栽培条件优化对蛹虫草及其菌丝体生长的影响

为了确定人工栽培蛹虫草最适宜的环境条件,我们开展了不同环境对蛹虫草菌丝体生长影响试验。试验结果表明,制作液体菌种时以刚长满试管的母种最佳,液体培养基最适p H值为7.0,蛹虫草菌丝生长最适温度为15~25℃,子实体原基分化和发育的最适宜温度为17~23℃,子实体生长最适宜湿度为70%~75%,蛹虫草转色和子实体生长最适宜光照强度为700~1100Lx,每d所需补光12h,蛹虫草栽培最适宜通风量为早晚各1次,每次30min。     

虫体复壮蛹虫草菌种的研究

活体柞蚕蛹接种蛹虫草菌,适宜条件下培养,虫体僵硬后进行出草管理。分别选取僵蛹期(S1)、子实体初期(子实体1 cm,S2)、子实体早期(1 cm子实体3 cm,S3)、子实体中期(子实体≈5 cm,S4)、子实体成熟期(子实体7 cm,S5)5个蛹虫草不同生长发育时期的样品进行组织分离,研究虫体培育蛹虫草不同生长期对母种质量的影响。结果表明,经虫体复壮后获得的子实体早期(S3)分离得到的母种菌丝体生长整齐浓密,日均生长速度达到3.75 mm·d-1,继代培养子实体生长性状优良,为最适合的母种组织分离时期。     

蛹虫草优良菌株的筛选

本试验通过对8株蛹虫草菌株的菌丝生长速度、菌落平均直径、液体发酵菌丝体干重、培养周期以及子实体形态、重量、粗多糖含量的对比研究,筛选出优良的蛹虫草菌株。试验结果表明,蛹虫草菌株CC-8液体培养菌丝生物量明显高于其他菌株,子实体出草整齐均匀,出草率高,形态好,产量高,颜色为橘黄,子实体粗多糖含量高于其他菌株,表明菌株CC-8具有较高的经济价值,可以作为栽培菌种进行产业化生产。     

不同碳氮源培养蛹虫草液体菌种及栽培试验

以葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖为供试碳源,各碳源浓度均设为10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L;以硫酸铵、蛋白胨、酵母粉、尿素为供试氮源,各氮源浓度均设为6g/L、8g/L、10g/L、12g/L、14g/L。分别制作液体菌种培养基培养蛹虫草液体菌种,并将获得的液体菌种用于栽培蛹虫草试验。测定蛹虫草液体培养菌丝生物量、子实体鲜重及子实体多糖含量。结果表明:在液体菌种培养阶段,最佳碳源为25~30g/L的蔗糖,最佳氮源为6g/L酵母粉;以20g/L蔗糖作为碳源,10g/L硫酸铵为氮源培养液体菌种栽培蛹虫草产量最高;以10g/L葡萄糖为碳源,12g/L蛋白胨为氮源培养基上培养的液体菌种栽培蛹虫草子实体多糖含量较高。     

不同基质栽培蛹虫草营养成分与酶活的相关性分析

以小麦、大米和柞蚕蛹为培养基质的子实体为试材,对比其多糖和蛋白质含量,并测定漆酶、纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、滤纸酶、多酚氧化酶活性,以此分析各胞内酶活性与多糖和蛋白质含量的相关性,以期为获得高蛋白和高多糖的蛹虫草子实体栽培提供参考依据.结果 表明:以柞蚕蛹为栽培基质的蛹虫草中的多糖和蛋白质含量最高.利用双重检验分析发现蛹虫草子实体中多糖的累积与纤维素酶活性呈极显著正相关,与蛋白酶活性呈显著负相关.蛹虫草子实体中蛋白质的累积与淀粉酶活性呈极显著正相关,与多酚氧化酶活性呈极显著负相关.     

