microRNA-124-3p调控H1N1亚型猪流感病毒致小鼠肺损伤的研究

为研究microRNA-124-3p（miR-124-3p）对H1N1亚型猪流感病毒（swine influenza virus，SIV）感染小鼠所致肺损伤的调控作用，本试验构建miR-124-3p腺病毒表达载体，通过小鼠尾部静脉注射法构建miR-124-3p差异表达小鼠模型，试验分3组：过表达组、抑制组和对照组。48 h后，各组小鼠鼻腔接种H1N1亚型SIV，每只10⁵ EID₅₀（50 μL）。连续观察14 d，计算小鼠平均体重变化率、观察病理切片并测定相关炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量。结果显示，已成功将pre-miR序列及其sponge序列插入腺病毒的穿梭质粒，并将其共转染293A细胞。实时荧光定量PCR检测证实，与对照组相比，过表达组和抑制组小鼠黑色素瘤细胞miR-124-3p表达水平分别极显著升高（P<0.01）和显著降低（P<0.05），表明成功构建腺病毒表达载体。过表达组、抑制组和对照组小鼠体重变化率分别为－5.5%、－12.4%和－8.6%。抑制组和对照组均可见肺泡壁增厚，其间有多量淋巴细胞浸润，部分肺泡内出现纤维蛋白渗出，且抑制组病理变化更为严重，肺泡中还有大量的红细胞浸润；而过表达组仅有少量的淋巴细胞浸润，肺脏组织较正常。与对照组相比，过表达组检测的炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平均显著降低（P<0.05）；抑制组炎症相关炎症因子mRNA表达水平均显著升高（P<0.05）。本试验结果表明，miR-124-3p对H1N1亚型SIV感染小鼠所致的肺脏炎症因子的表达具有抑制作用，同时能减轻肺脏病理损伤。     

蒲公英提取物对急性肺损伤小鼠iNOS、COX-2mRNA及NF-kB(p65)蛋白表达的影响

研究蒲公英提取物对急性肺损伤(ALI)小鼠炎症介质NO和PGE2的限速酶iNOS和COX-2 mRNA及核转录因子NF-kB (p65)蛋白表达的影响,初步探讨其对ALI小鼠的保护作用机制.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测iNOS和COX-2的mRNA表达,Western-blot检测NF-kB (p65)的表达.结果表明蒲公英提取物抑制了ALI小鼠肺组织中iNOS、COX-2 mRNA及NF-kB蛋白的表达,分析其对ALI小鼠的保护作用可能通过此途径完成.     

蒲公英提取物对急性肺损伤小鼠iNOS、COX-2 mRNA及NF-κB(p65)蛋白表达的影响

研究蒲公英提取物对急性肺损伤(ALI)小鼠炎症介质NO和PGE2的限速酶iNOS和COX-2 mRNA及核转录因子NF-κB(p65)蛋白表达的影响,初步探讨其对ALI小鼠的保护作用机制。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测iNOS和COX-2的mRNA表达,Western-blot检测NF-κB(p65)的表达。结果表明蒲公英提取物抑制了ALI小鼠肺组织中iNOS、COX-2 mRNA及NF-κB蛋白的表达,分析其对ALI小鼠的保护作用可能通过此途径完成。     

p38 MAPK抑制剂对热应激雌性雏鸡主要生殖激素分泌的影响

为探究p38 MAPK抑制剂SB203580对热应激雌性雏鸡主要生殖激素分泌的影响,将72只1日龄文昌鸡母雏随机分为对照组(CK)、热应激组(HS)和抑制剂组(HS+I),从第三周开始,每天中午12:00对HS、HS+I组雏鸡进行热应激2 h,每周龄末在热应激前30 min给HS+I组雏鸡腹腔注射SB203580(5 ...     

