雷公藤甲素对哮喘小鼠白介素13和嗜酸性粒细胞趋化因子表达的影响

目的观察雷公藤甲素(TL)对哮喘小鼠肺组织中白介素13(IL-13)和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达的影响,探讨TL治疗哮喘的作用机理。方法40只雄性昆明小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘未治疗组、地塞米松治疗组及TL治疗组,以卵清蛋白致敏和激发方法建立哮喘小鼠动物模型并给予相应治疗。24 d后处死小鼠,检测各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及嗜酸性粒细胞(Eos)计数;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肺组织匀浆中IL-13、eotaxin mRNA的表达量;采用免疫组化法检测各组小鼠肺组织切片中IL-13、eotaxin蛋白的表达水平;并探讨他们之间的关系。结果哮喘未治疗组小鼠肺组织IL-13、eotaxin mRNA及蛋白的表达量均明显高于正常对照组(P<0.01),TL治疗组及地塞米松治疗组低于哮喘未治疗组(P<0.01或<0.05)。肺组织IL-13蛋白的表达与BALF中的白细胞总数、Eos计数及肺组织eotaxin蛋白的表达呈正相关(r分别为0.513、0.604、0.625,P<0.01)。肺组织eotaxin蛋白的表达与BALF中的白细胞总数、Eos计数呈正相关(r分别为0.679、0.718,P<0.01)。结论TL抑制哮喘气道炎症的机制可能与其抑制肺组织中IL-13及eotaxin的表达有关。     

哮喘患儿血清IL-12、IL-4和总IgE水平的变化、相关及临床意义

目的 :研究哮喘患儿白细胞介素 12 (IL 12 )、白细胞介素 4 (IL 4 )与总IgE水平的变化、相关及临床意义。方法 :哮喘患儿 30例分为 2组 :(1)发作期组 (n=15 ) ;(2 )缓解期组 (n =15 ) ;以及健康对照组 (n =2 0 )。分别用ELISA法和MEIA法检测血清IL 12、IL4和总IgE水平。结果 :哮喘患儿发作期组血清IL 12水平低于缓解期组 (P <0 .0 5 ) ,缓解期组又显著低于健康对照组 (P <0 .0 1) ;哮喘患儿发作期组血清IL 4水平高于缓解期组 (P <0 .0 5 ) ,缓解期组又显著高于健康对照组 (P <0 .0 1) ;哮喘患儿发作期组血清总IgE水平高于缓解期组 (P <0 .0 5 ) ,缓解期组又显著高于健康对照组 (P<0 .0 1)。哮喘患儿血清IL 12水平与总IgE呈中度负相关 ,哮喘患儿血清IL 4水平与总IgE呈高度正相关。结论 :哮喘患儿血清IL 12水平降低 ,IL 4和总IgE水平升高 ,表明儿童哮喘是一种慢性气道炎症 ,在缓解期仍需抗炎治疗。     

Recombinase-mediated gene activation and site-specific integration in mammalian cells

A binary system for gene activation and site-specific integration, based on the conditional recombination of transfected sequences mediated by the FLP recombinase from yeast, was implemented in mammalian cells. In several cell lines, FLP rapidly and precisely recombined copies of its specific target sequence to activate an otherwise silent beta-galactosidase reporter gene. Clones of marked cells were generated by excisional recombination within a chromosomally integrated copy of the silent reporter. By the reverse reaction, integration of transfected DNA was targeted to a specific chromosomal site. The results suggest that FLP could be used to mosaically activate or inactivate transgenes for analysis of vertebrate development, and to efficiently integrate transfected DNA at predetermined chromosomal locations.     

Indirect observation by 13C NMR spectroscopy of a novel CO2 fixation pathway in methanogens

High-field carbon-13 nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy has been used to monitor the isotopic dilution of doubly carbon-13-labeled precursors for 2,3-cyclopyrophosphoglycerate, a novel primary metabolite that occurs in certain methanogens. A unique carbon dioxide fixation pathway that gives rise to asymmetric labeling of acetyl coenzyme A has been demonstrated in Methanobacterium thermoautotrophicum. The effect of selected metabolic inhibitors on the labeled species in the pathway has been examined by NMR. These techniques establish a general, sensitive method for the delineation of convergent biosynthetic pathways.     

