纯化ETEC K88菌毛特异性卵黄抗体的加工贮藏及体外抗粘附性研究

分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均为1：1280;卵黄抗体粉在90℃干热条件下处理5min后抗体效价下降50％,而90℃湿热条件下处理5min抗体效价无明显变化,但处理15min后下降75％;经过1h的干热或湿热处理,抗体均基本失活;4℃和常温下放置半年对卵黄抗体粉活性无影响;体外抑制粘附试验表明,抗K88卵黄抗体能抑制K88对肠上皮细胞的粘附。     

预防仔猪大肠杆菌性腹泻卵黄抗体的研究进展

仔猪大肠杆菌性腹泻病的致病机理主要与产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌毛介导的粘附作用和肠毒素的产生与释放密切相关。通过特异性免疫生产的鸡卵黄抗体,是预防仔猪大肠杆菌性腹泻病的一种新的方法;而且能有效降低仔猪的腹泻发生率,并提高仔猪的增重。文中综述了国内外用鸡卵黄抗体防治仔猪大肠杆菌腹泻的研究进展,讨论了现阶段鸡卵黄抗体存在的不足,并提出基因工程技术在卵黄抗体研制开发中的应用前景。     

肠毒素性大肠杆菌菌毛对产蛋鸡免疫性的研究

采用热抽提法提取4种肠毒素性大肠杆菌菌毛蛋白。K88、K99、F41和987p菌毛蛋白分别制成弗氏佐剂苗;K88还制成白油佐剂苗,氢氧化铝胶苗和蜂胶佐剂苗;另将4种菌毛等比例混合制成弗氏佐剂苗。分别对产蛋鸡进行免疫,用微量凝集反应和血凝抑制试验检测卵黄抗体效价。结果表明,K88菌毛较其他3种菌毛免疫性好,诱导抗体效价最高而且能长时间维持;987p菌毛能快速诱导抗体的产生,但整体效价低。K88不同佐剂苗中,铝胶佐剂能较快地诱导抗体的产生,蜂胶佐剂苗抗体持续时间短,弗氏佐剂能诱导高效价的抗体产生而且能长时间持续。     

同位素标记检测卵黄抗体对大肠杆菌的黏附抑制作用

<正>仔猪大肠杆菌性腹泻的主要病原为产肠毒素性大肠杆菌(enterototxigenic Escherichia coli,ETEC)[1,7]。ETEC的致病作用主要由肠毒素和黏附素性菌毛等两类毒力因子共同构成[2],其主要的致病环节是ETEC     

鸡抗猪产肠毒素性大肠杆菌卵黄抗体的应用

产肠毒素性大肠杆菌与仔猪腹泻的致病过程密切相关。卵黄抗体具有价格便宜、制作简单等优点,能降低腹泻的发生率和严重程度,是防治仔猪大肠杆菌性腹泻的一种新方法。本文就国内外鸡抗猪产肠毒素性大肠杆菌卵黄抗体的应用作了简要介绍。     

产蛋鸡抗大肠杆菌F4菌毛的血清抗体和卵黄抗体消长规律的研究

从浙江省10多个规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,分离致病性大肠杆菌。血清学和PCR方法鉴定菌毛型主要为F4和F18。挑取1株致病性和菌毛表达较强的F4阳性菌株,接种改良M inca培养基培养,热抽提法分离菌毛并纯化菌毛蛋白。将50只蛋鸡随机分5组,分别肌注1 mL免疫原/只:A组菌毛蛋白(250μg/只),B、C和D组菌毛蛋白(250,50,10μg/只) 弗氏佐剂,E组为空白对照。21 d加强免疫。定期采血分离血清,水稀释法和饱和硫酸铵盐析法分离卵黄抗体。ELISA法检测血清和卵黄抗体效价。结果表明,F4菌毛蛋白具有良好的免疫原性:在弗氏佐剂的辅助下,二免后21 d抗体效价达最高峰,血清和卵黄抗体效价分别为4.7 lg和4.4 lg,二免后56 d血清和卵黄抗体效价仍维持在4.0 lg;另外二免后21 d,10μg/只免疫剂量与50μg/只及250μg/只相比,诱导产生的卵黄抗体效价之间差异不显著(P>0.05)。     

肠毒性大肠杆菌(ETEC)蛋黄抗体防治仔猪腹泻病试验

肠毒性大肠杆菌(ETEC)蛋黄抗体是将K88、K99、987P和HRV的大肠杆菌抗原免疫产蛋母鸡后,使血清产生相应抗体,产蛋母鸡又以产蛋方式将含有抗大肠杆菌K88、K99、987P和HRV的高效价血清免疫球蛋白(IgG)有效地转移到蛋黄中,即免疫球蛋白,简称IgY,再采用理化方法从高免鸡蛋中提取纯化IgY,即肠毒性大肠杆菌蛋黄抗体粉.     

