胃蛋白酶和胰蛋白酶对大豆凝集素的稳定性研究

本研究以纯化的大豆凝集素(SBA)为研究对象,体外研究了动物体内两大主要蛋白消化酶即胃蛋白酶和胰蛋白酶对其酶解作用。试验通过SDS-PAGE方法分析了SBA经蛋白酶酶解后的降解程度;利用间接竞争ELISA方法测定其在酶解过程中的活性变化。结果表明:SBA可缓慢地被胃蛋白酶降解,SBA浓度越高,完全降解需要的时间越长;随着SBA的降解,SBA的活性也逐渐减小,随着酶解时间的延长活性消失速度也逐渐变慢,并且在本研究选取的酶浓度作用下,SBA浓度越高,活性减小的速度越快,但活性完全消失的时间延长。然而,SBA不能被胰蛋白酶降解,并且酶解过程中SBA的活性也保持完好,说明SBA对胰蛋白酶具有很好的稳定性。因本研究结果将为进一步揭示大豆凝集素在动物体内的消化动力学及其对机体的抗营养作用机理研究奠定理论基础。     

大豆抗原蛋白对小鼠肠上皮细胞吸收功能的影响

大豆中所含的大豆球蛋白和β-伴球蛋白会导致幼龄动物对营养物质的吸收功能发生下降,进而出现腹泻等症状。试验以自备分离纯化大豆球蛋白和β-伴球蛋白作为试验材料,以原代培养小鼠肠上皮细胞作为试验模型,研究了0、1、5和10mg/mL纯化大豆球蛋白和β-伴球蛋白对小鼠肠上皮细胞Na+-K+-ATP酶及小肽转运蛋白1(PEPT1)和二价金属离子转运体(DMT1)表达的影响。结果表明:大豆球蛋白和β-伴球蛋白能增强小鼠肠上皮细胞Na+-K+-ATP酶活性,降低PEPT1和DMTl基因的表达量,而且β-伴球蛋白的作用明显大于大豆球蛋白。     

伴大豆球蛋白酶解肽抑菌活性研究

建立伴大豆球蛋白酶解产生抑菌肽的最适条件,对酶解产物进行分离纯化后进一步测定其抑菌活性。采用复合风味蛋白酶水解伴大豆球蛋白,测定不同时间的酶解液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果显示:2 h水解产生的酶解肽具有抑菌活性,其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别是2.6和3.2 mg/mL。2 h水解液经Sephadex-G15分离纯化,采用平板计数法鉴定各组分。结果显示:CP2组分对大肠杆菌具有显著的抑制作用(P<0.05)。本研究证明伴大豆球蛋白的复合风味蛋白酶酶解肽具有一定的抑菌活性。     

大豆抗原蛋白对小鼠肠上皮细胞的影响

大豆中所含的抗原蛋白是引起幼龄动物发生过敏反应的重要原因之一。研究以自备分离纯化大豆球蛋白和β-伴球蛋白作为试验材料,以原代培养小鼠肠上皮细胞作为试验模型,研究0、1、5和10mg/mL纯化大豆球蛋白和β-伴球蛋白对小鼠肠上皮细胞完整性和免疫的影响。结果表明:超过5mg/mL大豆球蛋白和β-伴球蛋白能破坏小鼠肠上皮细胞完整性,抑制上皮细胞增殖。显著提高培养液乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(GOT)水平。大豆球蛋白和β-伴球蛋白能显著提高体外培养的小鼠肠上皮细胞炎性细胞因子(白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8))的分泌,促使其发生过敏反应。     

蒸汽处理对纯化大豆抗原含量及免疫原性的影响

将大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白分别从生、熟大豆中分离纯化后，通过电泳进行分析鉴定。将经过鉴定后的纯化抗原皮下注射18～22g的昆明小鼠，利用琼脂扩散试验及免疫酶技术检测所得抗血清与原有抗原是否发生免疫应答反应。结果表明，生大豆所得提纯样品中11S 2峰和7S 1峰分别为大豆球蛋白和β伴大豆球蛋白。蒸汽处理可使大豆球蛋白含量明显减少，免疫原性丧失；而β伴大豆球蛋白经同样处理后，含量虽稍有下降，其免疫原性却依然存在。     

