：1、1：1．5和1：2的比例稀释并冷冻精子,1：1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82．50±3．54％,显著高于其他稀释比例（P〈0．05）。分别利用冷冻保存液A（MPRS＋2．8mol／L DMSO）和B（TS-2＋2．8mol／LDMSO）稀释平衡精子,精子在A中的冻前快速运动时间、寿命分别为37．75±6．45S和145．00±78．98S,与鲜精无显著差异（P〉0．05）。利用以上两种冷冻稀释液冷冻保存精子,精子在A液中的冻后活力和寿命分别可达53．50±6．69％和98．00±13．51s,冷冻效果优于B液（P〈0．05）。冷冻后精子的受精率和孵化率分别为55．00±5．00％和35．00±13．23％,受精率与鲜精无显著性差异（P〉0．05）,因此认为MPRS＋2．8mol／L DMSO可用于半滑舌鳎精子的冷冻保存。     

半滑舌鳎土池养殖试验

2006年6月,从山东引进半滑舌鳎鱼苗950尾于面积0.2 hm2的单养池塘进行试养.经过8个月的养殖,至2007年2月,共捕获半滑舌鳎810尾,起捕率85%,最大舌鳎鱼体长达到36 cm,体质量405 g,平均体长30.5 cm,体质量340 g.试验过程中发现在33 ℃高温和10 ℃的低温季节,半滑舌鳎均可生长,月平均增长率甚至高达28%,在此温度范围内,半滑舌鳎的生长与温度的相关关系不显著;但对温度快速下降的耐受性较差,易钻泥导致窒息死亡.     

半滑舌鳎人工育苗技术研究

研究采用人工繁殖苗种,经室内人工养殖促熟培育及繁殖调控,达到自然产卵受精。利用传统对虾育苗池,采用人工控温、生态调控育苗技术,成功培育出健康半滑舌鳎苗种,体色正常,自初孵仔鱼至今育苗成活率37.5%。