特异性ETEC K99-SIgA免疫复合物增强小鼠黏膜免疫反应的研究

为探究产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)特异性K99-SIgA免疫复合物对激发小鼠黏膜免疫反应的影响,本实验构建pET-32a-K99/BL21(DE3)原核表达载体,经IPTG诱导表达后以亲和层析方法纯化制备了重组K99蛋白(rK99);采用rK99蛋白和ETEC标准菌株K99经腹腔注射免疫BALB/c小鼠制备鼠源K99...     

卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌病中的应用

利用外源特异性卵黄抗体防治猪产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)感染是近年来人们关注的一个热点。重点简述卵黄抗体的特性、防治仔猪大肠杆菌感染的作用机理及应用效果。     

特异性IgY抗仔猪断奶腹泻机理的研究概况

针对仔猪断奶腹泻（Post—weaning Escherichia coli diarrhea，PWECD）这一仔猪断奶后的常见病和多发病的病原特异性，阐述了利用K88和F18等特异性菌毛作为抗原免疫产蛋母鸡制备的抗PWECD特异性卵黄抗体对大肠埃希氏菌引起的断奶仔猪腹泻的作用机理。认为，特异性IgY用于防治PWECD，具有安全、高效、成本低、产率高、稳定性好，无药物残留，不会产生耐药性，符合现代动物管理理念等诸多优点，是一种能有效防治PWECD的绿色生物制剂，应用前景广阔。     

Mucosal immunization of piglets with purified F18 fimbriae does not protect against F18+ Escherichia coli infection

Post-weaning diarrhoea and oedema disease in weaned piglets are caused by infection with F4⁺ or F18⁺ Escherichia coli strains. There is no commercial vaccine available, but it is shown that oral immunization of weaned piglets with purified F4 fimbriae induces a protective mucosal immune response. In the present study, piglets were orally and nasally immunized with purified F18 fimbriae in the presence of the mucosal adjuvant LT(R192G) or CTA1-DD, respectively. This immunization could not lead to protection against F18⁺ E. coli infection. The induced F18-specific immune response was directed towards the major subunit FedA and weakly towards the adhesive subunit FedF. The results of these experiments demonstrate that it is difficult to induce protective immunity against F18+ E. coli using the whole fimbriae due to the low response against the adhesin.     

大肠埃希氏菌F18菌毛结构蛋白与黏附特性的关系

利用已表达的F18ab和F18ac菌毛各结构亚单位的融合蛋白（GST-FedA／ab、GST-Fe-dA／ac、GST-FedE、（；STFed-F／ab、GST-FedF／ac）分组肌肉注射健康家兔，制备抗FedA／ab、Fe-dA／ac、FedE、FedF／ab、FedF／ac多价血清。结果表明，所制备的5种抗Fed多价血清均能凝集F18ab^＋。大肠埃希氏菌107／86株和F18ac^＋大肠埃希氏菌8813株。利用抗大肠埃希氏菌F18菌毛主要结构亚单位FedA特异抗体和次要结构亚单位FedE、FedF特异抗体，研究了F18菌毛与小肠上皮细胞的黏附特性。结果发现，FedA抗体和FedE抗体单独和合并均不能抑制F18^＋菌与小肠上皮细胞的黏附，而单用抗FedF抗体即能明显抑制F18^＋大肠埃希氏菌与小肠上皮细胞的黏附，表明FedA和FedE与F18菌毛的黏附不具相关性，而FedF才是F18菌毛的黏附性结构亚单位。     

乳酸菌和大肠杆菌对固定化犬肠道黏蛋白模型的黏附性

采用固定黏蛋白模型,结合细菌同位素γ-32P-ATP标记法,探讨犬源肠球菌E01和E16、犬源大肠杆菌DE、鸡源德氏乳酸杆菌德氏亚种N11及猪源约氏乳杆菌JJB3和致病性大肠杆菌ATCC25922和CVCC2060对本地犬各肠段黏蛋白的黏附能力;肠球菌E16和大肠杆菌DE各自的黏附机制;2株犬源肠球菌以3种作用方式（排斥、竞争、取代）对2株致病性大肠杆菌的黏附抑制作用。结果表明,各测试菌株在犬各肠段黏蛋白模型上的黏附值均不同;2株犬源肠球菌和1株猪源乳酸菌的黏附性能显著优于犬源大肠杆菌DE和2株致病性大肠杆菌;乳酸肠球菌E16表面的碳水化合物结构和糖蛋白参与了黏附过程,大肠杆菌菌体蛋白在黏附过程中发挥一定作用;乳酸肠球菌的黏附受体对高碘酸钠和胰蛋白酶处理不敏感,大肠杆菌DE的黏附受体具有碳水化合物结构,可能为糖蛋白类物质;在肠球菌与病源菌的3种作用方式中,取代和排斥方式对病原菌黏附抑制效果较好。这表明2株犬源肠球菌具开发为益生菌的潜力。     