伴大豆球蛋白水解肽体外抑菌活性试验

大豆贮藏蛋白主要由大豆球蛋白和伴大豆球蛋白组成[1-2],大豆肽是大豆蛋白质酶解的产物,具有多种生物活性作用。伴大豆球蛋白水解肽作为一种植物蛋白来源的多肽,已得到人们的广泛关注。而其抗菌活性研究方面的报道较少,并且很久以来被     

β-伴大豆球蛋白对仔猪抗营养阈值的研究进展

β-伴大豆球蛋白等抗原蛋白热稳定性较强,其抗原活性难以完全去除,可导致仔猪等幼龄动物产生过敏反应,从而影响其生理健康、日粮养分消化利用和生产性能。目前针对不同大豆制品在畜禽生产中的应用已有大量研究,但大豆抗原蛋白在幼龄畜禽日粮中的安全剂量尚不明确。本文对β-伴大豆球蛋白的理化性质及对仔猪的致敏机制、大豆制品中β-伴大豆球蛋白含量及大豆制品在仔猪生产中的应用进行综述,并对β-伴大豆球蛋白在仔猪日粮中的安全剂量进行探讨。     

大豆饲料产品中主要抗营养因子含量的检测与分析

本试验旨在应用间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)法以及色谱法测定不同加工工艺的大豆饲料产品中主要大豆抗营养因子大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子以及大豆中蔗糖、棉子糖和水苏糖的含量。采用ELISA试剂盒对国内257份大豆制品中大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量进行检测与分析;利用离子色谱建立了大豆产品中蔗糖、棉子糖和水苏糖的灵敏、准确的同步测定法,并对国内92份大豆制品中寡糖含量进行检测与分析。结果表明:发酵豆粕、膨化大豆、大豆浓缩蛋白和大豆分离蛋白中大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量相对较低;本试验所建立的离子色谱同步测定大豆中蔗糖、棉子糖和水苏糖的方法具有灵敏度和准确性高、重现性好的优点,适用于大豆寡糖的测定;通过对实际样品的检测和分析,发现发酵豆粕和大豆分离蛋白中3种大豆寡糖含量均相对较低。本试验所得到不同加工工艺的大豆产品中主要抗营养因子含量的相关数据将为大豆在畜禽饲料中的高效利用提供很好的技术支撑。     

植物乳酸菌发酵对大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白免疫活性及水解度的影响

本试验通过植物乳酸菌对豆粉进行液态发酵,在发酵24,36,48,60,72 h时采集发酵样品进行水解度和免疫活性的检测,结果表明:(1)48 h为植物乳酸菌发酵豆粉的最佳时间,可去除71.08%的β-伴大豆球蛋白和64.22%的大豆球蛋白的免疫活性(P＜0.01),对β-伴大豆球蛋白的去除程度显著高于大豆球蛋白(P＜0...     

蒸汽处理前后β-伴大豆球蛋白在仔猪消化道内免疫活性变化规律的研究

随机从2窝“杜长约”三元杂交仔猪中挑选12头,分成A、B、C3组,每组4个重复,公、母各半。21日龄断奶;22-26日龄,A组饲喂不舍任何豆科植物的代乳料,B、C组分别饲喂合纯化的蒸汽处理前、后β-伴大豆球蛋白的代乳料。26日龄全部屠宰,取胃、空肠中段、盲肠和结肠中的食糜,以测定消化道各部位β-伴大豆球蛋白的免疫活性。结果表明:随着消化道的延续,β-伴大豆球蛋白的免疫活性均呈下降趋势;与消化道其他部位比较起来,活性在胃和空肠下降幅度较大,到空肠中段基本丧失,从空肠中段到结肠无明显变化;整个消化道中,采食含未经蒸汽处理β-伴大豆球蛋白代乳料仔猪中β-伴大豆球蛋白免疫活性的下降幅度均小于采食含蒸汽处理β-伴大豆球蛋白代乳料的仔猪。     

