2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查

为了解自2009年年初以来国内一些地区禽白血病流行情况及流行毒株的分子特征,我们从湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽8个省区39个鸡场采集疑似禽白血病病料样品178份,用ALV-A、ALV-B和ALV-J特异性引物,通过PCR方法进行检测。结果表明,8个省的35个鸡场的124份病料中检出了ALV-J(69.7%);25份病料中检出了ALV-A(13.9%);7份病料中检出了ALV-B(3.9%)。14个分离毒株env基因氨基酸同源性为84.3%～99%;与J亚群原型毒株HPRS-103的氨基酸序列同源性为87.3%～98.2%;与其它J亚群env基因氨基酸序列同源性为83%～97.4%。遗传进化分析表明,14个ALV-J分离株分别分属于不同的分支。其中,LJL09DH02分离株与其它分离株及参考毒株的的亲缘关系最远,与HPRS-103的氨基酸同源性仅为87.3%。另外4个分离株的env基因与HPRS-103的氨基酸同源性低于93%,其余9株与HPRS-103的同源性较高(96.6%以上)。该调查结果表明,我国目前ALV的感染主要以J亚群为主,ALV-A和B同时存在。     

禽白血病J亚型的诊断试验

本试验室结合禽病临床表现,通过ELISA及PCR方法,检测广东某低免蛋鸡场的鸡白血病J亚型。结果表明,发病鸡群ALV-J亚型的抗体检出率最高可达约34%。病变组织用RCR方法能检到ALV-J约545bp目的片段。     

J亚型禽白血病病毒水平传播的试验

为探讨J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的水平传播情况,选取0日龄60只抗原阴性鸡和20只抗原阳性鸡混合饲养,接触7 d、15 d、25 d、35 d、45 d、55 d、65 d、75 d、90 d后检测阴性鸡的泄殖腔ALV-p27和血清ALV-J抗体,并于65 d采集阴性鸡血浆接种DF-1细胞进行外源性ALV和J亚群分离鉴定。结果显示,阴性鸡与阳性鸡混合饲养15 d,泄殖腔中开始检测到ALV-p27抗原,65 d阳性率最高达50.00%;ELISA和RT-PCR方法检测到细胞培养液中外源性ALV阳性率分别为60.00%和56.67%;RT-PCR和IFA方法检测到细胞培养液中ALV-J抗原阳性率分别为56.67%和63.33%;65 d阴性鸡血清中ALV-J抗体阳性率达63.33%。表明阴性鸡与阳性鸡直接接触混合饲养,通过水平传播被感染外源性ALV-J的几率相当高。     

安徽省五华鸡J亚群禽白血病病毒gp85基因分子序列特征分析

为进一步了解J亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)gp85基因的结构、功能及其遗传变异趋势,采用PCR方法克隆了安徽省地方品种五华鸡ALV-J gp85基因序列ALV-J-WH,并将该序列与GenBank数据库中登录的15个gp85基因序列进行了比对分析。结果显示,ALV-J-WH与所比对的氨基酸序列同源性介于85.9%~96.2%之间,与其同源性最高的是来自于国内ALV-J毒株的JN378888基因序列,进化树也证实两者亲缘关系较近;此外,相对其他ALV-J gp85氨基酸序列,ALV-J-WH在223位氨基酸后有10个氨基酸的缺失;对所有全长序列分析结果表明,共有71个可变氨基酸位点,10个高度变异位点,尤其是hr1和hr2区域分布较多。结果表明,ALV-J-WH与国内部分ALV-J毒株分离gp85基因来自共同的原始病毒,但其具有独特的序列特征;ALV-J gp85基因高度易变,部分高频率突变的氨基酸位点可能是ALV-J在抗体免疫选择压下的作用位点。     

