水貂绿脓杆菌的分离与鉴定

2011~2013年间,从山东省、河北省和江苏省等地的多个貂场疑似水貂出血性肺炎病貂的肺脏、肝脏和脾脏中分离到425株疑似绿脓杆菌。用绿脓杆菌的OprF和PEA基因的PCR引物对分离菌株的目的基因扩增,经核苷酸测序确定其均为绿脓杆菌序列。通过日本生研株式会社血清学分型系统进行分型：G型376株,占88.5%;B型34株,占8%;C型12株,占2.8%;E型3株,占0.7%。取其中6株细菌（G血清型3株,其他血清型各1株）进行详细生化试验,结果显示该6株菌均符合绿脓杆菌的生化特性,并且从这6株中选4株细菌（每血清型各1株）腹腔接种小白鼠和气管内接种水貂,结果表明4株菌对其均有致病性。     

国内火鸡体内霉形体的分离与鉴定

从北京和呼和浩特市4个火鸡场的95只火鸡、50只火鸡胚和42份精液样品中分离到15个分离物,用国际霉形体分类分会推荐的生化、遗传学和血清学方法证明其中有两个分离物是两种霉形体混合物,共17株霉形体。所有分离物在无抑菌剂的培养基上连续传代5次未出现细菌形态、对毛地黄皂苷敏感、不水解尿素、DNA的G C含量介于26-34mol％之间。生长抑制试验和间接表面免疫荧光技术的试验结果将其中的15个株分属于霉形体属的5个种,即鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum)4株、滑液霉形体(M.synoviae)2株、衣阿华霉形体(M.iowae)1株、鸡霉形体(M.gallinarum)和雏鸡霉形体(M.pullorum)各4株。其余2株也属霉形体属,但尚未鉴定到种。     

和缓艾美球虫与早熟艾美球虫的分离与鉴定

采用单卵囊分离技术,获得了2株纯种球虫,鉴定为和缓艾美球虫与早熟艾美球虫.主要鉴定指标:和缓艾美球虫:卵囊呈球形或亚球型,囊壁光滑无色,卵囊内有1极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(14.96±1.38μm×(13.65±1.20)μm,测100个孢予囊的平均大小为(9.23±1.20)μm×(5.29±0.53)μm;潜在期96 h,最短孢子化时间15.5 h;虫体主要寄生于小肠下段.早熟艾美球虫:卵囊呈椭圆形或卵圆形,有极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(19.21±2.10)μm×(16.40±1.75)μm,测100个孢子囊的平均大小为(10.62±0.90)μm×(6.85±0.75)μm;潜在期84 h,最短孢子化时间20 h;虫体主要寄生于鸡十二指肠与空肠前段.分别用此2株纯种球虫的孢子化卵囊20×10<'4>、60×10<'4>个感染30日龄黄羽肉鸡各10只,另设1个不感染对照组,结果感染2株纯种球虫的鸡均未发生死亡,但平均增重与不感染对照组差异显著(P<0.05),感染和缓艾美球虫的2组鸡肠道均出现可见病变,感染早熟艾美球虫的2组鸡肠道病变计分为零.     

食动物线虫真菌的分离和鉴定I.从土壤中分离捕食线虫真菌

以山羊捻转血矛线虫第三期幼虫作为诱饵线虫,利用撒布分离法,对土壤中的食线虫真菌进行了分离和鉴定。结果从不同的土样中分离到了棣属于２个属,７个种的２６株捕食线虫真菌。７个真菌种分别为寡孢节丛孢菌（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ）,指状节丛孢菌（Ａ．ｄａｃｔｙｌｏｄｅｓ）,蠕虫节丛孢菌（Ａ．ｖｅｒｍｉｃｏｌａ）,圆锥节丛孢菌（Ａ．ｃｏｎｏｉｄｅｓ）,白色单顶孢菌（Ｍｏｎａｃｒｏｓｐｏｒｉ     

柔嫩艾美尔球虫和巨形艾美尔球虫的分离与鉴定

采用单卵囊分离技术，获得了两纯种球虫，鉴定为柔嫩艾美尔球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌａ）和巨形艾美尔球虫（Ｅ．ｍａｘｉｍａ）。主要鉴定指标：柔嫩艾美尔球虫，虫体寄生于鸡盲肠，卵囊呈卵圆形或宽卵圆形，有极体，无内、外残余体，测２００个卵囊的平均大小为（２０１６±１６１）×（１５５９±１１３）μｍ，测２００个孢子囊的平均大小为（１１６４±０８５）×（５．８６±０．５９）μｍ，潜隐期１４１ｈ，最短孢子化时间１９ｈ；巨形艾美尔球虫，虫体主要寄生于小肠中段，卵囊大，呈卵圆形，金黄色，有极体，无内、外残余体，测２００个卵囊的平均大小为（２８５１±１９８）×（２１．７９±１．５０）μｍ，测２００个孢子囊的平均大小为（１６３１±１０４）×（７．７８±０．４９）μｍ，潜隐期１２４ｈ，最短孢子化时间３２ｈ。     

