基于响应曲面法优化蜂胶的乙醇提取工艺

蜂胶具有优良的保健效果,一直被作为功能食品而加以应用。为了满足实际生产中提高蜂胶产品质量和生产效率的要求,在充分模拟实际生产条件的基础上,利用响应曲面法对蜂胶提取率和总黄酮含量的影响因素(提取时间、乙醇浓度、固液比、提取次数、提取温度)进行了分析。结果表明,针对本实验中采用的蜂胶毛胶样品,回归模型预测的蜂胶提取率达到38.324 6%,总黄酮含量达到199.776 0 mg/g;最佳提取条件为提取时间24 h,乙醇浓度95%,固液比1∶10,提取次数2次,提取温度为室温。为了达到指导实际生产的目的,试验结论须得到生产车间的实际检验。     

响应曲面法优化甜杏仁皮总黄酮提取工艺

[目的]优化微波辅助提取甜杏仁皮总黄酮的工艺.[方法]以甜杏仁皮为原料,在单因素试验的基础上,采用响应曲面法对影响总黄酮得率的主要因素进行了分析,探讨微波辅助提取甜杏仁皮总黄酮的最优工艺.[结果]结果表明,甜杏仁皮总黄酮微波提取最佳工艺条件为微波功率414.98 W,乙醇浓度64.23％,液料比29.70∶1 ml/g,提取时间10.39 rmin,在该条件下杏仁皮黄酮得率理论值为13.835 mg/g.[结论]研究可为甜杏仁皮这一潜在的药用资源的研究开发提供一定的科学依据.     

响应曲面法优化西兰苔总黄酮的提取工艺条件

研究利用超声提取西兰苔叶子黄酮化合物的优化工艺,利用响应曲面法研究乙醇浓度、料液比、温度对西兰苔总黄酮提取率的影响。研究表明,西兰苔总黄酮提取的最佳工艺条件为乙醇浓度70％、料液比1：27、温度70℃,此时西兰苔总黄酮得率达11．9589mg／g。     

响应面法优化甘麦大枣汤的提取工艺

[目的]优化甘麦大枣汤的提取工艺。[方法]选择溶媒用量、浸泡时间、煎煮时间、提取温度4个影响中药提取率的因素进行单因素试验,在此基础上选取料液比、提取时间和提取温度3个主要因素进行响应面分析,得出最佳工艺条件。[结果]该研究确定的最佳提取条件为料液比15.79∶1、提取时间80 min、提取温度60℃,预测黄酮提取率最大,为0.108 5%。[结论]该研究理论值与实测值相吻合,所确定的工艺条件可以指导甘麦大枣汤的提取。     

响应曲面优化紫花地丁总黄酮提取工艺研究

运用响应曲面设计(Box-Behnken设计)优化紫花地丁总黄酮提取工艺.在单因素试验基础上,选择乙醇体积分数、超声波功率、提取温度及提取时间为考查因素,采用响应曲面优化超声提取工艺条件,模拟得到总黄酮提取率二次回归方程预测模型.结果表明,最优提取工艺为乙醇体积分数64％、超声波功率161 W、提取温度72℃、提取时间32 min,总黄酮提取率实测结果(4.09％)与响应曲面拟合所得方程预测值(4.11％)符合良好.结果显示,采用Box-Behnken法建立紫花地丁总黄酮提取工艺模型得率高,并能很好地预测试验结果.     

响应曲面法优化微波辅助提取柿叶总黄酮的工艺

采用响应曲面法优化微波辅助提取柿叶中总黄酮的工艺,以提高柿叶黄酮的提取得率。结果表明：微波辅助提取柿叶总黄酮的最佳工艺为:微波功率422.360 W、提取时间20.970 min、液料比20.660∶1,此时柿叶总黄酮的得率达6.15%。说明响应曲面法是一种很好的优化柿叶黄酮提取工艺的方法。     

响应曲面法优化苦荞麸皮总黄酮的提取工艺

测定了苦荞麸皮总黄酮的含量,并采用响应曲面法中的Box-B ehnken模式,对苦荞麸皮总黄酮微波辅助提取工艺进行了优化。结果表明,苦荞麸皮总黄酮含量为60.1 g/kg;其提取的最佳工艺条件为微波加热时间120 s,乙醇体积分数86%,料液比1∶50,在此条件下总黄酮得率达58.1 g/kg,提取率达96.67%。     

响应曲面法提取柳杉总黄酮的工艺研究

为了研究提取柳杉总黄酮的提取工艺条件,采用响应曲面法,对影响因素的浓度、温度、固液比、时间及乙醇浓度进行了评价.试验得出,最优提取条件为温度76℃,固液比1:31,提取时间3.2h,乙醇浓度76%.在此条件下,柳杉总黄酮的产率为2.163%,响应曲面法能够较好地提取柳杉总黄酮.     

