磺胺二甲基嘧啶残留快速检测试剂条的研究

磺胺类药物残留的检测通常采用酶联免疫吸附法（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）及气质联用法（GC—MS）等，但这些方法有操作时间长、费用高、操作技能强等缺点，不易推广。随着人们对食品安全的日益重视和食品进出口贸易的高速增长，迫切需要一种能快速检测农、兽药残留的方法。近年来，胶体金检测技术已广泛应用于小分子物质的检测，本试验采用此技术研制了一种快速检测牛奶中磺胺二甲基嘧啶残留的胶体金试剂条，具有灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低廉等优点，市场推广应用前景广阔。     

尿样中莱克多巴胺残留ELISA检测试剂盒的比对实验

酶联免疫吸附技术（ELIsA）由于其快速、简便、适合同时处理大量样品的特点，被国内外普遍应用于进行口一兴奋剂等各种兽药残留的筛选检测。国内目前销售的菜克多巴胺残留ELISA试剂盒主要有4种，据悉新的试剂盒还将推出。但国内外尚缺乏对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒的检测性能的权威评估。由于不同试剂盒的检测效果可能存在差异，检测试剂不统一，可能导致检测结果差异较大，将不利于政府残留监控计划的实施和企业维护自身权益。本研究拟通过比对检测试验，对不同莱克多巴胺ELISA试剂盒进行评估和比对，为制定合理的莱克多巴胺残留检测技术方案和准确评判检测结果提供科学依据。     

ELISA检测鸡肉中磺胺喹恶啉的残留

本研究采用间接竞争ELISA方法,对吉林某肉鸡鸡场的23个样品进行了磺胺喹恶啉（SQX）的残留检测。检测结果表明该场23个样品的磺胺喹恶啉（SQX）残留量在国家许可的范围内,未超标。     

氯霉素残留ELISA检测方法

2002年农业部第235号公告《动物源性食品中兽药最高残留限量》中明确规定氯霉素禁止使用,在动物性食品中不得检出。所以建立检测动物源性食品中痕量氯霉素残留的分析方法具有重要的意义。目前常用于氯霉素残留的检测方法有微生物法、免疫分析方法、色谱法等,比较常用的是酶联免疫法和色谱法。酶联免役法（EUSA）因其具有操作简便、快速等优点,成为畜产品中农药残留、毒素、农药、微生物检测中最重要的检测技术之一。本文旨在建立畜产品中氯霉素残留的快速检测方法,并为进一步研制开发氯霉素残留检测试剂盒奠定基础。     

磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit).研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月.     

建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法

本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体,通过优化反应条件,加标回收试验,确定ELISA检测方法相关参数,建立了己烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示,包被抗原最佳浓度为2μg/mL,DES单克隆抗体最佳稀释倍数为1∶3×104;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9956,IC50=1.103 ng/mL,最适检测范围为0.125~128 ng/mL,检测敏感度为0.077 ng/g;批内和批间变异分别为6.14%和7.48%;鳝鱼肌肉组织的加标回收率为77.6%~94.6%;特异性试验结果表明,该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112.7%,与其它水产禁用药物交叉反应率0.1%。     

鸡组织中常山酮残留的ELISA与HPLC检测方法的比较

常山酮(Halofuginone,Hal)是一种广谱抗球虫药物,在中国Hal已成为应用广泛的抗球虫药物之一。由于Hal毒性大,其在动物组织中的残留越来越受到关注。为了保证食品安全,有必要对动物组织中的Hal残留进行监控。目前,国外已有很多关于Hal检测方法的报道,大多数是高效液相色谱法[5～     

牛组织中阿维菌素残留的ELISA研究

本文探讨了检测牛组织（血浆、肌肉和肝）中阿维菌素（ＡＶＭ）残留的间接竞争ＥＬＩＳＡ反应条件和样本前处理方法，并对添加样本进行了测定。竞争反应可耐受２０％（ｖ／ｖ）的甲醇。使用４″－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ和５－Ｏ－（单）琥珀酰ＡＶＭ－ＯＶＡ作包被原，ＡＶＭ标准液的Ｉ５０＝１．８￣４．０ｎｇ／ｍＬ，检测极限为０．０２￣０．２ｎｇ／ｍＬ。样本经甲醇一次提取和稀释后直接进行检测，各样本介质中ＡＶＭ     

