日本五针松感染松材线虫病的检测与扩散风险分析

【目的】从日本五针松(Pinus parviflora)栽培圃地调查松褐天牛(Monochumus alternatus),并取样镜检松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus),揭示日本五针松感染松材线虫病的可能性和扩散风险,为开展检疫提供理论依据。【方法】在日本五针松圃地采集枯死或濒死的日本五针松植株,采用分离镜检法检测枯死或濒死日本五针松木质部的线虫种类;剖木检查天牛危害,观察留在日本五针松松枝上的补充营养伤口,同时鉴定天牛幼虫特征,解剖检验羽化的天牛成虫携带LⅣ状态。【结果】在枯死或濒死6株日本五针松枝条样本中有3株样本分离到松材线虫或拟松材线虫,检出率为50%,其中1个样本检出纯松材线虫,1个样本检出纯拟松材线虫,1个样本为松材线虫和拟松材线虫混合寄生,检出率各为33%。侵入枝干的天牛幼虫为松褐天牛幼虫,该幼虫能在日本五针松上顺利羽化为成虫,并携带松材线虫L_(Ⅳ)型耐久型幼虫。【结论】日本五针松能被携带松材线虫的松褐天牛危害并感染松材线虫病,应加强检疫管理,杜绝通过人为调运苗木扩散传播松材线虫病。     

松材线虫和拟松材线虫食道腺及其分泌物超微结构观察

该文用透射电镜观察比较松材线虫南黑株系、拟松材线虫杭九株系幼虫期和成虫期食道腺和分泌物颗粒的形态以及在生活史中的变化. 结果表明二者的食道腺的结构以及在不同时期活性的变化是一致的:幼虫期亚腹食道腺发达,内有大量的分泌颗粒;成虫期背食道腺发达,内有大量的分泌颗粒. 松材线虫和拟松材线虫食道腺分泌颗粒可分为两种类型,这两种类型的分泌颗粒在体积和电子密度上都存在差异. 松材线虫和拟松材线虫株系间的分泌颗粒在体积上存在差异.      

松材线虫抗逆态基因Bx-DAF6鉴定及基因沉默

为探究松材线虫抗逆态幼虫形成的分子机理,本文对抗逆态基因daf-6进行了鉴定和基因沉默研究。应用BLAST比对技术,在松材线虫基因组数据中鉴定得到秀丽线虫daf-6的同源基因,命名为Bx-DAF6。应用PCR技术进行Bx-DAF6完整蛋白编码区(CDS)扩增。采用RNAi技术进行Bx-DAF6沉默,分析该基因的沉默对松材线虫抗逆态幼虫形成的影响。PCR扩增得到CDS区全长2 700 bp,Bx-DAF6编码的蛋白质具有固醇传感结构域。Bx-DAF6沉默抑制了2龄幼虫转变为抗逆态幼虫,表明Bx-DAF6在2龄幼虫转变为抗逆态幼虫生理过程中起正向调控作用。      

脉冲磁场对松材线虫的影响

研究了脉冲磁场对松材线虫的影响。结果表明:脉冲前沿宽度越大、处理时间越长、脉冲周期的缩短,对松材线虫的影响越大;脉冲前沿宽度在5ms和10ms的情况下,随处理时间的延长,松材线虫的活动性受抑越明显,虫体复原所需时间也越长;脉冲磁场处理后,3、4龄幼虫和雌虫的抗性较强,仍具有较好的迁移能力,但2龄幼虫和雄虫受抑制显著、少有迁出;在脉冲前沿宽度1ms以下、处理时间短于20min时,对松材线虫的繁殖影响很小。     

