影响甘蓝小孢子胚状体发生的因素研究

以6个甘蓝杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响胚状体发生的因素。结果表明:花蕾长度为3.00~4.00 mm时,有利于获得胚状体;1 500 r/min离心、32.5℃热激24 h,最有利于胚状体的诱导;花蕾经低温4℃预处理24 h,可提高胚诱导率;低速振荡培养能够促进胚状体发生;基因型在小孢子胚状体诱导中起着主导作用。     

甘蓝游离小孢子培养中影响胚状体形成的主要因素

以甘蓝的19个基因型为试材,对影响甘蓝游离小孢子培养诱导胚状体形成的3个主要因素进行了研究。结果表明:供体植株基因型是影响小孢子发生胚状体的关键因素,不同材料之间的诱导频率差异显著;两种激素以不添加6-BA和NAA或只添加6-BA 0.05 mg/L为甘蓝游离小孢子培养的最适激素浓度;高温处理能显著提高小孢子培养的出胚率,供试材料经33℃热激处理后出胚率最高,出胚率高达6.10胚/蕾。     

2个甘蓝F1小孢子培养中高出胚率的诱导技术研究

以2个优良的F1甘蓝为试材,探讨了高温热激、蔗糖浓度、添加和更换培养液培养、激素种类与浓度配比等因素对提高甘蓝小孢子诱导胚产量的影响.结果表明,2个F1甘蓝材料经24 h 、33℃高温热激处理对小孢子胚胎发生是必要的;小孢子在13%蔗糖浓度培养基(NLN-13)中培养胚产量最高,为1.89胚/蕾;高浓度蔗糖的培养基(NLN-17)培养3 d后添加低浓度蔗糖培养基(NLN-10)培养能大幅度提高胚产量,比一直在13%蔗糖的培养基(NLN-13)培养的胚状体增加255.2%;NLN-13培养基中添加0.1 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA能够诱导出高胚产量.     

甘蓝游离小孢子培养的初步研究

甘蓝是一种重要的蔬菜作物,利用小孢子培养方法可以获得纯合的双单倍体,加快甘蓝的育种进程以及提供遗传分析的材料。目前,有关甘蓝小孢子培养国内外报道较少,而且这些研究所用的材料多为结球甘蓝和青花菜等［１,２］,而有关苤蓝的游离小孢子培养还未见报道。根据前...     

大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生

以15个大白菜[Brassica campestris ssp. Pekinensis (Lour.) Olsson]自交系和杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究了影响胚状体发生及植株再生的几个主要因素。结果表明,有12个品种的游离小孢子在NLN-13液体培养基上诱导出胚;各品种间小孢子胚产量差别很大,每个花蕾产胚在0.25~65.4个之间;将成熟的子叶形胚及时转移至再生培养基上,对提高植株获得率至关重要;在NLN-13液体培养基上附加0.2mg.L-1的6-BA对胚状体的发生和发育有促进作用;B5+0.2 mg.L-16-BA+0.02 mg.L-1NAA的培养基有利于小孢子胚发育成植株;1/2 MS+0.1 mg.L-1NAA为小孢子植株生根最适宜的培养基。     

大白菜游离小孢子胚状体诱导影响因素的研究

研究了影响大白菜游离小孢子胚状体诱导的几个主要因素。结果表明,添加适量活性炭可促进胚状体发育,AgNO3在1~5 mg/L浓度范围内起抑制作用,IBA在0.05 mg/L时显著促进胚状体的诱导,诱导率达56.5%,而6-BA单一添加时效果不明显,而与NAA配合添加,即6-BA 0.05 mg/L,NAA0.5 mg/L时,诱导率提高明显。     

甘蓝类蔬菜游离小孢子培养研究进展

近年来,单倍体育种逐步得到发展,游离小孢子培养是产生单倍体的较好途径,本文综述广为种植的甘蓝类蔬菜游离小孢培养概况。材料的选取,小孢子的分离、培养以及提高产胚率等培养技术,并结合实际工作,分析了甘蓝类蔬菜小孢子培养的优势、潜力和当前存在的问题。     

甘蓝类植物游离小孢子培养研究进展

近年来,单倍体育种得到迅速发展。游离小孢子培养是产生单倍体的有效途径。对影响甘蓝类植物游离小孢子培养的主要因素———材料的基因型、小孢子发育时期、培养条件、培养技术及胚状体发生和植株再生等研究情况进行综述,为进一步应用小孢子培养技术提供借鉴。     