ELISA测定乳中磺胺甲基嘧啶残留

以牛血清白蛋白（ＢＳＡ）为载体,合成２种不同的物质的量的比值（约１∶１３和１∶４２）的磺胺甲基嘧啶抗原,并比较了两者的免疫原性;以卵白蛋白（ＯＡ）为载体,合成１种包被抗原;用辣根过氧化物酶标记羊抗兔ＩｇＧ,工作浓度１∶１０００;建立的乳中磺胺甲基嘧啶残留ＥＬＩＳＡ测定法,抗原亲和常数分别为１．２８×１０７（１∶４２）和３．２１×１０７（１∶１３）,磺胺甲基嘧啶检测质量浓度为５～２２０μｇ／Ｌ（１．８７×１０－８～８．２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）,检测限为２．４μｇ／Ｌ,回收率为８８％～１１８％,与磺胺二甲基嘧啶和磺胺噻唑交叉率分别为６．０％和０．８４％,与磺胺二甲氧嘧啶和磺胺脒无交叉反应     

酶联免疫法测定鸡肝中氯霉素残留

运用酶联免疫检测试剂盒测定鸡肝中氯霉素的残留量.氯霉素标准液浓度在 0.025～2 μg/mL范围内线性良好,r=0.995 1,鸡肝中最低检测限为0.10 μg/kg.空白添加阳性样品浓度为0.1、0.5和1.0 μg/kg时,回收率分别为86.9%、89.1%和80.0%,板内变异系数<14.6%,板间变异系数<12.0%;本方法操作简单快捷、灵敏准确、方便实用,可作为鸡肝中氯霉素残留检测的快速筛选方法.     

检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6分泌蛋白双抗体夹心ELISA的建立

用重组蛋白CFP10-ESAT-6免疫新西兰大白兔,通过ELISA方法检测抗体效价水平;高效价抗体用DEAE-32阴离子交换柱纯化后,一部分抗体为包被所用,另一部分抗体用辣根过氧化物酶标记后,作为检测用.建立双抗体夹心法,进行了初步鉴定,确定该方法的可行性.结果表明:抗CFP10-ESAT-6多克隆抗体的效价在1:16 000稀释后D150值基本都达到1.0左右,在纯化、酶标记后,分别以1 : 5 000为包被工作浓度,1:3 000为酶标工作浓度时,能较高特异性检测结核杆菌培养上清分泌的CFP10-ESAT-6抗原.     

酶联免疫法测定猪肉中磺胺类药物的残留

利用酶联免疫法对猪肉中的磺胺类药物残留进行检测,结果表明:该方法的灵敏度为1μg/L,最低检测限为1.5μg/kg;向空白样本中添加浓度为100、200μg/kg磺胺标准品时,平均回收率范围为76.1%～101.7%,变异系数为4.6%～11.9%;利用该方法与液相色谱-串联质谱法检测实际样本,其阴、阳性判断结果一致。该法灵敏准确、重复性好、特异性高,适用于对猪肉中15种磺胺类药物进行多残留检测。     

两种不同ELISA法在检测猪繁殖与呼吸综合征抗体中的选择与应用

猪繁殖与呼吸综合征（简称猪蓝耳病）是引起母猪繁殖障碍和仔猪、育成猪呼吸道症状的一种高度接触性传染病。本文比较了两种常用的检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的ELISA方法,确定IDEXX猪蓝耳病抗体ELISA检测试剂盒适合蓝耳病感染抗体的检测和早期诊断;LSI猪蓝耳病抗体ELISA检测试剂盒适合蓝耳病免疫抗体的监测。两种ELISA方法在应用范围和诊断意义方面完全不同,因此在日常监测中,应根据监测目的合理选择猪蓝耳病抗体检测试剂盒。     

