应用细菌防治植物寄生线虫

本文综述了细菌防治植物寄生线虫的研究历史、现状．包括了穿刺巴斯德杆菌、根际细菌和苏云金杆菌作用于线虫的机制,在生物防治上的应用及其前景展望．     

具杀线虫活性烟草内生细菌的筛选及鉴定

植物寄生线虫是危害植物的重要病原物,为了筛选到能在烟草体内稳定定殖并且对线虫具有明显杀线虫活性的烟草内生生防细菌,从127株烟草内生细菌中筛选出5株对全齿复活线虫(Panagrellus redivivus)具有明显杀线虫活性的细菌。这5株细菌的发酵液稀释5倍处理线虫12 h后,线虫的死亡率均达90%以上;24 h后,死亡线虫虫体发生消解或渗漏。5株杀线虫细菌发酵液的杀线虫活性在12 h内随处理时间的延长而升高,随着稀释倍数的增加而降低。通过16S r DNA序列同源性分析将这5株杀线虫细菌中的4株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),其余1株鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。     

不同来源松材线虫携带的细菌多样性

对来自日本和中国的松材线虫所携带的细菌进行了分离、纯化培养,并通过菌落形态、氧化酶检测、接触酶试验,革兰氏染色和ABT自动检测等方法,确定了中国的松材线虫所携带细菌的主要种类为假单胞菌和泛菌属,而日本的松材线虫所携带的主要是产气肠杆菌、产吲哚金黄杆菌、葡萄球菌。     

松树枯萎病枝条内的寄生虫和微生物群落

对松树枯萎病枝条内的寄生虫和微生物群落进行分离研究,结果发现枯萎松枝条内有大量的寄生虫和微生物,主要是线虫、原虫、真菌和细菌。经形态观察,线虫为松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus （Steiner and Btihrer）Nikle）、拟松材线虫（B．mucronatus Mamiya and Enda）和小杆线虫（Rhabditida sp．）;原虫为一种纤毛虫（Paramoecium sp．）;真菌是长喙壳孢（Ceratocystis Ell．et Hals）;细菌主要是假单胞杆菌（Pseudomanus sp．）和芽孢杆菌（Bacillus sp．）。     

松材线虫内生细菌与病原细菌的互作关系分析

采用16S rRNA基因文库和 illumina Miseq技术测序对松材线虫内生细菌群落的宏基因组进行初步分析,文库显示优势菌群为黄单胞菌科(22.41%)、鞘脂杆菌科(17.66%)、丛毛单胞菌科(14.71%)、根瘤菌科(10.17%)。采用稀释平板法,从松材线虫体内分离出5株内生细菌。利用形态学、生理学及16S rRNA 序列特征等对这些内生细菌进行了分类鉴定。研究发现这些内生细菌在体外均显示较强的杀线虫活性,其中克雷伯氏菌属sct5的杀虫活性最大,作用4 d松材线虫的死亡率即可达到100％。该细菌产生毒性蛋白酶并在体外快速形成生物膜。进一步研究发现,该内生细菌与杀线虫芽孢杆菌B16之间具有强亲和性,混合2个菌株sct5+B16作用1 d对松材线虫的防效为75％,明显好于单菌株sct5 (60％)和B16(40％)。而另一内生细菌肠杆菌属sct29与B16存在拮抗关系,两者不亲和,混合菌株sct29+B16作用1 d对松材线虫的防效仅为13％。本研究首次系统地报道了松材线虫可培养内生细菌的杀虫活性及其与杀线虫芽孢杆菌B16的亲和关系,对研制开发组合生防菌剂、提高生防菌株的稳定性等奠定理论基础,本研究从新的视角阐释了松材线虫内生细菌与病原细菌之间的互作关系。      

松材线虫携带细菌的光镜观察与数量测定

首次用改进的染色方法对松材线虫携带的细菌进行了光镜观察，表明细菌存在于松材线虫的体表及线虫生活的环境中；同时采用平板计数法统计了线虫虫体上携带的细菌数量，平均每头线虫为170-280个细菌。这进一步证实了松树的萎蔫是由松材线虫及其携带的细菌造成的。     

小菜蛾生物防治研究进展

综述了小菜蛾生物防治的最新研究进展并展望了其发展前景。目前应用于小菜蛾防治的生物杀虫剂主要有:细菌、真菌、病毒和线虫。细菌性杀虫剂是目前最有潜力取代化学杀虫剂的微生物杀虫剂,应用最多的是苏云金杆菌制剂。真菌是最重要的昆虫病原微生物,其中以白僵菌研究的最多。病毒杀虫剂主要以核型多角体病毒(NPV)效果较好。昆虫病原线虫是新型的杀虫剂,以小卷蛾线虫和异小杆线虫防治效果较好。     

松树上几种线虫携带细菌的种类与毒性

从不同地区不同松树上采集分离不同种类的线虫,对线虫携带的细菌进行分离鉴定,并用黑松无菌苗及愈伤组织测定细菌的毒性.细菌分离结果表明:松材线虫携带的优势菌为荧光假单胞菌,与其他线虫携带的细菌种类不同.毒性测定结果显示:松材线虫携带的优势菌株毒性最强,拟松材线虫及滑刃属线虫携带的细菌具有一定程度的毒性,小杆线虫携带的细菌没有任何毒性.结果进一步证明了松材线虫携带的细菌在其致病过程中发挥着重要作用.     

