感染肺炎链球菌的猕猴消化系统分泌型免疫球蛋白A的表达

采用免疫组织化学和原位杂交方法检测分泌型免疫球蛋白A (SIgA)在自发性感染肺炎链球菌的猕猴胃肠道以及肝脏、食管的表达变化,通过测定光密度值和表达面积比较感染前后的分泌变化,探讨SIgA在肺炎链球菌发病机制中的作用以及自发性肺炎链球菌性肺炎的病理特点.免疫组化结果显示,和健康组比较,SIgA在感染组的光密度值以及表达面积在各组织中均有下降趋势,其中在空肠阳性细胞的表达面积下降显著(P＜0.05);原位杂交结果和免疫组化结果基本一致,感染组各组织阳性细胞表达面积均较健康组减少,其中空肠、盲肠以及胃组织差异显著(P＜0.05),感染组光密度值较健康组高,但差异均不显著(P＞0.05).阳性细胞的分布多集中于各胃肠段和食管的黏膜层,血管中可见较多阳性细胞,而肝脏中的阳性细胞多呈散在分布.其中,阳性细胞主要包括胃肠道黏膜层的淋巴细胞和肝细胞、血管内细胞以及炎性浸润细胞,部分腺体细胞、上皮细胞和食管黏膜层未角化上皮细胞也有阳性反应.上述结果表明,SIgA可通过以体液免疫为主的免疫机制帮助机体清除肺炎链球菌;SIgA作为黏膜免疫系统中重要的抗体分子在感染组组织中表达水平的降低可能是导致肺炎链球菌入侵机体从而引起感染的一个因素.     

肺炎支原体感染患儿急性期血清IFN-γ和IL-4水平的变化

目的：探讨肺炎支原体（MP）感染患儿急性期血清细胞因子即干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平的变化。方法：选择某中医医院儿科门诊和住院疑诊为MP感染的患儿,采用明胶颗粒凝集试剂检测其血清MP抗体,将滴度为1∶160以上的60例患儿以及30例健康儿童采用酶联免疫吸附试验检测血清IFN-γ和IL-4浓度。结果：与对照组比较,患儿组血清IFN-γ和IL-4水平均明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：MP患儿血清急性期IFN-γ和IL-4均升高,提示MP患儿发病可能与免疫功能紊乱相关。     

鸡IFN-γ表达载体的构建

[目的]构建鸡IFN-γ的表达载体。[方法]采用PCR方法从pcDNA-ChIFN-γ重组质粒中扩增得到鸡IFN-γ基因,将目的基因定向克隆至能够在大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达的pQE trisystem载体内,转化大肠杆菌M15菌株,以IPTG诱导表达8×H is-tag标签蛋白并对其进行纯化。[结果]通过SDS-PAGE检测方法表明,ChIFN-γ基因片段成功表达。[结论]鸡IFN-γ的表达载体成功构建。     

IFN-γ在流产大鼠下丘脑的表达

为了探讨下丘脑对妊娠的调节作用,采用免疫组织化学SP法研究了妊娠中期,正常妊娠大鼠及流产大鼠下丘脑内IFN-γ阳性神经元的形态与分布,同时利用图像分析软件测定了其灰度值。结果显示,正常妊娠大鼠和流产大鼠IFN-γ主要在下丘脑的视前大细胞核、室旁核、视上核、下丘脑前核等部位分布,而流产大鼠的IFN-γ阳性细胞数多于正常妊娠组且表达强于正常妊娠组。表明IFN-γ在下丘脑的表达对妊娠大鼠的神经内分泌调节有重要影响。     

肉用美利奴羔羊肺炎链球菌感染的诊断与防治

对一起进口美利奴胚胎羔羊发生的以脑炎、关节炎、肺炎为特征的链球菌感染 ,进行了诊断 ,并采取措施 ,有效控制了病情。     

怀孕期山羊腺垂体中IFN-α和IFN-γ的表达研究

【目的】研究α-干扰素(IFN-α)和γ-干扰素(IFN-γ)在怀孕前期(怀孕1～30d)、中期(怀孕31～120d)、后期(怀孕121～150d)山羊腺垂体中的分布及表达量的变化特点。【方法】以怀孕前、中、后期的山羊为试验动物,放血致死后采取其腺垂体制备切片,采用免疫组织化学SP法分别对怀孕前、中、后期山羊腺垂体内IFN-α、IFN-γ阳性细胞的分布及表达变化进行研究。【结果】2种干扰素阳性物质主要分布于腺垂体嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞中。不同怀孕期,IFN-α和IFN-γ的分布存在明显差异,前期和后期表达量较高,中期明显降低;在前、中、后各个怀孕时期,IFN-α的相对表达量均比IFN-γ多,在后期更为明显。【结论】IFN-α和IFN-γ在山羊腺垂体中的表达量因怀孕时期的不同而存在明显差异,其可能在不同怀孕时期发挥作用或相互协同调节垂体激素的合成与分泌,参与动物生殖的调节。     