急性化脓性扁桃体炎证候层次与Th1/Th2漂移相关性研究

目的研究急性化脓性扁桃体炎患者不同证候层次外周血Th1/Th2漂移变化。方法通过流式细胞检测技术,对急性化脓性扁桃体炎患者卫分证、气分证、营分证和正常人外周血Th1/Th2细胞进行检测,采用ELISA法测定血清细胞因子IL-4和IFN-γ水平,并比较IFN-γ/IL-4比值。结果与正常对照组比较,急性化脓性扁桃体炎卫分证组Th1、IFN-γ、Th1/Th2、IFN-γ/IL-4比值显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);气分证组Th1、Th2、IFN-γ、IL-4明显升高,差异有统计学意义(P<0.05~0.01);营分证组Th1、Th2、IFN-γ、IL-4继续明显升高,Th1/Th2比值却明显降低,差异有统计学意义(P<0.05~0.01)。与卫分证组比较,气分证组Th1、Th2、IFN-γ、IL-4显著升高,Th1/Th2、IFN-γ/IL-4比值明显降低,差异有统计学意义(P<0.05~0.01);营分证组Th2、IL-4继续明显升高,Th1/Th2、IFN-γ/IL-4比值明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与气分证组比较,营分证组Th1、IFN-γ水平、Th1/Th2、IFN-γ/IL-4比值显著降低,Th2、IL-4显著升高,差异有统计学意义(P<0.05~0.01)。结论急性化脓性扁桃体炎卫分证、气分证、营分证证候层次变化与Th1/Th2漂移存在相关性。     

大豆叶片内几丁质酶活性的变化与大豆抗灰斑病关系的研究

实验采用 5个生理小种的大豆灰斑病菌接种抗性不同的 6个大豆品种 ,并设置相应的对照 ,分别测定了接种不同时间的大豆叶片中几丁质酶的活性。结果表明 ,正常生长情况下 ,不同大豆品种中的几丁质酶活性无明显区别 ;大豆灰斑病菌可诱导大豆几丁质酶 ,特别是内切酶的产生 ,而外切酶产生的量少或对其诱导的效果不明显 ;但抗性不同的大豆品种的抗病性与几丁质内切酶和外切酶的活性均呈正相关关系。接种灰斑病菌的不同生理小种的大豆叶片中几丁质酶活性具有相似的变化规律。     

乙型肝炎患者血清IL-2、IL-12和IL-18水平的检测及临床意义

目的：探讨血清IL-2，IL-12、IL-8水平与乙型肝炎病变的关系。方法：运用ELISA法检测不同类型乙型肝炎患者血清IL-2、IL-12、IL-18的水平，观察患者细胞因子水平与肝炎发展的关系。结果：慢性及重型肝炎患者血清IL-2水平出现显著性下调（P〈0．01），而急性、慢性及重型肝炎患者的IL-12、IL-18的水平均显著高于正常对照组（P〈0．01），升高程度与病情相关。结论：血中细胞因子水平是判断乙肝患者免疫状态及进行治疗的重要指标。     

朱砂叶螨几丁质酶TecCht2基因的克隆及特征分析

【目的】拟克隆朱砂叶螨几丁质代谢中的关键基因几丁质酶基因,并对其进行特征分析。【方法】利用转录组拼接技术对朱砂叶螨转录组进行拼接,根据叶螨几丁质酶序列通过BLAST找到朱砂叶螨几丁质酶相似序列,设计PCR引物,进行朱砂叶螨几丁质酶基因克隆,分析其详细特征。利用SWISS MODEL预测其蛋白结构,特别是催化功能区的结构。【结果】测序分析确认为朱砂叶螨几丁质酶基因序列,并提交到GeneBank(KY705296),其开放阅读框为1 875bp,编码624个氨基酸,C端有几丁质结合区。根据新的几丁质酶分类,判定TecCht2为Ⅵ型几丁质酶,其结构具有典型的几丁质酶结构特征。【结论】本研究克隆得到的朱砂叶螨几丁质酶基因,为今后几丁质酶功能和用于害螨防治研究奠定基础。     

Trans-activator gene of HTLV-II induces IL-2 receptor and IL-2 cellular gene expression

The human T-lymphotropic viruses types I and II (HTLV-I and -II) have been etiologically linked with certain T-cell leukemias and lymphomas that characteristically display membrane receptors for interleukin-2. The relation of these viruses to this growth factor receptor has remained unexplained. It is demonstrated here that introduction of the trans-activator (tat) gene of HTLV-II into the Jurkat T-lymphoid cell line results in the induction of both interleukin-2 receptor and interleukin-2 gene expression. The coexpression of these cellular genes may play a role in the altering T-cell growth following retroviral infection.     