土壤食细菌线虫的分离和富集培养方法

从小麦根际土中分离得到一种能取食B1和B2两种细菌的土壤食细菌线虫，并在马铃薯蔗糖培养基上富化培养成功。经鉴定该线虫为原小杆线虫属（Protorhabditis sp.）,B1为假单胞菌属（Pseudomonas sp.),B2为醋杆菌属（Acetobacter sp.)。用牛肉膏蛋白胨细菌培养基培养B1和B2两种细菌时细菌无多糖发生，线虫不能取食细菌而生长繁殖；当用马铃薯蔗糖真菌培养基培养B1和B2两种细菌时，细菌分泌丰富的多糖，线虫生长繁殖较好。多糖是线虫生长繁殖的重要外部环境。     

松材线虫及携带细菌对黑松复合的侵染

从不同松树上分离松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫,并从松材线虫和小杆线虫体上分离细菌,将线虫无菌化处理后与从线虫体上分离到的荧光假单胞杆菌、产气肠杆菌混合接种无菌黑松苗和愈伤组织。结果表明,单独接种无菌线虫或细菌不能使黑松致病,无菌松材线虫、无菌拟松材线虫只有与有毒性的荧光假单胞杆菌混合接种时才能使黑松无菌苗和愈伤组织发病,细菌通过线虫携带在树体内传播扩散,使松树致病。研究进一步证明了线虫和细菌在松材线虫病致病过程中起协同作用。     

异小杆线虫的一株不发光共生细菌

异小杆线虫是一种昆虫病原线虫,多年以来一直认为它的共生细菌都具有荧光的特性。我们从广东阳江海陵岛上所采集的异小杆线虫86H_1的标本中,分离出一株不发光的共生小杆菌。它与发光共生小杆菌一样,亦具备抗生性,其初生型亦有利于宿主线虫的大量繁殖。用EMB琼脂可区别该菌的初生型和次生型。根据其形态及培养特征,生理生化和血清学反应的特点,该菌在分类上可属于发光共生小杆菌Xenorhabdus luminescens。     

松材线虫伴生细菌与松材线虫的关系及致病性机理研究

松材线虫病又称松树萎蔫病,近年来成为了国内严重毁坏型病害。如何治理该病害成为了当今植物保护界研究热点,降低该病害对生产造成的损失尤为迫切,现通过对松材线虫病的危害进行分析,总结前人对松材线虫病的研究成果:分析松材线虫伴生细菌的多样性,发掘松材线虫伴生细菌与松材线虫的关系,结合国内外研究松材线虫伴生细菌的致病性机理研究,总结得出松材线虫伴生菌种较多,没有明显的专一性,结合微生物细菌研究的发展,分离和鉴定出越来越多的细菌种类;指出了松材线虫与携带细菌之间存在密切相关,毒素在松材线虫伴生细菌的致病机制中起着重要作用。     

接种松材线虫后黑松接种枝内细菌和线虫的数量变化

对接种松材线虫Bursaphelenchus xylophilus后3年生黑松Pinus thunbergii接种枝内的细菌和线虫的数量变化进行了观察.结果表明:接种后最初几天内线虫从接种点向其他部分移动缓慢;至接种的主干上松脂减少时,线虫开始增加,木块组织的带菌率的变化与线虫数量的变化趋势相似,细菌和线虫的数量与病树的症状发展密切相关.细菌的优势属为假单胞杆菌属Pseudomanas.表3参9     

植物根际拮抗线虫的细菌筛选

从北京22个菜区的27种蔬菜植物根表和根际土壤中分离出883个细菌分离物,在营养琼脂培养基(NA)平板上检测对目标线虫 Panagrellus redivivus 的致死率,得到10个最有效菌株,它们在接种24h 后(22℃下)对该线虫的致死率均在90%以上。这10个有效菌株对植物寄生线虫有很强的拮抗作用,在 NA 平板上仅6h 后就使北方根结线虫二龄幼虫、Xiphinemathornei,Trichodorus pakistanensis,Scutellonema clathricaudatum 和 Criconemoides profuses 的致死率达100%。在营养肉质培养基(NB)中培养48h 后的滤液及其2倍、6倍、和10倍的稀释液对根结线虫二龄幼虫有显著的致死作用。用10~9cfu·mL~(-1)的细菌悬浮液浸根后显著降低番茄的根结指数,防效达35%～82.1%。经鉴定.这10个有效菌株中8个属芽孢杆菌(Bacillusspp.),2个为不动细菌(Acinebacter spp.)。     

