花粉管通道法获得转外源puroindoline基因小麦

[目的]验证pinA和pinB对小麦籽粒质地的影响。[方法]将含有控制硬度的主效基因pinA和pinB的单子叶植物高效表达载体pUBPa和pUBPb，分别通过花粉管通道法将其转入小麦品种中优9507（pinB-Dlb）中。[结果]获得了转基因植株，PCR检测和基因组Southern杂交证实了外源基因在受体小麦基因组中的整合，水洗淀粉表面蛋白的定量分析表明外源基因的导入影响了friabilin表达。与非转基因对照相比，小麦籽粒质地发生变化。[结论]结果表明，PINA和PINB共同作用形成frlabilin，从而直接影响小麦籽粒质地的形成。     

用花粉管通道法将bar基因导入水稻获得可遗传的转基因植株

利用花粉管通道法将抗Basta除草剂的bar基因导入水稻品系“E32” ,获得转基因植株。抗性鉴定表明 ,转基因植株能充分表达对Basta除草剂的抗性 ;通过对转基因植株后代进行PCR分析 ,证实bar基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明 ,bar基因能在有性生殖过程中传递给后代 ,并在T3 代开始分离出抗性一致的稳定株系     

Dip法获得转反义磷脂酶Dγ( PLDγ)基因拟南芥植株

在含反义PLDγ基因的质粒根癌农杆菌的介导下，以生长到初果期的健壮拟南芥植株为转基因材料，用Dip法进行转基因实验，对影响转化率的浸染条件进行了比较研究。适宜的转化条件是将拟南芥的整个花序浸泡于农杆菌悬浮液中(含5％蔗糖，0．04％吐温—80)，每次浸染10min，间隔3天浸染一次，共浸染3次。每次浸染后将植株横放于暗箱中24h，再置于22—24℃的光照下正常生长。待种子收获后在含有卡那霉素70mg/L的选择培养基中选择转化植株。PCR及PCR—Southem blot分析检测，该方法的转化率每100粒种子可高达2％。     

用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株

采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。     

利用农杆菌介导法获得转ipt基因半夏植株

以贵州珍珠半夏Pinellia ternate(Thunb.)Breit为材料,采用根癌农杆菌介导法,探索了影响半夏遗传转化效率的主要因子.结果表明,卡那霉素的最佳筛选浓度是100 mg/L,侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度对转化频率都有一定的影响.其中侵染时间为20 min,共培养时间为3 d,乙酰丁香酮的浓度控制在60～100 mg/L时可以有效提高遗传转化效率.在此基础上辅以超声波处理5 min,可以有效提高叶柄转化的瞬时表达率.对抗性转化植株进行Gus染色和PCR检测,结果表明外源基因ipt已经整合到半夏基因组中.     

根癌农杆菌介导反义蜡质基因获得水稻植株研究初报

采用根癌农杆菌介导法,将水稻反义蜡质基因导入寒地 4 个水稻品种(系)成熟胚的愈伤组织。这些愈伤组织经连续2 次 25~50 mg/L潮霉素抗性筛选,获得抗性愈伤组织的转化频率为12.15%~25.95%,经分化培养,不同品种的绿苗转化频率分别为 2.49%~4.43%。分化成苗的植株经GUS检测,80%以上的植株叶片呈阳性反应,显示兰色。经 PCR检测,也能扩增出外源基因相应的DNA片断,证明外源基因已整合到转基因植株中。     

农杆菌介导法转化大豆体细胞胚获得转基因植株

以六个品种大豆体细胞胚为受体,以Bt基因为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对大豆进行了遗传转化,经卡那霉素选择、诱导体细胞胚萌发及壮苗培养,获得了完整的抗性再生苗,经PCR、PCR-Southern和点杂交分析鉴定,初步证明外源基因Bt已整合到大豆的基因组中。     

大豆花粉管通道法导入外源DNA的适宜时期与方法探讨

花粉管通道法是主要由我国科学工作者发展起来的植物转基因技术。自70年代，由上海生物化学研究所的周光宇先生提出后，20年来，我国科学工作者通过该技术创造了一大批新型育种材料，有些并获得了新的商业品种。花粉管通道法是一个不依赖于组织培养的将外源基因转入受体的简便技术，易于被许多研究人员应用。有关大豆外源DNA直接导入时期与方法虽以陆续有过多次报道［1］，但实际操作起来不同地区还需要根据自己的实际，不断进行调整和经验的摸索。本文报道黑龙江省农科院合江农科所对大豆进行了外源DNA导入的适宜时期与方法的研究结果，以此供不同地区从事大豆有关研究的人员参考。     

Bt杀虫蛋白基因导入新疆棉花获得抗虫转基因植株

通过花粉管通道法将人工全序合成的Ｂｔ杀虫蛋白基因导入新陆早４号和Ｃ６５２４两品种中,收获注射地Ｂｔ杀虫蛋白基因的棉花种子２万余粒。经棉铃局喂的抗虫性生物检测,得到高抗虫的１８株新陆早４号转化苗和３６株Ｃ６５２４转化苗;以Ｂｔ基因的一对引物进行ＰＣＲ分析,５４株抗棉铃虫的转化棉花苗均扩增出部分Ｂｔ杀虫蛋白基因的目标带。未转化的对照棉花苗则无此条带,证实Ｂｔ杀虫蛋白基因已整合到转化抗虫棉株的染色体上,     