胃蛋白酶-胰蛋白酶体外消化豆粕适宜条件的研究

本试验采用单因素试验设计.在恒温摇床中,用胃蛋白酶和胰蛋白酶体外酶解豆粕,从而确定胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法评定蛋白质的体外消化的最适条件.结果表明.优化后的胃蛋白酶-胰蛋白酶两步酶解处理豆粕的主要参数是:温度为37℃,转速85 r/min,底物的量为0.5 g,缓冲液pH为 1.2,胃蛋白酶酶浓度为 50 mg/mL,锥形瓶中消化 6 h 后,调节消化液的pH至7.5,添加 170 mg/mL 胰蛋白酶溶液,在39℃恒温摇床中培养18 h.     

伴大豆球蛋白水解肽的制备及其对沙门氏菌增殖的影响

利用等电沉淀和盐析的方法,获得大豆球蛋白,并通过Sepharose-CL-6B凝胶柱层析分离纯化,得到单一组分,经SDS-PAGE鉴定为纯化的7 S伴大豆球蛋白,然后将其用胃蛋白酶水解得到伴大豆蛋白水解肽(PTC)。通过96孔细胞培养板2倍稀释法,对不同浓度的伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽(6,3,1.5和0.75 mg/mL)与沙门氏杆菌共同培养,观察了伴大豆蛋白水解肽对沙门氏杆菌增殖的影响。结果发现,添加不同浓度的伴大豆蛋白水解肽可以影响沙门氏菌的增殖,其中6 mg/mL和3 mg/mL的PTC对沙门氏菌的生长产生明显的抑制作用,1.5 mg/mL的PTC对沙门氏菌作用不明显,而0.75 mg/mL的PTC有微弱的促进作用,表现一定的营养作用。     

β-Conglycinin酶解肽对仔猪空肠上皮细胞通透性及紧密连接蛋白表达的影响

本研究通过测定大豆抗原β-Conglycinin酶解肽(52ku)对仔猪空肠上皮细胞(IPEC)通透性及紧密连接蛋白Occludin与ZO-1基因mRNA表达的影响,为探索其对肠道损伤的相关机制提供依据。本试验分别采用不同浓度(0、0.125、0.25、0.5、1、2mg·mL-1)52ku酶解肽处理IPEC 2、4、6、8、12、24h后,通过测定细胞存活力(MTT值)、跨上皮细胞电阻值(TEER)以及细胞培养液中碱性磷酸酶(AP)的活性,检测52ku酶解肽对细胞膜通透性的影响。并选取0.5mg·mL-1 52ku酶解肽处理IPEC 24h后,用实时荧光定量PCR方法检测Occludin与ZO-1基因mRNA表达量的变化情况。结果表明,52ku酶解肽处理仔猪空肠上皮细胞后,MTT值和TEER呈时间-剂量依赖性降低(P0.05)。24h处理后,AP活性呈显著升高趋势(P0.05)。与对照组相比,52ku酶解肽可使Occludin和ZO-1基因mRNA相对表达量均呈显著下降趋势(P0.05)。总之,52ku酶解肽使仔猪空肠上皮细胞通透性增加,并降低Occludin或ZO-1的mRNA表达。     

大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的研究进展

大豆是一种高蛋白含量的作物,在畜禽养殖中多用作蛋白饲料,但其中含有的抗营养因子限制了大豆的使用。大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白是主要的抗原蛋白。本文介绍了大豆球蛋白及β-伴大豆球蛋白的结构、抗营养作用和抗原性的消除方法。     