响应曲面法优化苦杏仁皮总黄酮的微波提取工艺研究

【目的】对苦杏仁皮总黄酮提取工艺进行研究,以获得苦杏仁皮资源化利用技术。【方法】通过微波辅助工艺提取苦杏仁皮总黄酮,并采用响应曲面法对影响总黄酮得率的主要因素进行分析。【结果】苦杏仁皮总黄酮微波提取最佳工艺条件为乙醇浓度68％、液料比23：1、提取时间5min,利用该优化提取条件进行试验,苦杏仁皮总黄酮得率达15．198mg／g。【结论】微波辅助提取苦杏仁皮总黄酮,工艺简单易行,省时经济,可为苦杏仁皮工业化利用提供一条新途径。     

响应曲面法优化芒果叶中总黄酮的超声提取工艺

以广东茂名产芒果叶为研究对象,优化芒果叶中总黄酮的超声提取工艺。在单因素试验基础上,选择提取温度、超声功率和提取时间为自变量,以芒果叶中总黄酮提取率为响应值,采用响应曲面法分析优选最佳提取工艺。结果表明,芒果叶中总黄酮提取的最佳工艺条件为:提取温度为65℃,超声波功率为90 W,提取时间为48 min。在此条件下,验证试验得到芒果叶中总黄酮的提取率为5.26(±0.04)%,优化选择提取工艺稳定、可行。     

来源于瓶霉Phialophora sp. G5的酸性木聚糖酶基因的克隆及性质的研究

通过简并PCR和TAIL-PCR技术从瓶霉Phialophora sp. G5菌株基因组DNA中克隆得到一个新的编码b-1,4-木聚糖酶的基因,命名为xyn11G5。该基因ORF全长879 bp,共编码292个氨基酸和一个终止密码子,前19个氨基酸为信号肽序列。将xyn11G5在毕赤酵母中进行分泌表达,重组蛋白经纯化达到电泳纯。酶学性质分析表明,该重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为5.0,在中性条件下具有良好的稳定性,并且具有一定的热稳定性,在饲料行业和生物能源行业领域具有潜在的应用前景。     

特异腐质酶Humicola insolens Y1耐热型木聚糖酶基因的克隆及酶学性质分析

利用简并PCR和TAIL PCR从嗜热特异腐质霉Humicola insolens Y1中克隆得到一个新的耐热型木聚糖酶基因xynD。该基因全长1 104 bp, 共编码367个氨基酸，不含有内含子，N端的22个氨基酸为信号肽。成熟蛋白在毕赤酵母中进行了重组表达，重组蛋白经超滤和离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明，XynD的最适pH为6.0，在pH 4.0～7.0可以保持80%以上的酶活性，在pH 5.0～10.0具有良好的pH稳定性。最适作用温度为70℃，在60℃条件下保持稳定。多数金属离子对XynD酶活力没有明显的影响。麦芽汁降解实验表明，XynD与商用β 葡聚糖共同作用可以提高麦芽的过滤速率(45.7％)并降低粘度(81％)。因此XynD在酿酒业，特别是啤酒制造业具有潜在的应用价值。     

一种来源于Paenibacillus sp. A1的中性β-甘露 聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究

采用简并PCR和TAIL-PCR技术,从来源于天山冰川土壤的类芽孢杆菌Paenibacillus sp. A1菌株基因组中扩增出β-甘露聚糖酶基因编码序列。序列分析表明,该基因全长960 bp,编码一个新的糖苷水解酶第5家族的β-甘露聚糖酶。将该基因克隆到原核表达载pET-22b(+)中,经过IPTG诱导表达,酶的胞外表达量达0.62 U/mL。酶学特性分析表明其最适pH为6.5,最适温度为55℃,属中性β-甘露聚糖酶,具有较好的底物适应性,适宜用于鱼类等水产动物养殖饲料行业中。     

鞘氨醇胞菌B1咔唑降解基因carB的克隆与功能研究

以分离到的咔唑高效降解菌鞘氨醇胞菌B1为材料,研究该菌株咔唑降解基因簇的组成和表达模式,阐释咔唑降解过程中关键酶的作用机理。通过分析不同菌株咔唑降解基因簇中基因的保守区,从菌株B1中成功克隆得到基因簇中carAa、carBa、carBb和carC基因片段。通过RT-PCR证实菌株B1的咔唑降解基因簇为诱导表达。通过同源克隆得到降解关键基因carB和编码两个亚基的carBa、carBb基因,并在大肠杆菌中进行了异源表达。以2,3-二羟基联苯为底物,对CarB粗酶液进行了酶学性质分析。研究表明CarB蛋白催化最适pH和温度分别为7.4和30℃,Fe2+能显著提高酶的催化活力。     

