绿僵菌的培养及其防治白蚁的效果

在平板上测定了不同温度、pH值、碳氮源、微量元素及生长因子(维生素)对绿僵茵茵丝生长及产孢量的影响.结果表明:pH值7.0、温度28℃时最适合绿僵茵的生长;以玉米粉为碳源、酵母膏为氮源时茵丝生长最好、产孢量最高;加入适量的微量元素及维生素有利于茵丝生长及产孢量的提高,其中以加入微量元素Mn和维生素C的效果最佳.绿僵茵对黑翅土白蚁具有强烈的毒杀效果.     

绿僵菌素与化学农药混配对 西花蓟马的联合毒力

采用叶片浸渍饲喂法测定甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、吡虫啉、啶虫脒、烯啶虫胺、多杀菌素、绿僵菌素对西花蓟马二龄若虫的毒力,并通过Horsfall法和共毒系数法确定最佳混剂和最佳配比。结果表明,不同药剂对西花蓟马若虫毒力大小是绿僵菌素多杀菌素甲氨基阿维菌素苯甲酸盐啶虫脒烯啶虫胺吡虫啉。绿僵菌素与甲氨基阿维菌素苯甲酸盐复配表现出最明显的增效作用,当绿僵菌素与甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的比值约1∶4时,增效效果最显著。     

绿僵菌对茄二十八星瓢虫的毒力测定

用培养的金龟子绿僵菌对二十八星瓢虫幼虫进行毒力试验,并对死亡的成虫取样、制片、观察,结果是孢子浓度为1×108孢子/ml时,绿僵菌对不同龄期幼虫的毒杀作用明显,而成虫对高浓度绿僵菌更敏感。组织切片观察表明,绿僵菌主要通过孢子接触寄主表皮来感染成虫,感染后的虫体出现一系列组织病理变化,菌丝侵染各种组织器官,肌肉组织、中肠、马氏管、消化道等遭到破坏,脂肪组织崩解,虫体内有大量菌丝和孢子。     

金龟子绿僵菌CQMa421与4种新烟碱类农药混配对西花蓟马毒力的增效作用

采用叶管药膜法测定了金龟子绿僵菌CQMa421与新烟碱类农药噻虫嗪、噻虫胺、吡虫啉、啶虫脒按照有效成分比(1∶9、3∶7、5∶5、7∶3、9∶1)混配对西花蓟马的室内毒力。结果表明，4种新烟碱类杀虫剂的24和48 h毒力为噻虫胺>噻虫嗪>啶虫脒>吡虫啉，均高于金龟子绿僵菌CQMa421。绿僵菌与噻虫嗪和吡虫啉分别以1∶9、3∶7、5∶5、7∶3、9∶1的比例混配均具有显著的增效作用，绿僵菌与噻虫胺和啶虫脒以9∶1、7∶3的比例混配亦具有良好的增效作用。绿僵菌与新烟碱类农药混配有助于提高对西花蓟马的室内毒力，为治理西花蓟马对新烟碱类杀虫剂抗性提供理论依据。     

绿僵菌对菠萝粉蚧的室内致病力测定

[目的]筛选对菠萝粉蚧有高毒力的菌株,为菠萝粉蚧的田间防治提供科学依据。[方法]以菠萝粉蚧为目标昆虫,从自然感病虫体和土壤中分离获得3株绿僵菌菌株,在室内用喷雾法测定这3株绿僵菌对菠萝粉蚧的致病力。[结果]在室温下,用绿僵菌MA4、J813、J86C接种后,菠萝粉蚧的的死亡率随着绿僵菌孢子浓度的增加而逐步提高。在同一孢子浓度(108,107,106)中,绿僵菌3个菌株对菠萝粉蚧的致病力顺序均为J813(MA4(J86C。感病的粉蚧行动迟缓,死亡2~3 d后,形成僵虫。僵虫经保湿培养3~4 d后,虫体表面长出绿色的粉状孢子。[结论]绿僵菌J813菌株在室内对菠萝粉蚧有强致死力,拥有良好的田间应用前景。     

金龟子绿僵菌对小菜蛾的室内毒力测定

[目的]采用浸叶法和浸虫法测定金龟子绿僵菌在不同浓度下对小菜蛾的室内毒力。[方法]以小菜蛾3龄幼虫为供试虫源,用浸叶法和浸虫法研究金龟子绿僵菌在2种侵染途径下对小菜蛾的室内毒力,并对感染反应的时间与剂量效应作综合分析。[结果]在2种方法处理下。10^5～10^9个孢子／ml浓度的金龟子绿僵菌孢悬液对小菜蛾均有杀伤作用,同一浓度下浸虫法优于浸叶法。在浸叶法中,金龟子绿僵菌对小菜蛾第3天的LD。对数剂量为15．48,第8天的加。对数剂量为11．93;在浸虫法中,金龟子绿僵菌对小菜蛾第3天的凹。对数剂量为9．25,第8天的蛾．对数剂量为8．73。10^9个孢子／ml金龟子绿僵菌处理的小菜蛾在第8天校正死亡率达到92．86％,其￡％为1．95d。[结论]该研究为田间应用金龟子绿僵菌防治小菜蛾提供理论依据。     