泛发性皮肤瘙痒症患者Th1/Th2 细胞因子平衡状态的初探

采用ELISA的方法检测35例泛发性皮肤瘙痒症患者的外周血单核细胞 (PBMC) 在体外经PHA诱导后T辅助细胞不同功能亚群细胞因子IL-4、IL-6及IFN-γ的分泌,同时以20例正常人的PBMC作对照. 结果表明: 泛发性皮肤瘙痒症患者PBMC中T辅助-2型 (Th2) 的细胞因子IL-4的产生明显高于正常对照(P<0.05), 而T辅助-1型 (Th1) 的细胞因子IFN-γ的产生明显低于正常对照(P<0.05),细胞因子IL-6的产生在泛发性皮肤瘙痒症患者PBMC与正常对照的PBMC中无明显差异 (P>0.05).同时,患者的瘙痒程度评分分数与其IL-4的产生呈正相关,而与其γ-IFN的产生呈负相关(P值均<0.05).     

支气管哮喘患者外周血单核细胞Th1/Th2型细胞因子水平的检测及其临床意义

目的 :观察支气管哮喘患者在发病期外周血中的Th 1/Th 2型细胞因子水平的变化。方法 :采用双抗体夹心ELISA方法分别对哮喘患者发作期组 (n =15 )、缓解期组 (n =15 )及正常人对照组 (n =2 0 )外周血单核细胞 (PBMC)产生的Th 1/Th 2型细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 10 )进行了测定。结果 :哮喘急性发作期患者PBMC产生的IL 2水平较正常对照组明显下降 (P <0 .0 5 ) ,而IL 4、IL 10水平均增高 (P <0 .0 5 ) ,缓解期恢复至正常水平。结论 :哮喘发病过程中Th 1/Th 2型细胞因子处于失衡状态 ,为哮喘的治疗提供指引     

丙型肝炎感染者IL-2、IL-6、IL-18血清水平的研究

目的:探讨血清IL-2、IL-6、IL-18水平与丙型肝炎病变的关系。方法:运用EL ISA法检测不同类型丙型肝炎感染者血清3种细胞因子IL-2、IL-6、IL-18的水平,观察感染者细胞因子水平与肝炎发展的关系。结果:慢性及重症肝炎感染者血清IL-2水平出现显著性下调(P<0.05),而慢性及重症肝炎感染者的IL-6、IL-18的水平均显著高于正常对照组(P<0.05或P<0.01),升高程度与病情相关。结论:血中细胞因子水平是判断丙肝感染者免疫状态及进行治疗的重要指标。     

应用Intein融合的鸡IL-2蛋白制备多克隆抗体

研究Intein标签与目的蛋白chIL-2融合作为抗原,进行高效价兔抗chIL-2蛋白多克隆抗体的制备,将去除去了N-端信号肽的chIL-2基因(366 bp)克隆连接到p TYB1原核表达载体,将chIL-2基因与1 362 bp的Intein基因融合在同1开放阅读框内,编码分子量约为71 ku的chIL-2-Intein融合蛋白。诱导表达chIL-2-Intein融合蛋白,应用Chitin-Sepharose亲和层析进行融合蛋白纯化。用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白免疫大白兔制备多克隆抗体。应用昆虫细胞表达系统纯化出的chIL-2-6His蛋白作为抗原,包被ELISA板用于抗体效价的检测,Western Blot分析抗体特异性。结果表明:应用纯化的chIL-2-Intein融合蛋白成功制备特异性chIL-2抗体,效价高达4 096 000,且该抗体也能用于Intein标签蛋白的检测。     

PCV2对仔猪胸腺IL-2、IL-6和IL-10及其受体mRNA的影响及NO-NOS系统的调控

为了解猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirusⅡ,PCV2)引起仔猪免疫抑制的机制,研究了胸腺中抗感染免疫相关基因的动态表达变化及其调控机制.选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分别在感染后0、14、21和35 d扑杀采集胸腺.用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,用比色法检测总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,用TQ-PCR方法检测胸腺中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA的表达变化.结果显示:感染猪胸腺中TNOS和iNOS的活性在试验期间均显著高于对照猪(P＜0.05),NO含量在感染后14 d极显著升高(P＜0.01),IL-2和IL-6 mRNA的表达在感染后各时间点均低于对照猪,尤其在感染后21 d均极显著降低(P＜0.01);IL-10 mRNA的表达在感染后14 d极显著升高(P＜0.01);IL-6和IL-10与各自受体mRNA的表达变化均呈显著负相关(P＜0.05),NO与iNOS mRNA呈显著正相关(P＜0.05).研究表明:胸腺在感染早期表现出较强且适度的抗PCV2感染的免疫应答,感染中期呈现一定的免疫抑制,感染后期有所恢复;胸腺中细胞因子及其受体与NO-NOS系统的相互调节表现出复杂性与多层次性.     