来源于云斑天牛肠道细菌Pseudomonas sp. TN06的β-折叠桶植酸酶基因phyA06的克隆、表达和酶学性质研究

从云斑天牛肠道中筛选到一株产植酸酶活性较高的假单胞菌Pseudomonas sp.TN06。采用简并PCR和TAIL-PCR的方法获得一个新的β-折叠桶植酸酶基因(phyA06),开放阅读框全长1 902 bp,编码633个氨基酸和1个终止密码子,预测其前23个氨基酸为信号肽,含有两个β-折叠桶结构域。将phyA06基因在大肠杆菌中表达,重组蛋白经镍柱纯化后达到电泳纯。纯化后的重组酶最适pH为7.0,在pH 6.0~10.0的条件下具有很好的稳定性;最适温度为55℃,热稳定性良好。同时,该酶在低温下仍保持一定活力,甚至0℃仍有活性。该植酸酶具有应用于水产饲料行业的潜在价值。     

脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp. A15木聚糖酶基因xynA15的克隆表达及性质研究

从云南保山市的一眼温泉中分离到一株嗜热嗜酸菌,脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp.A15。通过同源克隆和TAIL-PCR方法,从该菌株中克隆得到一个木聚糖酶基因,xynA15,全长990 bp,编码329个氨基酸和一个终止密码子。将xynA15基因克隆到原核表达载体pET-22b(＋)上,并转化至BL21(DE3),经过IPTG诱导,其表达产物具有木聚糖酶的活性。对其酶学性质研究发现,XynA15的最适温度为50℃,最适pH值为70,不仅在较广的温度范围（35℃~60℃）内具有较高的酶活,而且在50℃具有较好的热稳定性。     

来源于苍白杆菌的甲基对硫磷水解酶基因的克隆

有机磷化合物作为一类高效广谱的杀虫剂被广泛使用,在使用的同时也造成了大面积的环境污染。本研究从被农药高度污染的土壤中筛选到了一株对甲基对硫磷农药有高效降解能力的细菌,通过16S rDNA鉴定为苍白杆菌(Ochrobactrum sp.)。克隆该菌的有机磷降解酶编码基因mphxw,构建原核表达载体,其表达产物具有正常生物学活性,同时纯化了重组酶。     

Expression and Characterization of a Thermostable Xylanase Gene xynA from a Themophilic Fungus in Pichia pastoris

The gene of xylanase (xynA) was amplified by RT-PCR from the total RNA of a themophilic fungus Thermomyces lanuginosus SY2. The sequence analysis showed that gene coding region of mature peptide contained 0.585 kb, which coded 194amino acids. The putative amino acid sequence and DNA sequence of xylanase from T. lanuginosus SY2 (GenBank no.:GU166389) were 98.97 and 99.49% identical to the other T. lanuginosus (GenBank no.: U35436). A recombinant plasmid pPIC9K-xynA was constructed by inserting gene xynA into Pichia pastoris secretory vector pPIC9K. Linearized pPIC9K-xynA was transformed into P. pastoris GS115 with the method of electroporation. The recombinant strain was identified by G418 selection and confirmed by PCR analysis. It was induced by 1.0% methanol at 28℃ to express the recombinant xylanase. The results showed that the recombinant xylanase was secreted into extracellular fermentation liquid. The highest enzyme activity of 113.5 IU mL-1 and protein content of 889.7 μg mL-1 were detected for 216 h of induction. The optimal pH value and temperature of the enzyme activity was 5.5 and 65℃, respectively. The xylanase activity retained above 80% from pH value 2.5 to 8.5 for 48 h. The enzyme activity was above 85% at incubation temperature of 55℃.     

烟曲霉植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母的高效表达

根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列，设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR，扩增出了1条约1．4kh的带，将该片段进行DNA序列测定，其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致，但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上，获得表达质粒pHBM108。该质粒转化毕赤酵母KM71所得重组子经PCR验证后进行诱导表达，其中一重组子经144h诱导，植酸酶表达量至少为1．25mg／ml，比同类报道的表达量高出60％以上，以植酸钠为底物测得酶活为11．17U／ml。     

一种新颖的毕赤酵母酸性蛋白酶基因的克隆和异源表达以及酶学性质研究

采用基因克隆方法获得酸性蛋白酶基因,在毕赤酵母KM71表达系统中进行表达,并将重组酵母酸性蛋白酶rPrA经过浓缩后研究其酶学性质,初步探究了rPrA对大豆蛋白和酪蛋白的水解情况.结果表明:经过异源表达后的重组毕赤酵母酸性蛋白酶分子量约为44 ku,在pH3.0的发酵条件下酶活最高,可达46.92U/mL.该酸性蛋白酶的最适pH值为3.0,最适温度为35℃.Mn2+对该酶活性有激活作用,多种金属离子对该酶有抑制作用;0.1 mmol/L的Pepstain A即可完全抑制酶活,说明此重组酶的活性中心有天冬氨酸残基.对大豆蛋白和酪蛋白的初步水解试验可知,当E/S为4 000 U/g时,此重组酶对大豆分离蛋白和酪蛋白的水解度分别为9.0％和8.34％.优化发酵条件以及与多种蛋白酶进行复配,该重组蛋白酶将在蛋白水解中有很好的应用前景,有望应用到畜禽饲料加工行业.