绿僵菌菌株的分离及对椰心叶甲的毒力测定

采用土壤分离法和僵虫分离法,获得12株不同来源的绿僵菌。通过对这12株绿僵菌采用2级筛选法进行室内毒力测定,最终确定LA3菌株对椰心叶甲的毒力相对最高,为防治椰心叶甲的优势种。     

金龟子绿僵茵对华北大黑鳃金龟幼虫的杀虫活性研究

虫生真茵是害虫的重要天敌之一.从华北大黑鳃金龟幼虫Holotrichia oblita(Fald.)分离出一株真菌,并采用浸渍法初步研究了对华北大黑鳃金龟幼虫的杀虫活性.结果表明,分离出的虫生真菌为金龟子绿僵茵(Metarhizium anisopliae)菌株;随金龟子绿僵茵孢子浓度的升高,华北大黑鳃金龟幼虫的感病死亡率增加,在孢子浓度为2.1x104、1.9×105、2.2×106、2.0×107、1.8×108个/ml时,幼虫的累计死亡率分别为20%、65%、90%、100%和100%.用时间.剂量.死亡率模型(time-dose-mortality model,TDM)对幼虫的致病力数据进行模拟,所建模型均顺利通过Hosmer-Lemeshow拟合异质性检验,表明模型拟合良好,并由模型估计出了该菌株对华北大黑鳃金龟幼虫的致死剂量与致死时间.结果说明该菌株对防治华北大黑鳃金龟幼虫具有较强的应用潜力.     

两种虫生真菌对棉铃虫的致病力试验

以两种虫生真菌对棉铃虫进行了室内毒力测定,结果表明:球孢白僵菌种以浓度较低的5S031处理对棉铃虫的校正死亡率和僵虫率最高,分别达到82.7%和71.7%,并和其他处理之间差异显著;金龟子绿僵菌的三个处理均比白僵菌的校正死亡率和僵虫率低.     

内蒙古西部虫生真菌调查研究初报

在对内蒙西部地区昆虫病原微生物资源调查中,从甜莱象(虫甲)等六种病死虫体上,分离到四属六种虫生真菌,即绿僵菌、白僵菌、蝗虫霉和干尸虫霉等。接种试验表明,所分离到的绿僵菌和白僵菌对其原来寄主昆虫都有一定的感染致病能力,有希望用于这些害虫的生物防治。     

家蚕微孢子虫极管蛋白2（NbPTP2）的表达、纯化和定位特征

【目的】微孢子虫是一种细胞内专性寄生的真核生物,几乎能感染所有生物,包括人类。极管作为微孢子虫特有的侵染器官,主要由极管蛋白组成。极管蛋白在微孢子虫侵染宿主与稳定孢子结构中发挥重要作用。本研究通过克隆、表达家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）极管蛋白2（NbPTP2）,分析其在成熟孢子极管上的定位特征,为深入研究极管蛋白的功能打下基础。【方法】克隆家蚕微孢子虫NbPTP2。利用Expasy、SignalP 4.1、TMHMM Server V.2.0和NetPhos 3.1 Server等在线软件对NbPTP2的序列特征进行分析,包括氨基酸组成、蛋白质理论分子量、等电点、信号肽、跨膜结构域和磷酸化位点。此外,利用MEGA 7.0软件构建不同种属微孢子虫极管蛋白2的系统进化树。通过克隆NbPTP2,将其与原核表达载体pET32a(+)连接,构建pET32a(+)-NbPTP2重组表达质粒。将测序正确的重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,IPTG诱导异源表达,经镍柱亲和层析纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用免疫印迹检测NbPTP2在成熟孢子中的表达情况,并通过间接免疫荧光试验（IFA）分析NbPTP2在家蚕微孢子虫成熟孢子中的定位特征。【结果】成功克隆并获得长为834 bp的NbPTP2基因序列,该蛋白编码278个氨基酸残基,理论分子质量为30.9 kD,等电点为9.39,无跨膜结构域,N端存在信号肽,具有潜在的磷酸化修饰位点。系统进化树分析结果显示,家蚕微孢子虫NbPTP2与西方蜜蜂微孢子虫NaPTP2、东方蜜蜂微孢子虫NcPTP2的亲缘关系最近。Western blot结果表明,NbPTP2编码的蛋白质在成熟孢子的孢子总蛋白中有表达,分子量大小约为39 kD。IFA定位特征分析结果显示,NbPTP2能定位于家蚕微孢子虫的整条极管上,证实其为一种极管蛋白。【结论】明确了NbPTP2与其他微孢子虫极管蛋白2的亲缘关系,NbPTP2在成熟家蚕微孢子虫中有表达,且能定位于微孢子虫发芽后的整条极管上。研究结果可为极管的结构解析与极管蛋白功能的研究提供依据。     