松杉灵芝优良菌株筛选试验

供试松杉灵芝(Ganoderma tsugae)菌株6个,通过观察在母种培养基、栽培种培养基上的菌丝生长状况及产量试验,筛选出松杉灵芝优良菌株2个,分别为菌株4和菌株5,菌株4采自穆棱林业局人工栽培子实体,菌株5采自绥阳林业局人工栽培子实体。2个菌株在母种培养基和栽培种培养基上菌丝均生长均匀、浓密、生长势强、抗逆性强、生长速度快,原基形成至子实体成熟时间短,产量高,菌盖红褐色,扇形。     

共培养及搔菌对虫草子实体产量的影响

探讨虫草属(Cordyceps s.l.)不同种类共培养及搔菌处理对子实体产量的影响。结果表明:只与一种虫草菌共培养时,蛹虫草(C.militaris)子实体产量不受影响;连州虫草(C.lianzhouensis)子实体产量受到古尼虫草(C.gunnii)的促进、受蛹虫草的抑制。刮去一半菌丝,蛹虫草子实体产量比不处理时提高45.6%,差异极显著。     

蜜环菌不同特化菌体的HPLC-DAD图谱比较

采用麦芽汁液体培养基培养蜜环菌获得菌丝体，采用麦芽汁半固体培养基培养蜜环菌获得蜜环菌菌素、皮壳状菌丝和子实体。以高效液相色谱-二极管阵列检测法（High Performance Liquid Chromatography-Diode Array detector，HPLC—DAD）比较四种菌体的甲醇提取物的成分差异。液体培养的蜜环菌菌丝体与固体培养的蜜环菌菌素、皮壳状菌丝和子实体的蜜环菌素类成分有明显差别。图谱分析表明，菌素与皮壳状菌丝的成分接近，与子实体和液体培养菌丝体之间有较大差别。     

蛹虫草产量及主要活性物质的影响因素研究

以提高蛹虫草子实体产量、活性物质含量为研究目的。以小麦为基本培养基固体培养蛹虫草子实体,采用单因素、二因素试验研究碳源、氮源和菌种对蛹虫草实体产量、活性物质含量的影响。产量单因素实验结果表明,每瓶添加1 g蚕蛹粉、营养液中白砂糖浓度为20 g·L~(-1)的培养基培养子实体产量最高;但不同水平的蚕蛹粉、黄豆粉对子实体产量影响差异不显著。二因素实验结果表明,当培养基营养液中白砂糖浓度为20 g·L~(-1),蚕蛹粉添加量为2 g·瓶~(-1)时,子实体产量最高;碳源、氮源及碳源和氮源的互作对蛹虫草的产量有极显著的影响。活性物质单因素实验结果表明,培养基营养液中蔗糖浓度为10 g·L~(-1)时腺苷和虫草素含量最高;每瓶培养基中添加1 g土豆粉时,子实体多糖含量最高,与其他营养添加物质有显著差异;不同菌种对产量和主要活性物质含量的影响差异显著。     

1株分离自蛹虫草小麦培养基的粘质沙雷氏菌的鉴定及初步研究

从蛹虫草小麦培养基中筛选出1株产红色素的菌株,划线分离、纯化后命名为CD1,对其进行了16S rDNA ITS序列分析。同时将其接种于正常的蛹虫草小麦培养基上,接种后在蛹虫草子实体生长早期、中期、后期分别进行子实体湿质量、干质量、几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性等生理生化指标测定,结果表明该菌为粘质沙雷氏菌,接种小麦培养基后可以显著提高蛹虫草子实体产量。     

蓖麻蚕蛹虫草的培育及其虫草素腺苷分析

利用蓖麻蚕蛹人工接种蛹虫草菌种,在适宜条件下,可长出子实体,子实体丛生,经过30～40d,子实体成熟,测定虫草素与腺苷含量分别为640mg/kg,146.5mg/kg。     

不同栽培基质蛹虫草的主要有效成分含量比较

选用大米和桑蚕蛹基质栽培蛹虫草,比较子实体生长情况并分别测定子实体和基质部分的虫草素、腺苷及多糖含量。结果表明,桑蚕蛹基质蛹虫草子实体色泽金黄、密度大,生物转化率高,达95.72%,其子实体虫草素、腺苷和多糖含量分别为223.41 mg/100 g、294.78 mg/100 g和254.91 mg/100 g;大米基质蛹虫草子实体呈浅黄色、分散,生物转化率为22.78%,其子实体虫草素、腺苷和多糖含量分别为246.73 mg/100 g、118.43 mg/100g和999.55 mg/100 g;栽培后桑蚕蛹基质的虫草多糖、虫草素和腺苷含量分别为3 785.27 mg/100 g、446.19 mg/100g和120.52 mg/100 g;栽培后大米基质的多糖含量高达8 852.23 mg/kg,虫草素、腺苷含量低。建议对基质中的高含量有效成分进行针对性开发利用。     