J亚群禽白血病病毒gp85基因在重组杆状病毒中的表达及鉴定

为获得J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的gp85蛋白,将ALV-J的gp85基因克隆至pFastBac-HTA供体质粒,将其转入DH10BacTM大肠杆菌感受态细胞,使gp85基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组穿梭载体Bacmid-gp85。通过脂质体介导,将重组穿梭载体Bacmid-gp85转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacgp85。Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定结果表明ALV-J gp85蛋白在Sf9昆虫细胞中得到正确表达,表达的重组gp85蛋白分子量约为38 ku。ALV-J gp85重组蛋白在Sf9细胞中的正确表达为其功能研究和应用提供了良好的基础。     

不同地区海兰褐蛋鸡中J亚群-禽白血病病毒株gp85基因的分子演化分析

本研究通过对不同地区海兰褐蛋鸡群中分离的5株J亚群-禽白血病病毒(ALV-J)的囊膜糖蛋白基因(gp85)进行同源性分析,阐述了不同海兰褐鸡群中存在的ALV-J的分子演化规律。对2008-2009年分别从北京、陕西、山东泰安、济阳、曲阜等不同地区饲养的海兰褐鸡分离到的5株ALV-J,用PCR方法克隆gp85基因、测序,并与国内外已发表的14株ALV-Jgp85基因进行同源性比较。结果表明,5株ALV-J与来自白羽肉鸡的HPRS-103株的同源性最近,平均为96.6%(96.4%～96.8%);与来自国内海兰灰蛋鸡的SD07LK1株的同源性平均仅为89.6%(89.3%～89.9%);而5株ALV-J间的同源性高达98.1%以上(98.1%～100%)。本研究发现,不同地区的海兰褐蛋鸡中广泛存在的ALV-J可能有一个共同的来源,即国外的白羽肉鸡。     

J亚群禽白血病病毒膜表面糖蛋白基因gp85的克隆与表达

以pGEM-IMC2.2重组质粒为模板扩增禽白血病病毒内蒙株IMC10200gp85基因，构建了转移栽体pFast Bacl-IM gp85，并利用Bac-to-Bac表达系统获得了重组杆状病毒rBac-IMC gp85。转染Sf9细胞后的表达研究表明，重组杆状病毒可高效表达IMC10200的gp85基因，表达产物具有病毒的抗原特异性，与ALV-J单抗JE9有强的间接免疫荧光反应。蛋白质印迹法分析表明，表达产物的分子质量约54ku。     

蛋鸡J亚群禽白血病的流行病学调查

本试验对蛋鸡养殖密集地区发生的禽白血病疫情进行了流行病学调查,结果显示,此次疫情由禽白血病病毒J亚群感染引起,主要发生在海兰褐品种的商品代蛋鸡,损失比较严重。采用ELISA方法对18个鸡场采集的665份血清、688份泄殖腔棉拭子及180枚种蛋进行了实验室检测,结果表明,湖北省内蛋鸡养殖密集地区的蛋鸡尤其是商品代蛋鸡感染情况相当严重。     

我国2000～2001年J亚群禽白血病病毒分离株gp85基因的序列比较

以相当于J亚群禽白血病病毒（ALV-J）原型株HPRS-103基因组碱基#5394-#5416及#7811-#7794的1对引物对PCR，在2000-2001年从山东，河南和宁夏分离的8株ALV-J中，有6株可以扩增出含gp85基因的2.2kb左右的特异性片段，对其中5株的扩增片段做了序列分析，结果表明，这5个毒株的囊膜糖蛋白gp85与原型株hprs-103有93.4%-96.8%的同源性，与我国最早的分离株SD99024有93.7%-98.7%的同源性，它们相互之间的同源性为91.2%-98.7%，由此说明，我国AVL-J的gp85基因正在不断发生变异。     

我国东北地区野生鸟类A亚群禽白血病病毒分子流行病学调查及env基因序列分析

为了解野生鸟类禽白血病病毒(ALV)的感染情况,本研究采集了300份野生鸟类样品,将样品处理后接种DF-1细胞,利用p27抗原ELISA、IFA、PCR等方法检测,其中两份样品为ALV阳性并对其env基因扩增.结果表明,其中gp85编码序列与已发表的A亚群ALV (ALV-A)的同源性最高,为91.1％～100％,而与已发表的鸡的B、C、D、E、J亚群ALV的gp85编码序列的同源性仅在28.0 ％～80.3％之间.遗传进化树分析也表明这两份ALV阳性样品的gp85编码序列属于ALV-A.本实验在我国野生鸟类群体中首次分离和鉴定出ALV-A,表明目前我国野生鸟类已经存在A亚群ALV的感染.     