大白菜小孢子胚诱导和植株再生

研究大白菜游离小孢子胚诱导主要影响因素,旨在优化培养体系,创制优异DH群体,获得纯合育种材料。以15个大白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究了基因型、培养基成分、低温预处理、取材时期对小孢子胚发生的影响。结果表明:不同试材的小孢子胚发生频率有明显差异,有13个品种诱导得到了胚状体,最高出胚率达每蕾10.16胚;NLN培养基中添加0.05～0.20mg.L-1的6-BA和0.10mg.L-1NAA对胚状体的发生和发育有促进作用;花蕾低温预处理对胚状体发生有明显促进作用;盛花期取样的小孢子产胚率高于始花期和末花期;改良MS培养基中添加0.10g.L-1的活性炭,有利于胚状体的发育及成苗;MS 0.10mg.L-1NAA为小孢子植株生根最适宜的培养基;建立了高效的大白菜游离小孢子培养与植株再生体系。     

早熟大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生的研究

为了优化大白菜游离小孢子培养技术,研究了影响大白菜游离小孢子胚状体诱导及植株再生的主要因素,结果表明:不同基因型的小孢子胚状体的发生频率有明显差异,试验的10个基因型中有7个基因型诱导出了胚,其中以早熟大白菜‘陕秋白’产胚量最高,达到每蕾54.8个胚,耐抽薹的‘05BRF1-20’、‘05BRF1-22’和晚熟的‘秦白3号’没有诱导出胚.研究发现植株的生理状态与小孢子的发育关系密切,盛花期取样的小孢子出胚率最高,分别是初花期和末花期的4.65和15.4倍.在NLN-13培养基中附加0.2 mg.L-16-BA能促进胚状体的发生.B5培养基中附加0.1 mg.L-1GA3是小孢子胚芽分化的最佳培养基.1/2MS培养基中附加0.1 mg.L-1NAA为小孢子植株的最适生根培养基.     

白菜和芜菁杂种小孢子培养研究

对白菜和芜菁的6个杂种F1代进行游离小孢子培养，结果表明，不同组合间小孢子胚胎发生频率存在很大差异，胚产量最高的两个组合“矮脚黄×气死孩”和“苏州青×气死孩”平均每蕾分别产生21.1和17.2个胚。诱导杂种胚状体发生的最佳时期是单核中期至单核靠边期。33℃、24h热激处理可明显提高杂种小孢子胚的诱导率，培养基中加入活性炭也可改善胚的分化。     

耐寒结球甘蓝小孢子培养及其发育过程

以6份耐寒结球甘蓝杂交F1为试验材料,研究其胚胎发生过程及胚胎发生的诱导条件,为耐寒甘蓝材料的小孢子培养,以及其他芸薹属小孢子胚胎体系的建立及优化提供理论依据。采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色方法对小孢子体内和体外的发育及胚胎发生过程、特征进行观察;NLN-13培养基中添加阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan,AG)和阿拉伯半乳糖蛋白(Arabinogalactan-protein,AGP)对小孢子培养胚胎发生率的影响进行统计分析;小孢子体内正常发育方向是单核小孢子经历2次不对称核分裂后发育成三核成熟花粉,小孢子单核晚期对应的花蕾长度主要集中在3.5~4.5mm;体外培养中,热激胁迫(32.5℃)诱导小孢子从配子体发育途径向胚胎发生途径转换,只有少数胚性细胞最终发育成为胚状体;供试材料中有5份材料获得胚状体,材料间出胚量差异较大,其中‘寒玉37’出胚量最高,为每蕾22.5个;在NLN-13培养基中添加10mg/L AG或10mg/L AGP,可以促进耐寒甘蓝胚状体发生。32.5℃热激胁迫1d可有效诱导耐寒甘蓝小孢子培养中的胚胎发生,10mg/L AG或10mg/L AGP促进胚胎诱导。     

高菜游离小孢子培养与植株再生

以3个高菜品种三池高菜、紫高菜、柳川大缩缅为试材,研究不同培养条件对小孢子胚诱导和植株再生的影响.结果表明:基因型是限制小孢子胚发生的主要因素,相同处理条件下,不同基因型之间出胚率有显著差异,紫高菜出胚率为16.00%,三池高菜出胚率为10.67%,而柳川大缩缅未产生小孢子胚;热激诱导时间对胚发生也有明显影响,当热激(33℃)时间为48-72h时出胚率有较大提高;转胚后适宜胚状体生芽培养基为85+0.02mg·L~(-1)TDZ+0.02mg·L~(-1)NAA+0.05mg·L~(-1)KT+1g·L~(-1)活性炭+30g·L~(-1)蔗糖+8g·L~(-1)琼脂,生芽率为88%;继代生根培养基以1/2MS+0.2mg·L~(-1)NAA+30g·L~(-1)蔗糖+8g·L~(-1)琼脂为宜,紫高菜生根率为100.00%,三池高菜生根率为96.00%.     