蛹虫草有性生殖研究

从2种人工栽培的蛹虫草子实体上分离子囊单孢子,将单孢子单独培养和两两配对培养来诱导产生子实体,以研究蛹虫草有性生殖机理。结果表明:蛹虫草有性生殖方式存在多样化,除了具有典型的二极异宗配合外,还存在可孕单孢子。将单孢子对峙培养结果发现在两单孢子间有扇形杂交区的配对培养产生子实体的能力强,没有扇形杂交区的两单孢子配对培养产生子实体的能力弱。     

柞蚕蛹虫草不同部位多糖含量的测定

采用苯酚-硫酸法测定柞蚕蛹虫草不同部位多糖含量,结果表明柞蚕蛹虫草多糖百分含量子实体部分高于蛹体,子实体多糖含量是蛹体的3.27倍。     

北冬虫夏草的人工栽培条件及其子实体成分分析

采用大米合成培养基培养北冬虫夏草,获得了较高的产量及与野生北冬虫夏草形态一致的子实体,每50g培养基产鲜虫草子实体约25g。分析栽培虫草子实体的化学成分表明,北冬虫夏草在许多成分上与冬虫夏草相似,某些药用成分更优于冬虫夏草。     

凤尾菇管内子实体成因分析

在凤尾菇组织分离及母种继代扩大培养中,经常出现菌丝纽结,甚至在接种点处产生子实幼体(具菌盖、柄)的现象,致使菌丝活力下降,影响菌种质量,仅十来天菌龄的母种成批报废。究竟管内子实体形成的主导因素是什么?我们作了以下试验。供试菌种系1981年初从广东微生物所引进的凤尾菇(Ple urotus sajor-caju P_(10))组培材料。采用PDA改良培养基,分装于20×200mm试管中,常规     

低温刺激对蛹虫草子实体产量及品质的影响

目的:研究温差刺激对蛹虫草子实体干重、虫草素和腺苷含量的影响.方法:以蛹虫草同一子实体头部和中部组织分离的异核体菌株CMS1和CMZ1为材料,采用小麦固体栽培基质室内培育子实体,在原基形成阶段进行温差刺激,培养45 d后,测定子实体数及干重、虫草素和腺苷质量分数.结果:低温10℃处理,CMS1菌株处理6 h/d时,子实...     

柞蚕蛹虫草高产栽培技术的研究

对人工栽培柞蚕蛹虫草高产条件进行研究,结果显示：采用孢子分离技术选育菌种保证了虫草高产;接种不同状态的菌种时,液体菌种效果好,硬化率高,从而产量也高;接种剂量在0．3-0．5mL时蛹体完全变僵蛹时间明显短,产量也高,接种剂量小于0．2mL时,僵蛹时间长,容易感染杂菌,头部基本坏掉,影响了产量;菌丝生长期25℃恒温培养,蛹体完全变硬时改20℃恒温培养,蛹体硬化快,子实体分布均匀,长势好,产量较高。     

TTC法细胞酶活力测试技术在北虫草选育种中应用

TTC法，即组织细胞产生的脱氢酶活力与细胞活力成正比，用紫外分光光度计可测定细胞组织脱氢酶含量。我们经过近两年对北虫草的反复测定试验，发现北虫草液体菌种脱氧酶含量高时，其子实体的产量亦高。即北虫草液体菌种菌龄在7d脱氢酶含量最高，菌丝转色快，子实体形成早且粗壮，子实体的产量高。     

不同培养基对蛹虫草酯酶同工酶的影响试验

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对不同培养基中生长的同一品种的蛹虫草的子实体和菌丝体酯酶同工酶的研究,发现同一品种在不同培养基中培养,其子实体的酯酶同工酶酶带也基本相同,其菌丝体的酯酶同工酶也基本相同。但其菌丝体和子实体的酶带略有不同,因此用酯酶同工酶做蛹虫草菌种鉴定是可行的,但应注意使用相同的材料菌丝体或者子实体。