土壤根肿病菌休眠孢子PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中根肿病菌的保守序列,设计了一对引物,该引物能从供试的根肿病菌根组织中特异性扩增出一条498bp的预期条带。采用改良土壤DNA提取方法对人工配制病土中根肿病菌休眠孢子DNA提取,通过检测不同稀释度和不同孢子量的DNA检测结果证明,该检测方法能检测出土壤根肿病菌含量大于104个孢子/g孢子浓度的带菌土壤,且该方法具有快速、准确、简便、有效的特点。     

家蚕微孢子虫抗体免疫荧光检测方法的建立及应用

通过制备家蚕微孢子虫总蛋白多克隆抗体,建立了多克隆抗体免疲荧光检测方法（IFA）,并利用此方法特异性地检测出了体外培养细胞系（家蚤胚胎细胞系BmE—SWUI）中处于不同发育阶段的家蚤微孢子虫。结果在细胞爬片中可观察到呈较强的黄绿色荧光微孢子虫以及在BmE—SWU1细胞中的寄生分布情况,还可看到孢子极丝的弹出等现象。IFA检测方法鉴别诊断家蚕微粒子虫具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便等特点,可以广泛应用于微孢子虫形态学、流行病学以及蛋白质的定位等研究领域。     

小麦条锈菌夏孢子和芽管细胞核荧光染色技术

用荧光染料DAPI研究结果表明,小麦条锈菌夏孢子染核的最适浓度为5μg/mL,染色时间为3min;夏孢子芽管染核的适宜浓度为3μg/mL,染色时间为2～3min。本研究还发现DAPI对分属于5个亚门中的30种植物病原真菌的孢子(孢子囊)、芽管和菌丝同样具有较好的染核效果。     

2株内生拮抗细菌对灰霉病菌的抑菌活性研究

采用对峙培养法检测了2株内生拮抗细菌对灰霉病菌菌丝生长的影响,并观察了其发酵液对灰霉病菌孢子萌发及病菌生长的影响,同时测定了其发酵液、细菌悬浮液以及高温处理的发酵液在离体黄瓜上对灰霉病菌生长的抑制作用。结果表明：2菌株能强烈抑制灰霉病菌生长,其发酵液也能明显抑制病菌孢子的萌发和生长,且发酵液高温处理后仍具有较高的抑菌活性。在离体黄瓜片上检测菌株对灰霉病菌的抑制效果,结果表明,2菌株发酵液及其细菌悬浮液均能较好地抑制灰霉病菌生长。     

东北对开蕨孢子离体快繁技术研究

该实验以东北对开蕨的孢子为外植体进行离体培养试验，得出了东北对开蕨孢子离体快繁 的途径:孢子试管培养初步得出原叶体，原叶体通过扩繁数量增多，然后将这些原叶体进行试管外诱 导得到孢子体，培养孢子体即可得到东北对开蕨的植株。另通过配方比较得出:试管内采用MS 培养 基增殖效果最好，试管外培养过程中定期喷施0.1% KH₂PO₄ 诱导剂效果最好。     

深州蜜桃黑斑病（Alternaria alternata）的研究Ⅱ．侵染规律和发病诱因

桃树健康和枯死组织普遍带有链格孢，枯死组织带菌率更高。病菌侵染果实主要在盛花期至盛花后约４０ｄ这段时期，侵染高峰在花萎期（４月下旬）。空中孢子捕捉试验证明，当气温稳定在２０℃以上时（５月中旬以后），雨后空中孢子迅速增长，此期空中孢子量与侵染高峰有密切关系。密植树、幼树发病较轻、树下部发病较轻，６月中旬以后套袋对黑斑病发病率无明显影响。     

Centrifugal homogenizer

Tissue can be homogenized in conventional ground-glass tissue grinders in conjunction with centrifugation. The method may be of special value for separating soluble from insoluble material during homogenization of tissue. As yet only yeast cells and spores of slime mold have been homogenized, but the method may be useful for many tissues.     

A mechanism for surface attachment in spores of a plant pathogenic fungus

Rice blast disease is caused by a fungus that attacks all above-ground parts of the rice plant. In a study of the means by which the fungus attaches to the hydrophobic rice leaf surface, it was found that spores(conidia) of the rice blast fungus Magnaporthe grisea have a mechanism for immediate and persistent attachment to various surfaces, including Teflon. This attachment occurs at the spore apex and is blocked by the addition of the lectin concanavalin A. Microscopy of hydrated conidia shows that a spore tip mucilage that binds concanavalin A is expelled specifically from the conidial apex before germ tube emergence. Ultrastructural analysis of dry conidia shows a large periplasmic deposit, presumably spore tip mucilage, at the apex. The results indicate a novel mechanism for the attachment of phytopathogenic fungal spores to a plant surface.