p38促分裂素活化激酶（MAPK）是马中性粒细胞趋化游走的关键

马的足板层组织正常并不含有中性粒细胞,且与马的其他组织相比含有非常少量的超氧化物歧化酶,因此该组织易受到进入其中的中性粒细胞所产生的反应性氧族侵袭。在急性足板层炎临床进展期,感染足部的病理学变化包括基底膜的破坏,中性粒细胞的浸润,以及足板层静脉血小板-中性粒细胞的积聚,使得中性粒细胞对于该病的病生理发展变得尤为明显。本研究的目的是揭示p38促分裂素活化激酶(MAPK)在马粒细胞趋化游走中的作用,从而找到治疗靶点,并可减少急性足板层炎时中性粒细胞进入导致的足板层损伤。研究发现内源性的化学趋化物LTB4能短暂激活p38 MAPK,并能诱导马中性粒细胞的趋化。使用p38MAPK特异性抑制剂SB203580可减少LTB4诱导的趋化游走并呈剂量相关性,其中半数有效浓度为2.8 mmol/L。然后研究了SB203580能减少趋化游走的可能机制。研究发现使用10 mmol/L SB203580抑制p38 MAPK可破坏中性粒细胞受LTB4和PAF刺激后的极化分裂能力。相比而言,p38 MAPK在化学趋化物或PKC诱导的β2整合素依赖性吸附或化学趋化物诱导上调表达表面β2整合素中并不是必需的,但对于TNFα诱导的吸附是必需的...     

p38MAPK抑制剂SB202190对猪颗粒细胞活力的影响

p38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated potein kinase,MAPK)家族成员,是细胞内重要的信号转导系统之一,对细胞的生长、分化、凋亡具有重要影响及作用。为探究p38MAPK信号对猪卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其可能作用机制,研究以体外培养的猪卵巢颗粒细胞为模型,在培养液中分别添加浓度为0、1、10、20μmol/L的p38MAPK特异性抑制剂SB202190。以免疫细胞化学染色法鉴定体外培养猪卵巢颗粒细胞,通过CCK-8法检测其增殖活性,应用Annwxin V-FITC/PI及细胞周期试剂盒染色检测细胞凋亡及细胞周期状况,以实时定量PCR检测猪卵巢颗粒细胞中凋亡、周期相关基因的相对表达水平。结果表明,添加p38APK信号抑制剂SB202190可抑制体外培养猪卵巢颗粒细胞的增殖活性,20μmol/L处理组与其他组相比呈显著性差异(P0.05);20μmol/L SB202190添加处理未显著影响颗粒细胞的凋亡水平,而该浓度SB202190可将大部分细胞阻滞在G1/G0期,与对照组相比差异显著(P0.05);基因相对表达水平检测显示SB202190添加可抑制Fas、FasL、CDK-4的表达,而同时促进Bcl-2、Bax、P27的表达(P0.05),对Caspase-3的表达没显著影响(P0.05)。综上所述,SB202190通过调控猪卵巢颗粒细胞的周期来影响其增殖作用,但对其凋亡没有影响。     

H1N1猪流感病毒介导小鼠 mmu-miR-206-3p下调及其对FN1表达过程的影响

为了分析H1N1猪流感病毒(SIV)介导小鼠mmu-miRNA-206-3p(mmu-miR-206-3p)下调及其对纤连蛋白1(FN1)表达过程的影响,试验选用10只6周龄雌性SPF级Balb/c小鼠建立感染H1N1 SIV小鼠模型,并将小鼠分为对照组和攻毒组,对照组用无病毒的尿囊液滴鼻,攻毒组用病毒尿囊液滴鼻,观察并记录小鼠的表现,利用RT-qPCR、Western-blot方法检测mmu-miR-206-3p、FN1和纤连蛋白1基因(Fn1)的变化。结果表明:感染H1N1 SIV 48 h后,对照组小鼠无异常表现,攻毒组小鼠精神萎靡,扎堆,食欲减退,被毛逆立。与对照组相比,12 h后攻毒组mmu-miR-206-3p相对表达量下降, FN1相对表达量升高,Fn1相对表达量变化不显著。说明H1N1 SIV可抑制mmu-miR-206-3p表达,减少mmu-miR-206-3p对Fn1翻译的抑制,进而导致FN1的相对表达量升高。     