海洋放线菌BH3A8代谢产物杀线虫活性研究

植物寄生线虫的危害日趋严重,利用生物防治技术是控制线虫危害的研究重点。对从渤海海域不同深度水样中筛选出的具有杀线活性的菌株BH3A8代谢产物进行研究,测定了BH3A8代谢产物杀线虫谱和对南方根结线虫的温室防效以及对松材线虫形态与运动频率的影响。结果表明,BH3A8代谢产物对南方根结线虫幼虫毒力最强,对松材线虫幼虫毒力次之,对大豆孢囊线虫幼虫毒力最弱。在温室测定中活性菌株发酵液对南方根结线虫防治效果为73.75%。活性菌株代谢产物明显抑制松材线虫运动频率。中毒线虫起初表现为虫体扭曲、颤抖、痉挛,接着线虫游动缓慢、扭动身躯,最后线虫反应迟钝,摆动减慢,首尾同侧展开,标志着线虫死亡。虫体死亡多为僵直状态。BH3A8杀线虫谱广、效果好、使用成本低,在生产上具有很好的应用前景。     

3个株系松材线虫电镜扫描比较研究

松材线虫病是一种毁灭性的森林病害，不同地区的松材线虫在形态特征方面有一定的差异，采用扫描电子显微镜对来自湖南、广东两地3个株系松材线虫进行了形态观察比较．结果表明：这3个株系的松材线虫成虫的头部、尾部形态特征无明显差异，幼虫和成虫的唇区与体部都出现缢缩；松材线虫口针的开口端呈一斜面；雄性成虫尾部空合伞呈“M”型，这些特征都是在过去的研究中没有描述过的，可为松材线虫的形态研究提供参考依据。     

松材线虫雌虫尾尖突变化综述

通过对14种松材线虫组线虫种内变异、松材线虫雌虫尾尖突随环境变化的比较分析,总结出松材线虫的形态鉴定特征,即对于大多数松材线虫群体,形态学方法可准确判定松材线虫,在判断其为伞滑刃属后,掌握以下3点:(1)雄虫典型的较大弓状交合刺(直线长20~30μm);(2)雌虫较长的阴门盖(长7~11μm);(3)雌虫尾亚圆柱形,末端宽圆,无尾尖突(偶尔群体内个别有微小的尾尖突,但不超过2μm)。最后对松材线虫持久型和繁殖型幼虫尾尖突变化进行了描述。     

松材线虫病濒死树急救技术与救活机理

为了探讨被松材线虫病危害的濒死松树逆转的可能性,在松材线虫病发生区,当夏秋季松树表现出感病症状时,选择濒死松树,镜检松材线虫。确诊后,采用杀线虫剂和杀虫剂输液急救。试验表明,联合使用杀线虫剂和杀虫剂,可使感病的马尾松急救成活率达８３．３％;感病的黑松成活率达到７５．０％。从急救成活可知,松树枯萎是松材线虫和松墨天牛双重作用结果。用药物清除树体内松材线虫和松墨天牛幼虫是濒死松树急救成活的基本机理。感     

Study on Inoculation of the Bursaphdenchus xylophilus and Eats Experiment of Monochamus alternatus Hope of P/nus massonlana Lamb

通过对健康、无病的马尾松人工接种松材线虫以及在伐倒健康、元病的马尾松上进行松褐天牛蛀食性试验。结果表明：主干接种松材线虫的马尾松染病率为20％,死亡率为10％,树枝接种松材线虫的马尾松染病率为10％,无死亡情况。另外,松褐天牛蛀食性试验的伐倒木上,每只雌性松褐天牛繁殖的平均幼虫数为12．3头,皮下组织被取食破坏率平均达25．6％。     

松材线虫个体发育研究

松材线虫病在广东深圳发生严重。25℃,松材线虫从产卵到二龄幼虫孵化的胚胎发育为30h,在盘多毛孢菌上培养,从二龄幼虫发育到二龄幼虫需要5天,幼虫通过4次脱皮发育到成虫,第1次在卵内.详细描述了胚胎发育和胚后发育各阶段的过程和形态变化.松材线虫各龄期的区分以热杀时虫体形态、体长作为依据,二龄幼虫、三龄幼虫、雄史分别为“L”、“I”、“J”形,四龄幼虫和雌虫为开阔“C”形,但雌虫生殖器官发育成熟。二龄、三龄、四龄、雄虫的体长分界值依次为359.4μm,444.9μm、574.5μm.观察生殖腺位置、结构和发育程度也是重要依据。     