肠炎沙门菌SEF14菌毛与肠上皮细胞IPEC-J2和Caco-2的体外黏附作用研究

为研究肠炎沙门菌SEF14菌毛对肠上皮细胞的黏附作用,本试验利用肠炎沙门菌50336株、突变株50336△sefA、50336△sefD以及互补株50336△sefA (pBRA)、50336△sefD (pACYCD)与肠上皮细胞系细胞(IPEC-J2和Caco-2)进行了黏附作用.结果显示:上述菌株均能与IPEC-J2、Caco-2细胞进行有效黏附,并且随时间延长黏附数量有所增多,相同时间各菌株与IPEC-J2细胞的黏附数量明显多于Caco-2细胞;但细菌和细胞共感染1和4h后,肠炎沙门菌野生株、相应的突变株和互补株与IPEC-J2和Caco-2细胞黏附的数量差别很小,未到达显著差异水平(P＞0.05).结果表明:SEF14菌毛并不特异性介导肠炎沙门菌与肠上皮细胞系IPEC-J2和Caco-2的黏附作用,或者不是介导黏附作用的主要因子.     

In vitro inhibition of ETEC K88 adhesion by pea hulls and of LT enterotoxin binding by faba bean hulls

Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) expressing K88 (F4) adhesins are associated with post‐weaning diarrhoea in piglets. Different grain fractions from pea (Pisum sativum) and faba bean (Vicia faba) were tested in vitro for their capacity to counteract aetiological factors, which contribute to the development of diarrhoea. In detail, adhesion of E. coli O149:K91:K88ac (ETEC K88ac) to grain legume products, intended to impair the colonization of the host, was studied as well as interference with receptor binding of the pathogen’s heat‐labile enterotoxin LT, intended to reduce toxin‐inflicted gut cell damage. When comparing different pea and faba bean products tested for their binding capacity of ETEC K88ac, especially pea hulls, but also whole pea meal, starch‐enriched and protein‐enriched pea meal, and digestion‐resistant pea hull and meal fractions showed a higher binding of ETEC K88ac than faba bean products. In contrast to the ETEC K88ac adhesion results, bean hulls proved more effective than pea hulls in preventing GM1 receptor binding of LT. Previous small intestinal segment perfusion experiments we performed with ETEC K88ac‐challenged piglets indicated that both pea and bean hulls have the potential for successful application in diarrhoea prophylaxis and treatment, which is in agreement with and refined by our detection of their different modes of functioning.     

鸡卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌性腹泻中的应用

仔猪大肠杆菌性腹泻病的致病过程主要与产肠毒素型大肠杆菌菌毛介导的粘附作用和产肠毒素密切相关，用禽菌毛抗原免疫产蛋母鸡制备卵黄抗体，在初生仔猪和断奶仔猪的人工感染实验中，口服卵黄抗体能降低腹泻程度和仔猪的死亡率；在商业性猪场的实验表明，卵黄抗体能降低提前断奶仔猪的腹泻发生率，并且有利于仔猪的增重，鸡卵黄抗体是仔猪大肠杆菌性腹泻病的一种新的防治方法，本文就国内外鸡卵黄抗体防治仔猪大肠杆菌腹泻的研究概况作了简要介绍。     

猪源乳酸杆菌对永生化猪小肠上皮细胞的黏附性能

以永生化猪小肠上皮细胞ZYM—SIEC02为体外模型,通过革兰染色法、平板计数法等检测发酵乳杆菌Y091231（Lactobacillus fermentation）、乳酸乳杆菌Y091221（Lactobacillus lactis）,嗜酸乳杆菌Y224031（Lactoba-cillusacidophilus）的黏附性能及对大肠杆菌C83921、致病性沙门菌、金黄色葡萄球菌CVCC2258的黏附抑制作用。结果显示,3株菌对永生化猪小肠上皮细胞的黏附性均较强,黏附指数平均为：Y091231（2903．25±83．33）个／100cells、Y091221（2320．37±81．02）个／100ceils、Y224031（I965．43±37．72）个／100cells,菌株之间差异不显著（P〉0．05）。黏附抑制试验结果显示,Y091231对大肠埃希菌C83921和金黄色葡萄球菌CVCC2258的黏附抑菌能力最强（（99．4±3．17）％和（98．0±2．31）％）,Y091221对沙门菌的抑菌能力最强（（97．1±2．04）％）,Y224031对大肠埃希菌C83921比对另外2种致病菌的黏附抑制能力高,但又显著低于Y091231和Y091221（P〈0．05）,表明不同种乳酸菌对致病菌的黏附抑制作用具有菌种特异性。