鸡柔嫩艾美耳球虫广西株的分离与鉴定

目的建立一种简单、实用的单卵囊分离方法,并对一株广西柔嫩艾美耳球虫进行分离。方法采用电泳制胶槽来制作琼脂块进行球虫单卵囊的分离,单卵囊实验感染9只1日龄雏鸡,感染后收集粪便,用饱和盐水漂浮法进行卵囊检测。纯种卵囊经口感染10只1日龄雏鸡,观测卵囊寄生部位、最短孢子化时间,以及其潜在期和排卵高峰期。结果2只雏鸡粪便中检出卵囊,单卵囊感染成功率为22％。通过对其中一株球虫的研究,根据其卵囊的形状、大小、寄生部位、潜在期、卵囊最短孢子化时间、排卵高峰期等生物特征,鉴定该株球虫为柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）。结论本研究成功建立一种单卵囊分离技术,可作为球虫单卵囊分离的常规方法。     

小灵猫鼠伤寒沙门氏菌的分离与鉴定

2只从市场收购的野生小灵猫急性发病死亡，病变为肝肿大、坏死、心内外膜出血、肠炎、肠外膜有出血斑点。经实验室检查，分离到1株致病力强的鼠伤寒沙门氏菌，抗原模式为1，4，5，12：1；1，2药敏试验结果表明对多种药物具有较强耐药性。     

藻菌类毒性分解代谢物的分离与鉴定

本文报道微小根毛霉（Rhizomucor pusillus)，足样根霉（Rhizopus rhizodiform)和伞枝梨头霉（Aosidia corumoifera) 接种于已灭菌的草本犀粉，胡麻饼和玉米粉培养基中。于37℃培养15d后，提取培养物所得分馏物，经分离与鉴定，获得3种毒性产物。（1）3种菌在草本犀培养物中分离到香豆素和双香豆素，而胡麻饼和玉米粉培养物中未分离到上述产物。这表明香豆素和双香豆素并非藻菌的代谢放牧，而是由于藻菌腐生于草本犀后的分解产物，使其草本犀自身含有的香豆素分解转化成双香豆素，并使其含量成倍增长，导致牛、羊中毒。（2）以标准黄曲霉素B1通过薄层层析的确证试验，确认足样根霉在玉米粉培养基中能产生黄曲霉毒素B1。（3）3种菌在3种培养基中同时分离到16、18碳直链固态饱和脂肪酸。16碳脂肪酸分子式CH3（CH2）14COOH，分子量25．1，18碳脂肪酸分子式CH3（CH2）16COOH，分子量283．4。16、18碳脂肪酸是藻菌在上述培养基中形成的分解产物，致使基质中脂肪分解，含量降低，而脂肪酸含量大增，它反应了饲料霉变的本质，也是动物酸中毒的成因。     

猪源艰难梭菌的分离鉴定及特性分析

为了解河南省规模化猪场猪源艰难梭菌的流行、耐药以及毒素基因携带情况,收集来自豫西地区5个养殖场中疑似艰难梭菌感染(clostridium difficile infection,CDI)猪的粪便标本(n=41)。采用厌氧培养法,用艰难梭菌选择性培养基环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂(cycloserine-cefoxitin-fructose agar,CCFA)完成分离培养。采用表型培养法进行菌株分离和鉴定,以多重PCR同时鉴定菌株并检测tcdA和tcdB毒素基因及二元毒素编码基因cdtA和cdtB。采用E-test法检测艰难梭菌对常用抗生素的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值并判定菌株对药物的敏感性。结果从分离的41份样本中,经染色镜检及PCR鉴定,分离出符合艰难梭菌生长特性的菌株1株。药敏结果显示分离菌株对万古霉素和甲硝唑呈现高度敏感,对氟喹诺酮类药物以及四环素等表现出不同程度的耐药。艰难梭菌的研究大多集中在人源方面,本研究首次在河南省规模化养猪场中分离出艰难梭菌,对所分离菌株进行毒素基因检测,毒素A、B呈阳性,而无二元毒素基因。分离的猪源艰难梭菌对红霉素、万古霉素、甲硝唑、利福平均呈现高度敏感,对克林霉素、阿莫西林、左氧氟沙星、利奈唑酮和青霉素呈现不同程度的耐药。     