中药有效成分诱导肺微血管内皮细胞表达IFN-γ的研究

以体外培养的RPMVECs(rat pul monary microvascular endothelial cells,RPMVECs)为模型,采用双夹心ELISA法和MTT法,研究了绿原酸、连翘酯苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素诱导RPMVECs表达IFN-γ(inferteron-γ)的影响以及对PMVECs的毒性。ELISA检测结果表明,加入质量浓度为5,10,20,50,100μg/mL的5种中药成分刺激细胞16 h后,在培养细胞上清液内均能检测到IFN-γ,其中绿原酸、黄芩素组IFN-γ的表达量随药物浓度增大而减少;连翘酯苷组IFN-γ的表达量均较多;黄芩苷、汉黄芩素组均在10μg/mL时IFN-γ的表达量达到峰值,随后IFN-γ的表达量随浓度增大而减少。MTT检测结果显示,各浓度的黄芩苷、黄芩素对PMVECs均有一定程度的抑制作用,而连翘酯苷对PMVECs均有增殖作用,绿原酸、汉黄芩素的细胞毒性则随药物浓度而发生变化。     

抗牛IFN-γ单克隆抗体的制备与鉴定

试验以纯化的rHis-BoIFN-γ蛋白为免疫原免疫4～6周龄BALB/c鼠,3次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用纯化的rGST-BoIFN-γ作为检测抗原,以间接ELISA和有限稀释法进行筛选,并初步鉴定其生物学特性。结果表明,试验共获得4株能稳定分泌抗rBoIFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体亚类均为IgM,轻链为κ链;其中腹水效价2株均达到5×104以上;通过Western blot结果表明,4株单抗均可特异性的结合rGST-BoIFN-γ蛋白,而不与GST标签蛋白反应。间接ELISA试验证明,4株单抗只与rBoIFN-γ反应,而不与GST蛋白和rGoIFN-α、rGoIFN-γ、rBoIFN-α等细胞因子发生交叉反应。通过间接免疫荧光显示,4株单抗均与真核细胞BHK21表达的rBoIFN-γ反应产生强荧光反应,证明了单抗能够与接近天然的BoIFN-γ反应,证实了单抗的特异性。阻断ELISA检测结果表明,3D10株单抗能够与牛外周血诱导产生的天然干扰素发生反应,证实了该单抗具有实际的应用价值。     

肺炎链球菌R6中Spr0934蛋白与铁色素相互作用机制的研究

目的 探究肺炎链球菌R6中未知蛋白Spr0934与其潜在配体铁色素相互作用的机制.方法 基于Uniprot数据库对目标蛋白Spr0934进行同源序列比对,筛选出与其同源性较高的候选蛋白;利用Spr0934蛋白结构与铁色素配体进行分子对接;分子动力学模拟技术检测铁色素被靶标蛋白结合之后引起的结构变化,并分析二者的结合机理...     

肺炎链球菌蛋白质组双向电泳技术的建立及优化

为了建立适合肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)蛋白质组的双向电泳技术,对蛋白样品提取、裂解、上样量、IEF和银染等关键步骤进行了优化,探索出一套有效的肺炎链球菌蛋白分析的双向电泳方法,即以裂解液[15 mmol/L Tris-HCl、7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%(m/v)CHAPS,使用前现加2%(v/v)IPG缓冲液、1%(m/v)二硫苏糖醇(DTT)和1%(m/v)蛋白酶抑制剂混合物]结合反复冻融和超声裂解菌体的方法来提取蛋白质样品,按80μg蛋白上样量,并结合适宜的双向电泳参数,可获得蛋白分辨率高、重复性较好的双向电泳图谱。     