松材线虫病传媒昆虫松褐天牛天敌的筛选研究

松褐天牛天敌的筛选是研究生物防治松材线虫病的基础工作,通过对不同时期的马尾松病死木进行解剖观察,搜集松木皮下和木材内的昆虫,对不能判断是蛀干害虫的昆虫,用松褐天牛幼虫进行饲养,结果发现了松褐天牛幼虫的寄生性天敌昆虫花绒寄甲和6种松褐天牛幼虫的取食性天敌。松褐天牛天敌昆虫花绒寄甲为在贵州首次发现。     

多次继代培养的松材线虫分离种致病力变异的研究

通过人工接种2年生黑松(Pinus thunbergii)苗测定松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的致病力,分析经过多次继代培养的松材线虫致病力变异的原因,结果显示:多次继代培养的松材线虫繁殖速度比初代培养的要慢5~6 d,繁殖能力显著下降,保存时间短,显示出多次继代培养的松材线虫活力差。说明了松材线虫致病力与增殖和活力有着极大的关系,继代培养时15次之后致病力会急剧下降。     

一种制备无菌松材线虫的方法

报道了一种通过用H2O2处理松材线虫卵进而获得无菌松材线虫的方法.实验结果表明,15%H2O2处理对松材线虫卵有一定影响,随着处理时间延长,松材线虫孵化率下降,处理30min以上使其孵化率降低至10%以下;15%H2O2处理时间对获得无菌松材线虫有较大影响,其中,处理60min后获得无菌线虫的机率达70%.在无菌条件下...     

浅谈松材线虫病的发生及防治措施

松材线虫病属于复杂病害系统,涉及到传播活动、媒介昆虫、寄主植物和松材线虫。该病虫 害属于严重森林灾害,诊断方法与防治技术能够对松材线虫的防控效果造成直接影响。此次研究主 要是探讨分析松材线虫病的发生与防治,首先介绍松材线虫病的发生发展与诊断技术,之后提出详细 的防治措施,希望能够对松材线虫的诊断与防治起到参考价值。     

人工接种后次代抗松材线虫松树的抗病性

为了解抗病松树后代对松树线虫的抗性，采用人工接种松树线虫，相隔一定时间调查其枯死情况，用3％酸性染料染色研究了抗性松与普通松水分输导情况，线虫的数量，结果表明，普通黑松3个月后枯死率为91．1％，次代抗性赤松枯死率为4．46％，除中央髓部的水分输导受影响外周边木质部和形成层未受影响；次代抗性黑松除两株水分严重受阻外，其他与赤松相似，接种线虫1周后从次代抗性松树上分离线虫最多，以后逐渐下降，5周后则很少。     

用松枝解剖法快速检测松材线虫病原

松材线虫Bursaphelenchus xylophilus早期诊断是防治松材线虫病的重要环节.为了在早期快速测定寄主(松树)体内的病原线虫,开发了便携式显微镜和松枝解剖技术.用修枝剪采集松枝,用解剖刀进行松枝切片,再用便携式显微镜镜检,结果显示松枝内松材线虫检出率为70%,其中濒死松树内检出率为100%,局部枯枝内检出率为60%,健康枝内检出率为0.野外松林内鉴定一个样本平均用时2.5 min.使携式显微镜加枝条解剖法能对松材线虫病实施早期快速诊断.表3参25     

松材线虫快速检测技术方法的比较研究

为了获取准确、快速检测松材线虫的方法，利用纤维素酶活性、苯乙酸与苯甲酸含量和显色剂检测松材线虫的方法进行了比较研究．纤维素酶活性检测结果为病树与健树酶活性差异显著．病树的光吸收值与健树的光吸收值差异不显著，但测定结果不稳定．显色剂测定病树内与健树内的显色差异明显，病树的显色结果呈深红色至浅红色，线虫愈多色泽愈深；健康材呈无色，感染拟松材线虫的松材呈清白色或无色．显色剂检测是简单、快速和有应用价值的方法。     