H9N2亚型猪流感病毒诱导小鼠肺急性损伤模型的研究

本试验采用100 μLA/swine/HeBei/012/2008/(H9N2)猪流感病毒(H9N2 SIV)经鼻腔接种6～8周龄的BALB/c小鼠,通过定时称量小鼠的采食量和体质量、观察肺病理组织学变化以及测量肺系数、肺湿质量/干质量、动脉血气和支气管肺泡灌洗液内炎性细胞等拟建立H9N2 SIV感染诱导小鼠急性肺损伤模型.结果显示:(1)感染后第2天试验组小鼠出现精神沉郁、被毛松乱、采食量和体质量下降.感染后的第3天开始感染小鼠采食量和体质量显著下降(P＜0.01);(2)试验组小鼠在感染后的第3天末出现死亡,死亡率约为62.5%,剖检可见肺部明显水肿、出血,肺泡内有大量的炎性细胞渗出;肺系数和湿质量/干质量比显著增加(P＜0.01);(3)与对照组相比感染组小鼠动脉血中氧分压从第2天开始降低,第4天出现明显的差异(P＜0.01),第6天最低时仅为(6.79士1.27)kPa,呈现严重的低氧血症,同时,二氧化碳分压显著上升;(4)支气管灌洗液(BALF)内炎性细胞在感染后第4-8天增加显著,尤其以肺泡巨噬细胞和多核型白细胞增加最为明显(P＜0.01).本研究证实采用A/Swine/HeBei/012/2008/(H9N2)病毒感染小鼠引起肺组织弥漫性急性渗出性炎症为主的病理过程和严重的低氧血症,表明成功建立了H9N2 SIV诱导小鼠的肺损伤模型,为进一步研究其对哺乳动物肺损伤的致病机理奠定基础.     

小鼠急性肺损伤造模条件的探究

为探究构建急性肺损伤模型的条件,本试验选用健康昆明小鼠,经腹腔注射递增剂量脂多糖（LPS）（0、2、4、6、8、10 mg/kg）,观察不同条件下小鼠呼吸频率、死亡率、肺脏干湿重比值及组织结构变化,检测炎症因子IL-10、TNF-α、IL-1β及IFN-γ在不同程度肺损伤中的表达量变化。结果显示,4 mg/kg LPS组肺脏干湿重比值显著高于对照组（P<0.05）;6、8和10 m/kg LPS组肺脏干湿重比值极显著高于对照组（P<0.01）。病理切片分析显示,6 mg/kg LPS组小鼠肺脏出现充血,肺泡腔及肺间质出现渗出,肺泡隔增厚,出现少量中性粒细胞浸润;8、10 mg/kg LPS组小鼠肺脏充血明显,肺泡腔及肺间质出现渗出,肺泡明显隔增厚,出现中性粒细胞浸润;与对照组相比,6、8、10 mg/kg LPS组肺组织中胶原纤维大量增多,且多出现在肺气管周围,10 mg/kg LPS组现象最明显。炎症因子检测分析结果显示,与对照组相比,2、4、6、8、10 mg/kg LPS组炎症因子均极显著增加（P<0.01）。结合病理组织切片及相关检测指标表明,昆明小鼠腹腔注射8 mg/kg LPS并作用12 h,可成功构建急性肺损伤模型。     

沃尼妙林抑制脂多糖诱导的Balb/c小鼠急性肺损伤TLR4和CD14的分子表达

为了探究沃尼妙林对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)Balb/c小鼠肺组织中TLR4和CD14表达的影响,试验运用Real time-PCR和Western-blot方法检测LPS诱导的Balb/c小鼠ALI肺组织中TLR4和CD14的表达水平。结果表明:与空白组相比,沃尼妙林处理ALI的Balb/c小鼠肺组织中TLR4和CD14的mRNA和蛋白表达水平均显著性降低(P0.05);随着沃尼妙林剂量的升高,其差异显著性增强。说明沃尼妙林能够抑制LPS诱导的Balb/c小鼠ALI肺组织中TLR4和CD14的分子表达。