外源性IFN-γ对植入前期妊娠大鼠下丘脑内IL-4阳性细胞的影响

为了解外源性IFN-γ对植入前期大鼠下丘脑内IL-4表达的影响,通过阴道口肌肉注射不同剂量IFN-γ后观察植入前期大鼠下丘脑内IL-4表达的变化,并且用免疫组织化学SP法对其检测。结果表明:在下丘脑的视前大细胞核(POMA)、视前内侧核(POM)、交叉上核(SO)、视上核(SC)、室旁核内侧部(PVM)和室周核(HPV)等处均有IL-4阳性细胞的表达分布;试验1组(注射IFN-γ25 000 IU)和试验2组(注射IFN-γ75 000 IU)各个核团中阳性细胞数与对照组相比较少而且差异显著(P<0.05),2个试验组相比,在部分核团中阳性细胞数试验1组高于试验2组,差异显著(P<0.05)。结果说明下丘脑内IL-4阳性细胞随着外源性IFN-γ剂量的增加而减少,从而说明外源性IFN-γ有可能会影响下丘脑中IL-4蛋白的表达分布。     

肺炎链球菌中青霉素结合蛋白PBP3的功能与结构研究进展

PBP3作为肺炎链球菌唯一的D,D羧肽酶,能够从肽聚糖五肽上移除最后一个末端D-Ala,导致转肽反应中供体不可用,因此控制了肽聚糖的网状交联水平,在细胞分裂和生长中起重要作用。文中对PBP3的功能与结构进行了综述,为今后PBP3的深入研究与应用提供了基础资料。     

AA肉鸡IFN-γ的表达及蛋白结构的初步预测

为了进一步研究肉鸡Ⅱ型干扰素(ChIFN-γ)蛋白的结构与功能,将新城疫Ⅳ系苗接种于9～11日龄SPF鸡胚尿囊腔中,诱生ChIFN-γ,提取脾脏总RNA,经过RT-PCR扩增出ChIFN-γ基因cDNA,测序后亚克隆至原核表达载体pProEXTMHTb中,转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE及Westen Blot检测,利用DNAStar软件包中的Editseq将ChIFN-γ核苷酸序列翻译成氨基酸序列,然后利用Protean软件进行氨基酸序列分析,对蛋白的二级结构进行初步预测,利用自动比较蛋白同源建模的服务器Swiss-Model对ChIFN-γ的氨基酸序列进行三级结构预测。结果显示,所克隆的ChIFN-γ序列大小为495bp,与Digby和Lowenthal首次克隆的鸡Ⅱ型干扰素的同源性为99.8%。表达出预期大小(18ku左右)的融合蛋白,可以与His单克隆抗体发生特异性反应,蛋白质结构预测表明,ChIFN-γ蛋白具有丰富的二级结构和多处抗原指数较高的区段,其解螺旋最低能量值为-4245.698kJ·mol-1,有6个α螺旋结构。     

5种细菌鞭毛素蛋白诱导细胞因子IL-4、IFN-γ mRNA的表达水平

选择5种不同细菌来源的鞭毛素蛋白刺激猪外周血淋巴细胞,利用荧光定量PCR检测相关细胞因子白介素4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)mRNA的表达水平,进一步选择4个含量(0.1、1.0、5.0、10.0μg·m L~(-1))的创伤弧菌鞭毛素蛋白,探讨其诱导IFN-γ的表达效果.结果表明,鞭毛素蛋白可以显著提高IFN-γmRNA的表达水平(P0.05),以创伤弧菌(Vibrio vulnificus MO6-24/O)的效果最佳.4个含量的创伤弧菌鞭毛素蛋白均能显著提高猪外周血淋巴细胞IFN-γmRNA的表达量(P0.05),其中以5.0μg·m L~(-1)为创伤弧菌鞭毛素蛋白的最适含量.本试验主要目的是筛选一种能够有效提高猪免疫功能的细菌鞭毛素蛋白,为挖掘新型疫苗佐剂提供基础.     

IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1表达的影响

【目的】确定干扰素γ(IFN-γ)对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1表达的影响。【方法】将妊娠9 d的SD大鼠随机分为对照组、试验1组和试验2组,采用生殖道肌肉注射的方法,对照组大鼠生殖道肌肉注射生理盐水,试验组大鼠注射IFN-γ,其中1组剂量为2.5×104U/只,2组剂量为7.5×104U/只。各试验组均在注射48h后灌注取材、免疫组化SP法染色,光镜下观察。【结果】注射2.5×104U/只和7.5×104U/只的IFN-γ均能下调妊娠大鼠下丘脑室周核、视上核、视前大细胞核、视前内侧核、视前外侧核、视前交叉上核、弓状核,腺垂体,卵巢黄体及子宫蜕膜基质细胞和子宫腺中IGF-1的表达。【结论】IFN-γ对妊娠早期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中IGF-1的表达具有下调作用,高剂量IFN-γ的下调作用更显著。     

猪γ干扰素的表达及抗病毒活性研究

利用RT-PCR技术从有丝分裂原刀豆素(ConA)诱导的长白猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出猪γ干扰素的成熟肽基因(mPolFN-γ),并将其亚克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-mPoIFN-γ.经PCR、酶切及测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,经SDS-PAG...     

广西三黄鸡气管及肺中肥大细胞异质性的研究

运用甲苯胺蓝等染色法对广西三黄鸡气管和肺中肥大细胞的形态与分布做初步的研究.试验结果发现,肥大细胞成簇分布或单一分布,细胞大小不一,呈椭圆形、近圆形或不规则形状;在气管中,肥大细胞多分布在气管软骨环的开口处;在肺中,肥大细胞多分布在肺内支气管与小支气管伴行的小血管壁外的结缔组织中.     

萧山鸡γ-干扰素(IFN-γ)成熟蛋白基因的克隆、原核表达及真核表达载体的构建

以有丝分裂原ConA诱导鸡脾脏淋巴细胞,用Trizol试剂提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术获得了萧山鸡γ-干扰素成熟蛋白基因495 bp的序列,GenBank登录号为DQ470471。序列分析表明,与已经发表的鸡γ-干扰素成熟蛋白基因序列的核苷酸同源性为95%-99.9%。将该cDNA序列构建得到鸡γ-干扰素的原核表达载体pET30a-ChIFN-γ,成功在大肠杆菌中表达了分子量20.88 kD的目的蛋白,与预期分子量一致;并构建得到了鸡γ-干扰素的pCI真核表达载体（pCI-ChIFN-γ）。     

PRRSV体外感染PAMs对IFN-γ mRNA转录水平的影响

\t\t\t\t\t目的\t\t\t\t\t为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）体外感染猪肺泡巨噬细胞（PAMs）后对IFN-γ及其关键信号分子IRF3和IRF7 mRNA转录的影响。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t方法\t\t\t\t\t从健康仔猪肺脏中无菌分离PAMs,分为对照组和 PRRSV组,于PRRSV感染后的6、12、24、48和60 h收集各组PAMs及其上清液,应用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ的质量浓度和荧光定量 PCR检测不同组中PRRSV、IFN-γ、IRF3和IRF7的 mRNA转录情况。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结果\t\t\t\t\tPRRSV组IFN-γ的质量浓度与正常对照组相比无显著性差异;与对照组相比,PRRSV组IFN-γ mRNA转录量在24 h和48 h显著升高（P<0.01）、48h后降低,IRF3（P<0.05）和IRF7（P<0.01）mRNA转录水平在60 h显著降低。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结论\t\t\t\t\tPRRSV感染PAMs过程中对IFN-γ mRNA的转录呈现先抑制再激活后抑制的现象,在一定程度上是通过调控IRF3和IRF7的转录水平来实现的。\t\t\t\t\t\t\t\t\t     

重组猪γ干扰素对仔猪外周血T淋巴细胞亚群及IL-2、IFN-γ水平影响的研究

选28日龄健康仔猪16头,随机分为4组。1组为对照组,肌肉注射生理盐水;2~4组为试验组,分别肌注重组猪IFN-γ注射液(rpoIFN-γ)4万、40万、400万单位/头,注射液体积均为4 ml,研究rpoIFN-γ对猪外周血T细胞亚群及血清IL-2、IFN-γ含量的影响。结果发现:2组在试验第7天CD3 亚群比例、第7天和第14天CD4 亚群比例及CD4 /CD8 比值、第1天和第3天血清IL-2水平显著高于对照组(P<0.05);3组在试验第14天CD3 和CD4 亚群比例、CD4 /CD8 比值、血清IFN-γ含量,第7天、28天CD8 亚群比例,第14天、21天、28天血清IL-2含量显著高于对照组(P<0.05);4组CD8 亚群比例在第28天显著高于对照组(P<0.05)。表明注射rpoIFN-γ对仔猪的细胞免疫有促进作用,肌注的适宜剂量是40万单位/头。