运输应激对猪脾脏IL-2、IL-6和IL-10 mRNAs表达的影响及其调控机制

【目的】探讨不同时间运输应激对猪脾脏中IL-2mRNA、IL-6mRNA、IL-10mRNA及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA表达的影响,并探讨P38MAPK-NF-κB信号途径对其表达的调控作用。【方法】将19头体重50kg左右的猪随机分为4组,分别进行0、1、2和4h公路运输,运输结束后立即扑杀取脾脏,液氮保存,用荧光定量PCR的方法对3种细胞因子及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA进行定量;另用ELISA方法检测试验猪脾脏组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化;激光扫描共聚焦显微镜观察NF-κB运输前后在脾脏细胞中的分布。【结果】经1、2和4h的运输应激后,脾脏中IL-10、IL-6及IL-6RmRNA的表达发生了显著的变化,P38MAPK变化不明显,NF-κB在脾脏中的表达是先上升,随后稍微下降,到4h时又升高并高于其它3个组;且NF-κB的入核率也呈现同样的变化趋势。【结论】运输应激可引起猪脾脏IL-6mRNA、IL-10mRNA和IL-6RmRNA表达的显著变化,且存在时效性;相关性分析表明,在所检测的3种细胞因子中,脾脏主要对运输过程中IL-6水平起重要的调节作用,结合细胞因子表达调控的信号机制表明,NF-κB可能对运输过程中猪脾脏相关细胞因子变化起重要的调控作用。     

HIV/AIDS患者外周血中4种细胞因子IL-2、IL-4、IL-15和IL-21表达水平及其临床意义研究

目的 观察外周血 4 种细胞因子（IL-2、IL-4、IL-15及IL-21）在HIV感染者/AIDS患者（HIV/AIDS）和正常人表达水平的区别及其与HIV RNA病毒载量和CD3⁺、CD4⁺细胞数量的相关性,分析其与HIV感染的关系和临床意义。方法 40例未经抗病毒治疗的HIV/AIDS 和31名正常人,采用ELISA法检测外周血4种细胞因子（IL-2、IL-4、IL-15及IL-21）,使用流式细胞计数法检测外周血CD3⁺、CD4⁺ T 淋巴细胞数量,实时聚合酶链反应测定血清中HIV RNA水平。结果 未经抗病毒治疗的HIV/AIDS外周血IL-2、IL-15及IL-21水平低于正常人,而IL-4水平高于正常人（P<0.05）。CD3⁺、CD4⁺细胞数量和各细胞因子水平显示出一定的相关关系,IL-2和IL-15水平均与HIV-1 RNA载量呈负相关。结论 提示外周血4种细胞因子都可能参与了HIV感染的致病机制,并与HIV RNA病毒载量及CD3⁺、CD4⁺细胞数量相关。     

Influence of Radix scutellariae on Th1/Th2 cytokine balance in RU486-induced abortion in mice

The aim of this study is to investigate the significance of Th1/Th2 cytokine balance in the uterus in the early embryo loss (or resorption), and to elucidate immunological modulation at the maternal-fetal interface with Chinese herbal medicine Radix scutellariae (Huang Qin) and its constituents (Baicalin and Baicalein). Mifepristone (RU486) was given via subcutaneous injection in the scapular area to induce abortion in mice at day 7 of gestation. The levels of uterine Th1 cytokines (IFN-γ, IL-2) and Th2 cytokines (IL-4, IL-10) were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively. The mean values of Th1 cytokines in the uterus of RU486-treated abortion mice were significantly higher (P < 0.05) than that of the control mice, but no significant difference was observed regarding to the contents of Th2 cytokines of different groups (P > 0.05). However, when the Radix scutellariae and its constituents were used to prevent RU486-induced abortion, the levels of IFN-γ and IL-2 decreased while that of IL-4 and IL-10 increased. The embryo loss induced by RU486 was closely related to the Th1/Th2 immune balance at the maternal-fetal interface. Radix scutellariae and its constituents have an anti-abortive effect through restoring the Th1/Th2 balance at the maternal-fetal interface.