松材线虫伴生细菌与松树萎蔫病关系的初步研究

利用3年生黑松苗作接种材料,分别接种消毒后的松材线虫和从线虫体内分离得到的细菌分离物以及线虫与细菌两者的混合物,调查比较发病情况。结果表明,单独接种消毒后的细菌分离物,松树不萎蔫,单独接种松材线虫松树发病枯死,而接种松材线虫和细菌分离物两者的混合物,松树发病更为严重。由此说明松材线虫的伴生细菌对松树萎蔫病的发生有一定作用,但并不是导致松树发病枯死的决定因素。     

杨树冰核细菌溃疡病寄主树栖伴生细菌的研究

对感病寄生Ａ１００、Ａ１５和美×青杨树枝、干、根、叶上的细菌进行了分离、纯化和鉴定、结果表明伴生细菌有１０种。它们是：嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　ｈｙｄｒｉｏｇｕｋａ）、恶臭假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａ）、荧光假单胞菌（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、丁香假单胞菌（Ｐ． ｓｙｒｉｎｇａｅ）、成团肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｂａｃｔｅｒ ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）、短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）、栗褐芽孢杆菌（Ｂ． ｂａｄｉｕｓ）、巨大芽孢杆菌（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、腊状芽孢杆菌（Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ）地衣芽孢杆菌（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）。这些细菌在感病杨树不同部位出现的频率各异,在韧皮部细菌种群较多．在心材则较少。     

松材线虫拮抗细菌的筛选

[目的]筛选对松材线虫(Bursaphelenchuh xylophilus)具有杀线活性的细菌。[方法]对来自松、杨林分的12株细菌进行了杀松材线虫活性测定。[结果]在植物体上共分离获得12株细菌,其中JK-SD001发酵液稀释4倍对松材线虫处理24 h后杀线率仍为100%,且松材线虫虫体出现消解现象,消解率为80.4%。[结论]为开发生物源杀线剂奠定了基础。     

大豆胞囊线虫病的生防因子研究进展

综述了大豆胞囊线虫的各类生防因子,如食线虫真菌、食线虫细菌、杀线虫植物、捕食性线虫和捕食性土壤动物等,其中研究较深入的是食线虫真菌和细菌,食线虫真菌可归纳为5种类型,即捕食性真菌、专性内寄生菌物、机会真菌、产毒真菌和菌根菌;另外,还对其他生防因子的最新研究结果进行了归类综述,并对大豆胞囊线虫的生物防治进行了展望。     

植物寄生线虫生防因子研究进展

综述了植物寄生线虫生防真菌中的捕食性真菌、线虫内寄生真菌、卵寄生真菌、产毒真菌、菌根真菌、机会真菌,细菌中的根际细菌、巴氏杆菌、苏云金杆菌,放线菌,病毒和立克次氏体,具有杀线虫作用的植物,以及捕食性线虫及原生动物等方面的研究进展。同时指出今后研究的重点和热点集中在土壤的抑菌作用问题、生防菌的风险评估、生防制剂的质量评价标准和体系、生防制剂的开发利用等。     

松材线虫携带的一株细菌分离及其致病性

从患松材线虫病致死的黑松和马尾松病树组织及松褐天牛虫体中分离的松材线虫虫体上均分离到同一细菌菌株 .经致病性、革兰氏染色、菌体形态、培养性状和生理生化反应等测定 ,将致病菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌 .ATBExpression自动鉴定仪的鉴定结果与上述结果相同 .在分离过程中该菌出现频率较高 ,说明是松材线虫携带的主要细菌 .人工接种试验结果显示 ,用无菌线虫或洋葱伯克霍尔德氏菌菌株分别接种的黑松无菌苗不发病 ,而用二者混合接种则使无菌苗迅速发生褐变和萎蔫 .林间利用 6年生黑松进行的接种试验结果证明 ,用无菌松材线虫和洋葱伯克霍尔德氏菌菌株混合接种的黑松与使用野生松材线虫接种的黑松都 10 0 %的患病 .单独用无菌松材线虫接种有 4株发病 ,6株没有发病 .其中发病黑松中不仅分离到了松材线虫 ,也分离到了细菌 ,而没有患病的 6株黑松中仅分离到少量松材线虫 .这说明在野外条件下接种的松材线虫可以通过某种途径重新获得细菌 ,导致了接种的黑松患病 .而接种后无菌松材线虫没能获得细菌的那些黑松就没有患病 ,说明单独无菌松材线虫不能使黑松患病 .这些结果说明松材线虫携带的细菌与松材线虫的致病性有关 .因此 ,可以把松材线虫病看作是线虫和细菌共同侵染引起的一种植物复合侵染病害 .在这