一株猪细小病毒7群的鉴定和分离

猪细小病毒7群(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是2016年首次从美国猪群发现和鉴定的新的猪细小病毒。为弄清我国猪群中是否存在PPV-7,本文用PPV-7特异性的实时荧光定量PCR和常规PCR方法对采集的10份猪流产胎儿和10份保育仔猪病料分别进行检测,结果发现其中1份保育仔猪样品的常规PCR和实时荧光定量PCR检测结果均为阳性,常规PCR扩增出的246 bp特异性条带测序和分子遗传演化时发现,该序列与PPV-7参考毒株KU5637332和KY996757的同源性分别为99.6%和98.0%,表明该样品中含有PPV-7,进一步用PK-15细胞分离病毒,连续传代5次后PK-15细胞都没有出现典型的细胞病变,但其上清液用实时荧光定量PCR方法都可以检测到该病毒。本研究结果证实我国猪群中存在PPV-7的感染,且检测到的PPV-7毒株能在PK15细胞中增殖。     

副溶血弧菌SHJLA株的分离鉴定及致病性分析

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是海洋环境中常见的食源性致病茵。本研究从对虾中分离出1株细菌SHJLA,在TCBS和弧菌显色培养基上分别显示典型的蓝绿色和紫红色的菌落,且其生理生化特性具有典型副溶血弧菌的特性。以SHJLA菌株的基因组为模板。检测副溶血弧菌种特异性基因（tlh、toxR、groEL）均为阳性,gyrB基因序列分析表明SHJLA与副溶血弧茵的亲缘关系最近,同源性达98％～100％;检测副溶血弧菌主要毒力相关基因tdh和T3SS2（VopC2和vcrD2）均为阳性。该菌的神奈川溶血实验为阳性,对小鼠的半数致死量（LD50）为4．8×10^8 cfu／mL。结合SHJLA菌株的形态、生理生化、种特异性基因的检测、gyrB基因序列分析、毒力相关基因的检测以及小鼠半数致死量的测定结果,确定SHJLA是一株携带毒力基因的副溶血弧菌。     

鸡传染性喉气管炎病毒(江苏株)的分离与初步鉴定

本研究从江苏省某养鸡场采集临床疑似鸡传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis,ILT)的病鸡喉头气管,接种鸡胚绒毛尿囊膜分离病毒,命名为LJS091151。以分离毒人工感染SPF鸡,于攻毒后d3出现了ILT的典型临床症状,剖检亦可见喉头气管黏膜充血肿胀、消化道空虚、黏膜充血等病理变化。根据GenBank发表的鸡传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotracheitis virus,ILT)gB、TK基因保守序列设计2对引物对分离株基因组DNA进行扩增和序列测定。序列分析表明,获得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank发表的序列相似性均在99%以上,证明了分离株LJS091151为鸡传染性喉气管炎病毒。     

三株鸡传染性法氏囊病毒弱毒株的分离与分子鉴定

本试验在江苏省鸡场分离获得3株鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）,采用RT—PCR法扩增VP2基因,将产物克隆入pMD18T载体,经测序,并与IBDV代表株VP2基因的高变区序列进行分析比较。结果显示,3个分离株与超强毒株、强毒株、突变株及弱毒株的核苷酸同源性在89．5％～98．9％之间,与弱毒株Cu-1和疫苗株PBG-98同源性最高,为98．9％;推导出的氨基酸序列与代表性毒株的同源性在98．2％～99．5％之间。其中,七肽区的第三个丝氨酸残基突变为精氨酸或苏氨酸,279和284位氨基酸残基突变为天冬氨酸和苏氨酸,222、294和299位氨基酸残基分别突变为脯氨酸、亮氨酸和天冬氨酸。上述试验表明3株分离株均为临床弱毒株。     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原（EtSAG）基因的分离及鉴定

利用本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）孢子化卵囊和未孢子化卵囊差异表达ESTs序列,选取编号为BW4-C03的孢子化卵囊,采用RACE技术,获得该基因全长序列。经BLAST分析,该序列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有72%以上的同源性,命名为EtSAG。利用荧光定量PCR（Real-time PCR）检测发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高,且随着孢子化时间的延长,转录拷贝数逐渐增加。采用原核表达载体pET-28C表达该基因,得到的融合蛋白大小约为36 kDa,符合预期大小。经Western blot分析,该重组蛋白可被兔抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

利用微机进行兽医细菌鉴定的研究

用传统的方法进行细菌的鉴定分类,工作量大,而且完全靠人的记忆和查阅资料,大大影响了工作效率及鉴定的准确性。 本研究的基本设想在于将汉化微型计算机应用于兽医细菌鉴定。文章将与兽医有关的28属,4亚属中的119种细菌的68种特性搜集归纳后,输入微机,贮存于磁盘内,鉴定时计算机可根据要求自动进行比较。实验室中的具有一定文化程度的非计算机专业工作人员只须稍加训练既可使用本程序。如果输入数据足够,此程序的鉴定符合率达100％。