蛋鸡J亚群白血病临床、病理和病原学研究

为了解白血病发病过程和病变多样性,从一个严重发生过ALV-J诱发肿瘤/血管瘤的240日龄海蓝褐商品代蛋鸡群中挑选28只不能正常产蛋鸡在实验室连续观察50 d.其中7只分别在249～265日龄死亡,1只出现趾部血管瘤,死后剖检6只出现肝、脾肿大,血管瘤或肿瘤结节.其余21只300日龄剖杀,4只趾部血管瘤,剖检后,除4只外均有不同的内脏病变如肝、脾肿大,弥漫性白色肿瘤结节或纤维肉瘤,以及骨硬化等.对21只采血分离病毒,均分离到ALV-J.对7个分离株gp85扩增克隆测序,表明该分离株与J亚群参考株gp85核苷酸序列同源性最高,在86.9％～95.5％,与A-E亚群ALV的同源性50.6％～53.3％.     

J亚群禽白血病ELISA抗体检测方法的建立

本研究分离纯化了具有反应活性的J亚群禽白血病JL-2株gp85表达蛋白,并以其为抗原,开展了相关反应条件、特异性、重复性、敏感性、现地应用以及国外试剂盒符合率等方面的研究,初步建立了J亚群禽白血病ELISA诊断方法.     

J型禽白血病

禽白血病(Avianleukosis)是指由属于反转录病毒的禽白血病病毒群造成的各种肿瘤性疾病,包括淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤病、结缔组织瘤、上皮肿瘤、内皮肿瘤以及相关肿瘤等。其中最重要的白血病是淋巴组织样白血病,包括与肝脏、脾脏及其     

河南信阳土鸡J亚群禽白血病血清流行病学调查

为掌握信阳地区J亚群禽白血病流行情况,于2016年3月—2017年7月,采用ELISA方法对信阳地区92个土鸡场1 649份血清样品进行检测分析。结果显示,阳性场55个,阳性场率为59.8%;阳性样品452份,个体阳性率为27.4%;不同月份阳性率有差异,2月、12月场阳性率最高,为100%,4月、5月未检出阳性样品;从个体阳性率来看,12月最高,为61.1%;不同规模鸡场阳性率差异不大,规模场阳性率为53.2%、个体阳性率为28%,散养户场阳性率为66.7%、个体阳性率26.7%。禽白血病在信阳已经普遍存在,今后要采取措施加强对该病的净化及根除工作,有效控制其蔓延。     

华东地区蛋鸡群中禽白血病的分子流行病学调查

为了解华东地区蛋鸡群中禽白血病的流行情况,2011年3月至2012年10月,从江苏、山东、安徽、上海等省市的蛋鸡养殖场中采集疑似禽白血病病例样品105份,经DF-1细胞分离培养、间接免疫荧光试验鉴定,从中分离禽白血病病毒(ALV)15株,继而对分离毒株gp85基因进行了序列测定和遗传进化分析。结果表明,在所获得的ALV分离株中,有A亚群ALV(ALV-A)3株,B亚群ALV(ALV-B)4株,剩余8株则均为J亚群ALV(ALV-J)。ALV-A、ALVB分离株遗传进化较为稳定,与其原型株(RAV-1、RAV-2)gp85基因核苷酸序列同源性均在98%以上,与我国近年来的地方分离株亲缘关系较远。ALV-J分离株与其原型株(HPRS-103)gp85基因核苷酸序列的同源性在92.8%~94.5%之间。8株ALV-J分离株中,只有1株与蛋鸡ALV-J分离株有较高的亲缘关系,其余均较远,反而与早期的肉鸡分离株有较高的亲缘关系,表明目前于华东地区蛋鸡群中流行的ALV-J可能来源于早期肉鸡分离株的感染。4株ALV-J分离株与我国地方品系HR土鸡的ALV-J分离株HR332J具有很高的亲缘关系,表明ALV-J的感染范围进一步扩大,对地方品系鸡也造成了很大的危害。     