猪瘟抗体间接ELISA检测方法的建立和优化

采用真核系统表达纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被物,通过对各个反应条件的摸索和优化,建立了检测猪瘟病毒抗体的猪瘟抗体间接ELISA检测方法。研究结果表明,E2蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/mL,最佳包被条件为4℃16h;待检血清的最佳稀释倍数为100倍;特异性检测试验证明,该方法与猪常见病原的阳性血清没有交叉反应。通过对大量猪瘟抗体阴、阳性血清的检测,最终确定了本检测方法的判定标准。     

检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立

利用CsCI密度梯度离心化的牛轮状病毒作为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(EuSA).用牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌制备的对照包被抗原与牛轮状病毒阴性和阳性血清反应,其结果均无交叉反应,说明该方法具有良好的特异性,可用于牛轮状病毒抗体的检测.     

J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立

本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL-2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法.     

新孢子虫和弓形虫ELISA及western blot检测方法的建立及应用

为建立牛新孢子虫和弓形虫的免疫学检测方法,并调查新疆部分地区牛新孢子虫和弓形虫的感染情况,本研究应用纯化的新孢子虫重组蛋白SRS2(NcSRS2)和弓形虫重组蛋白SAG2(TgSAG2)作为包被抗原,分别建立新孢子虫和弓形虫的ELISA和western blot血清学检测方法,并进行特异性和重复性试验,以其检测662份疑似样品,并与商品化试剂盒检测结果比较验证。特异性和重复性试验结果表明,建立的方法特异性强、重复性良好。采用建立的两种ELISA方法对662份临床样品的检测结果表明,新孢子虫和弓形虫的抗体阳性率分别为13.44%(89/662)和5.29%(35/662);与IDEXX试剂盒和永辉试剂盒的符合率分别为94.11%和95.92%。此外,western blot检测的新孢子虫和弓形虫抗体阳性率分别为5.14%(34/662)和3.17%(21/662);与建立的ELISA检测方法的符合率分别为91.69%和97.89%。本研究为分析奶牛流产的原因提供了一定的依据。     

检测伪狂犬病病毒双抗体夹心间接ELISA方法的建立与应用

以猪伪狂犬病病毒（PrV）Ea株特异性单克隆抗体576株为捕获抗体，纯化的抗PrV IgG为检测抗体，建立了检测PrV抗原的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为，单克隆抗体576株的包被浓度为12．2μg／mL，IgG的工作浓度为16．0μg／mL，对PrV的检测灵敏度达15．6ng（0．156μg／mL），与乙型脑炎病毒（JEV）、猪瘟病毒（HCV）、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）和猪流感病毒（SIV）等无交叉反应。批间和批内变异系数较小，分别为6．39％和4．1％。应用本方法对人工感染PrV的40日龄仔猪组织进行检测，肺和脑PrV抗原检出率最高，其次是脾、心、肝和肌肉。应用该方法和PrV对159份临床样本进行平行检测，发现二者的符合率可达到77．4％，比PCR敏感。实验结果表明：双抗体夹心间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点，可广泛应用于动物组织中PrV的检测。     

磺胺二甲嘧啶快速直接竞争ELISA试剂盒的研制及应用

在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶(SMZ)残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒,并与高效液相色谱(HPLC)分析方法比较和验证.将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中,用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定.研究结果表明,磺胺二甲嘧啶浓度在0.5～50 ng·mL-1,方法的检测灵敏度IC10 =0.47 ng·mL-1,板内平均变异系数为7.4％,板间平均变异系数为9.27％.猪肝、猪肉与鸡肉组织样品中SMZ最低检测限分别为3.91、4.81与1.59 μg·kg1.在添加10.0～50.0 μg·kg-1时,平均回收率在85％～110％.试剂盒的检测时间为12.6 min,在4℃至少可以保存6个月.研制的试剂盒可以满足猪肝、猪肉和鸡肉中磺胺二甲嘧啶残留的现场快速检测.