外源激素对甘蓝DH植株生长的影响

【目的】促进甘蓝胚状体再生DH植株在有限时间内健壮生长,根系粗壮,有利于当年提早移栽,进而植株生长达到通过春化营养体。【方法】以甘蓝小孢子培养获得的胚状体不定芽为试验材料,分别在MS+Suc 30g/L+Agar 8g/L培养基上添加不同浓度褪黑素(MT)(0,1,2,5,8和10μmol/L),在MS+Suc 30g/L+Agar 8g/L+5μmol/L MT培养基上添加不同质量浓度萘乙酸(NAA)(0,0.01,0.05,0.1,0.2和0.5mg/L),研究再生植株生长势,筛选再生植株快速健壮生长的培养基;再研究分析DH-A、DH-B和DH-C 3种基因型胚状体不定芽在MS+Suc 30g/L+Agar 8g/L+5μmol/L MT+0.1mg/L NAA培养基上再生植株的生长势,比较MT和NAA对不同基因型DH植株生长的影响。【结果】MS培养基添加MT有利再生植株生长,与对照相比,培养基添加5μmol/L MT处理再生植株净生长高度、茎粗、最大叶宽和叶片数分别增加1.33cm,0.17mm,0.67cm和2.60片,根系变长、侧根增多,翌年抽苔率提高20.0%;MS培养基添加5μmol/L MT和0.1mg/L NAA后再生植株健壮生长,与对照相比,再生植株净生长高度、茎粗、最大叶宽和叶片数分别增加1.90cm,0.52mm,0.88cm和3.00片,根系生长旺盛,翌年抽苔率提高26.6%;5μmol/L MT和0.1mg/L NAA对甘蓝DH植株的促进作用在3种不同基因型间无显著性差异,且DH-A、DH-B、DH-C翌年抽苔率分别较对照提高33.4%,20.0%和20.0%。【结论】在MS培养基中添加5μmol/L MT和0.1mg/L NAA,甘蓝胚状体DH植株生长势最好,当年炼苗移栽,冬前植株生长可达到一定的营养体。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4 mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA-3(0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】 在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和 GA-3 3种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25 d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35 d后诱导效果下降。【结论】 甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L;以生长日龄为25 d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA3(0.5,1.0,1.5,2.0mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和GA33种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35d后诱导效果下降。【结论】甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L;以生长日龄为25d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

叶用芥菜小孢子培养技术体系的完善及DH系创制

以3个优良的地方品种(杂合体)为试材进行游离小孢子培养,对胚诱导、植株再生、倍性分析和单倍体加倍技术进行研究,完善叶用芥菜小孢子培养技术体系,创制优良DH系应用于育种实践中。在小孢子培养中,选取花蕾是小孢子培养成功的关键,花瓣长/花药长为3/4,花药为黄绿色可作为叶用芥菜小孢子培养选取花蕾的形态指标;供试3个品种都获得胚状体,但品种间出胚差异较大,MR-1共45个胚/皿,MR-2共198个胚/皿,MR-3共4个胚/皿;子叶形胚接种于再生培养基上成株率达98%,获得128株再生植株,利用流式细胞仪鉴定出105株双单倍体,自然加倍率为82%,在组培苗期用0.1%的秋水仙素浸泡单倍体植株茎尖1h,加倍率为75%。从DH群体中筛选出4个优良DH系,通过品种比较试验鉴选出1个耐抽薹DH系,4月上旬开始抽薹开花,叶柄宽大肥厚,产量高,适合鲜食加工,可补充当地春淡市场。     

低温预处理和基因型对甘蓝型油菜小孢子胚胎发生的影响

以生长在大田自然环境下的16个甘蓝型油菜品种(系)和杂交组合为材料进行游离小孢子培养,探讨材料的低温预处理方式、处理时间、花序长度及其基因型对油菜小孢子胚胎发生的影响。结果表明,冷冻处理的油菜花序,其小孢子无胚胎发生能力;30～40cm长的花序冷藏处理10d,小孢子仍有一定的胚胎发生能力;花序长度在0～40cm时,用于处理的花序越长,则能进行小孢子胚胎发生的花序的有效处理时间越长;但随着花序处理时间的延长,小孢子产胚率有下降的趋势。此外,材料的基因型对小孢子产胚率有重要影响。