J亚群禽白血病病毒分子流行病学研究进展

禽白血病病毒J亚群(ALV-J )于1988年首先发现于英国[1],随后世界各地均有报道[2.3.4] .崔治中等[5.6]在1999年也分离到了该病原,并对该分离株做了致病性试验.除了引起肿瘤外,最近还发现雏鸡感染ALV-J后,其生长性能低于未感染的肉鸡[7].自该病出现以来,已严重危害养禽业的发展.本病毒能诱导肉鸡产生骨髓细胞瘤病(ML)、肾瘤和其他多种肿瘤,死亡率为1%～2%,偶尔可高达20%.目前这种肿瘤病世界各地均有所流行,出现强毒力致病型毒株的报道不断增多,并且引发其他疾病的免疫失败,造成了巨大经济损失.因此,有效预防和控制这类疾病将是今后研究的重点,也是当今巨大的挑战之一.     

地方品种HR土鸡不同亚型禽白血病病毒的共感染

为研究HR土鸡中存在的不同亚型禽白血病病毒(ALV)共感染的情况,本实验分别采集46只HR土公鸡的泄殖腔棉拭子和455枚鸡蛋卵白样品,采用ELISA试剂盒检测p27抗原;并采用相应的ELISA试剂盒分别检测卵黄中J亚型ALV(ALV-J)和AB亚型ALV(ALV-AB)抗体。结果表明:HR土公鸡泄殖腔棉拭子样品中p27检出阳性率为87%(40/46),卵白检出率为74.7%(340/455);而卵黄中ALV-J和ALV-AB抗体阳性率分别为0(0/30)和80%(24/30)。无菌采集初步筛选p27抗原检测为阳性的5只HR土公鸡的抗凝血接种CEF,采用抗ALV-J和ALV-A的单克隆抗体进行IFA检测,结果显示5份样品中ALV-A和ALV-J的阳性率均为100%(5/5)。同时选取HR土鸡分离株HR332进行PCR扩增鉴定,结果表明分离株HR332存在ALV-J(HR332J)和ALV-A(HR332A)。其中,HR332J与11株ALV-J国内外参考株的同源性为92.4%～97.9%;HR332A与ALV-A参考株RSA-A、MQNCSU的同源性分别为90.1%和89.7%,与国内分离株SDAU09E2的同源性为99.0%。本研究显示,地方品种HR土鸡存在不同亚型ALV共感染,同时ALV-A和ALV-J共感染同一个鸡的现象已经存在。     

一种新型的禽传染性肿瘤疾病——J亚型禽白血病

20世 纪 末 叶 ， 肉 种 鸡 群 出 现 了 一 种 新 的 禽 白 血 病 病 毒 J亚 型 (Avian Leukosis Virus－ J subgroup,ALV－ J)感 染 。 这 种 最 早 在 1991年 由 Payne博 士 发 现 于 英 国 的 传 染 性 肿 瘤 疾 病 ， 近 年 来 已 在 包 括 美 国 在 内 的 许 多 国 家 的 肉 种 鸡 群 中 发 生 ， 给 世 界 肉 鸡 业 造 成 重 大 损 失 。 　　本 文 谨 就 文 献 阅 读 及 笔 者 见 闻 ， 作 一 简 要 综 述 。 　　病 原 和 病 性 　　研 究 表 明 ， 引 起 这 种 新 型 禽 白 血 病 的 病 毒 与 过 去 已 经 发 现 的 ALV亚 …     

J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达

构建J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达载体,并在大肠埃希菌中获得表达。根据原核表达载体pET30的酶切图谱设计引物,以重组质粒pBS-T-env为模板,扩增gp85基因。将此段基因克隆到表达载体pET30上,转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达出约为70ku的融合蛋白。获得了gp85基因的表达产物,为研制ALV-J的特异性抗血清及国内ALV-J病毒分子诊断试剂盒奠定了基础。