反义Wx基因导入我国常规籼稻品种的研究

经农杆菌介导，将自行克隆并构建的反义Wx基因导入4个高直链淀粉含量的常规籼稻品种绿黄占、清芦占11号、三芦占7号和特青中，经潮霉素抗性筛选获得抗性植株。聚合酶链反应(PCR)和Southern杂交检测证明反义Wx基因已整合进转基因水稻植株的基因组中。对成熟种子直链淀粉含量的分析表明，部分转基因水稻植株T1或T2代种子中的直链淀粉含量有不同程度的下降，最低的已降至16．52％，较对照下降了40．5％；在此基础上筛选获得了部分转基因纯合株系。研究结果还表明，盲链淀粉含量的改变会导致相应稻米的胶稠度和糊化温度的变化。     

大豆总DNA经穗茎注射与花粉管法导入春小麦的研究

采有穗茎注射，花粉管通道法，将大豆总DNA导入春小麦品种宁春四号和宁春16号，引起受体小麦穗长，穗粒数，粒型和化学品质等性状的广泛变异，对变异株进行筛选，获得了比受体蛋白质量提高2．0%-5．5％的变异株系，平均变异率为3．5％，SDS－PAGE结果显示变异株新增加的蛋白质相对分子质量的78．5，0，33．7的组分。     

花粉管导入法培育抗除草剂的转基因水稻

以含Ｂａｒ基因的ｐＡＨＣ２０为供体ＤＮＡ，上农香糯植株的稻穗为受体材料，采用花粉管导入法进行基因转化，经除草剂筛选，获得抗除草剂的围基因上农香糯后代；除草剂试验表明，转基因水稻种子的萌发和生长对降草剂的抗性比未转化的上农香糯强，差异达极显著。     

水稻花粉管通道法导入含Xa21总基因的研究简报

采用花粉管通道法，将含Ｘａ２１基因（广谱抗白叶枯病基因）的水稻（ｏｒｙｚａｓａｚｔｉｖａ）品种１１８８的总ＤＮＡ及ＰＢＩ１２１质粒ＤＮＡ导入丙１０６７、宁６７、繁７、宁波２号，２９３，浙７３３和舟９０３等七个品种（系）收获转基因的当代水稻种子并进行大田选育，将外源ＤＮＡ含有ＰＢＩ１２１的转化处理后代种子发芽，在１４天苗龄时分别提取水稻幼苗总ＤＮＡ而后经多种限制性内切酶酶切，并以ｇｕｓ基因片段为探讨     

野罂粟花粉管通道法转双价抗真菌病基因方法研究

以野罂粟开放花蕾为受体,以载有几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因双价植物表达载体pBLGC的质粒为供体,在11％浓度的蔗糖溶液中,加入花粉和含有目的基因的质粒DNA．得到药粉处理液。然后辅以人工授粉的方法将花粉处理液滴注野罂粟柱头上获得种子,将种子经卡那霉素筛选和PCR检测。有目的基因特异带出现。实践证明：在野罂粟上,利用花粉管通道法进行几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因转化方法可行,为特殊中药材转基因技术提供一个新方法。     

根癌农杆菌介导反义fad2-1基因转化大豆的研究

通过根癌农杆菌介导法将反义fad2-1基因导入大豆子叶节,研究了农杆菌菌液浓度、预培养时间、共培养时间、恢复培养时间、乙酰丁香酮浓度和pH值对大豆子叶节形成丛生芽的影响,建立了有效的转化体系,获得了转基因大豆再生植株。PCR、PCR-Southern blotting检测结果表明,反义fad2-1基因成功转入并整合于大豆基因组。GC检测结果表明,转反义fad2-1基因大豆种子油酸含量比非转基因大豆种子的油酸含量提高了14.44%,而亚油酸含量降低了20.27%。     

利用花粉管通道法将编码优质HMW-GS基因导入小麦进行品质改良的研究

利用花粉管通道法将编码麦谷蛋白HMW－GS 1Dx和1Dy10基因导入了小麦，经抗PPT筛选，PCR检测和HMW－GS组成分析等，选出了高产优质的转基因品系21K867，此外还讨论了提高花粉管通道法导入目的基因的遗传转化率和转基因系性状多样性等问题。     

农杆菌转化法将抗虫基因导入大豆获转基因植株

利用根癌农杆菌(Agrobacteriumfaciens)介导法将抗虫基因导入大豆子叶节。大豆无菌苗子叶节经过与根癌农杆菌共培养、卡那霉素抗性筛选获得96株抗性植株，经PCR和PCR—Southern鉴定，有4株为阳性株。     

利用花粉管通道法将耐草甘膦基因mG2-epsps 导入玉米自交系的研究初报

构建了含有耐草甘膦基因mG2-epsps的植物表达载体pUmG2,采用花粉管通道法将其导入优良玉米自交系X90中,对Tn代1542株植株进行草甘膦喷洒实验,共得到32株能够耐受0．25％草甘膦药液的抗性植株;对这32株抗性植株的PCR检测结果表明,其中29株为PCR阳性植株,平均转化率为1．88％;Southern杂交和Western杂交检测结果证明mG2-epspps基因已整合至玉米基因组并正确表达。     

花粉管通道法将Bt毒蛋白基因导入优良玉米自交系

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系为材料，用花粉管通道法介导质粒pGBIL04(actin.Bt.35S.bar）DNA的转化，经对T0代1403株植株Basta抗性筛选和PCR分子鉴定，共获得5株PCR阳性植株，分别为授粉后8，12，14，18h导入所得，总的平均转化率为0.36%。结果表明：只要掌握好导入时机，在玉米上用花粉管通道法转基因是完全可行的。     

利用花粉管通道法获得水稻变异材料

1999年对水稻花粉管通道法转化外源总DNA进行了初步研究,得到563粒种子,2000－2001年对后代材料进行了详细的观察和分析。结果表明：应用这种方法转化外源总DNA可以得到水稻变异材料,是一条切实可行、有效的方法。