松材线虫BxPrx基因抗H2O2胁迫的转录模式及功能

为探究松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)响应H_2O_2胁迫的分子机制,利用荧光定量PCR测定松材线虫过氧化物还原酶基因BxPrx在不同浓度(2.5、5.0、7.5、10.0mmol/L)H_2O_2胁迫下的转录水平;利用RNA干扰技术,沉默松材线虫BxPrx基因,比较H_2O_2胁迫下BxPrx基因沉默组与非基因沉默组松材线虫存活率的差异。结果显示:松材线虫的存活率与H_2O_2胁迫浓度呈负相关;松材线虫BxPrx在H_2O_2胁迫下的转录水平均提高;在5.0、7.5、10.0 mmol/L H_2O_2胁迫下,经过BxPrx基因沉默处理的松材线虫存活率显著低于对照组。     

松材线虫效应因子基因筛选及Bx-Hh-grl功能研究

  目的  通过对松材线虫效应因子基因的克隆和功能研究,揭示Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用,为防治松材线虫提供理论依据。  方法  用松材线虫Bx1022株系接种黑松,20 d后提取线虫总RNA进行转录组测序,将该转录组设为松材线虫植食阶段转录组。提取由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）培养的Bx1022的总RNA进行转录组测序,将该转录组设为菌食阶段转录组。比较分析两个转录组,筛选到差异表达基因Bx-Hh-grl。对Bx-Hh-grl编码蛋白质的跨膜结构域和信号肽进行预测。利用原位杂交检测Bx-Hh-grl表达部位。应用RNAi技术干扰Bx-Hh-grl表达以探究Bx-Hh-grl对松材线虫致病性的作用。通过Q-PCR验证,确定RNAi效果显著。将经RNAi处理的松材线虫接种3年生黑松枝条,以未经处理的松材线虫（CK组）和ddH₂O（Mock组）处理的黑松作为对照,比较黑松发病情况进而比较不同处理后松材线虫的致病性差异。  结果  筛选出植食阶段与菌食阶段转录组差异表达基因Bx-Hh-grl,其编码蛋白质具有跨膜结构域和信号肽。原位杂交试验结果显示Bx-Hh-grl在松材线虫食道腺表达,符合效应因子基因特征。Q-PCR结果显示经RNAi处理后的松材线虫Bx-Hh-grl表达量下调,RNAi处理效果显著。接种实验表明,Bx-Hh-grl-RNAi组显症的时间明显晚于CK组,Mock组黑松一直保持健康状态。  结论  Bx-Hh-grl是与松材线虫致病相关的效应因子基因。明确Bx-Hh-grl功能有利于进一步了解松材线虫致病机理,为降低松材线虫危害,防治松材线虫奠定理论基础。      

松材线虫对其携带的一株致病细菌产毒的影响

该文报道了以黑松细胞为材料的一种改进的细胞荧光染色显微生测法.用该方法测定了接种松材线虫虫体上分离到的荧光假单胞GcM5-1A菌株或该菌株和无菌松材线虫混合物接种后的愈伤组织水提物的毒性.结果表明,单独接种无菌松材线虫或单独接种该菌株后的愈伤组织水提液未表现出毒性;而接种无菌松材线虫与该菌株的混合物后的愈伤组织水提液与接种野生松材线虫后的愈伤组织水提液的毒性以及该菌株的NB培养液的无细胞滤液的毒性均很强,并且它们三者之间没有显著差异.该结果说明松材线虫在寄主组织中能促进细菌的产毒.向该菌株的NB培养液的无细胞滤液中添加松材线虫后测定其毒性,结果表明无菌松材线虫对其毒性并无显著影响.实验结果表明松材线虫本身不产生毒素,在荧光假单胞菌培养液的无细胞滤液中加入无菌松材线虫未能显著改变其毒性.