角蛋白酶水解豆粕参数优化对营养价值的提升

研究旨在通过优化嗜热厌氧杆菌(Keratinibaculum paraultunense) KD-1角蛋白酶酶解豆粕条件来达到提高豆粕营养价值,改善其功能的目的。以酸溶蛋白含量为指标,采用单因素试验和正交试验优化豆粕酶解条件。结果表明,酶解豆粕的最佳条件为:酶解温度85℃,底物浓度10%,酶解时间3 h。经KD-1粗酶液酶解后,豆粕中的粗蛋白质、酸溶蛋白、游离氨基酸等营养物质含量显著增加(P0.05);脲酶、棉籽糖、水苏糖、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、胰蛋白酶抑制因子等6种抗营养因子含量显著下降(P0.05)。结果显示,豆粕经角蛋白酶酶解后,其营养价值显著增加,功能得到了改善。     

玉米黄粉免疫活性肽的制备工艺

试验以玉米黄粉蛋白为原料,采用小鼠脾淋巴细胞增殖试验检测小鼠胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶等5种酶的免疫活性。结果表明,胰蛋白酶酶解物对小鼠脾淋巴细胞刺激显著(P0.05),小鼠脾淋巴细胞的增殖指数(SI)为1.679,可作为制备玉米黄粉免疫活性肽的最适水解酶。以加酶量(E/S)、p H和底物质量浓度作为研究对象,在单因素试验的基础上,采用正交试验进行4因素3水平分析,得到最佳酶解条件:加酶量2.0 g/L、pH 8.0、底物质量浓度80.0 g/L和酶解温度40℃;酶解90 min;在这个条件下,玉米黄粉免疫活性肽水解度可达12.50%。     

小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的体外抗氧化活性研究

试验旨在研究小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白的分子质量分布和体外抗氧化活性。试验采用单因素完全随机设计,以维生素C为对照,分别测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白在0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL浓度下对DPPH自由基、羟自由基和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基的清除率,并通过测定T-AOC吸光度值计算总还原力。结果表明：使用高效液相色谱测定小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白重均分子质量分别为513 u和551 u,二者分子质量小于1 000 u的比例分别为90.22%和86.93%。在一定浓度范围内,随小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白浓度的升高,其体外抗氧化性能线性增加（P<0.05）,且呈正相关关系。在10 mg/mL浓度时,小麦胚芽肽对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别为90.39%、70.66%、96.24%和2.23,大豆酶解蛋白对DPPH自由基、羟自由基和ABTS自由基清除率和总还原力分别达到65.55%、68.21%、75.14%和0.51。综上,在本试验条件下,不同浓度小麦胚芽肽和大豆酶解蛋白均具有一定的抗氧化能力...     

大豆β-伴大豆球蛋白研究进展

在大豆抗原蛋白的研究中,β-伴大豆球蛋白的研究比较重要。在其结构和特性方面,β-伴大豆球蛋白的α′亚基和该亚基上的Soymetide研究较为深入,并且摄入β-伴大豆球蛋白与体内甘油三酯含量有一定关系。很多研究表明,仔猪腹泻、犊牛腹泻的主要诱因来自于抗原性蛋白所引起的体内消化道免疫反应。不同的加工工艺如挤压膨化、乙醇浸提,可以降低β-伴大豆球蛋白对于机体的损害,本文还基于现在的研究提出了进一步的展望。     

酶解豆粕工艺参数的探索和优化

本试验旨在研究酶解参数(料水比、温度、酶添加量和处理时间)对角蛋白酶降解豆粕β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白效果的影响,并以小麦麸为酶解豆粕的辅料探究酶解豆粕干燥速率和干燥后物料结块程度。结果表明:在本试验条件下,25℃、添加6 kg/t角蛋白酶、料水比为5:4、酶解24 h,豆粕中约60%的β-伴大豆球蛋白和37%的大豆球蛋白被降解;65℃恒温干燥后,与纯酶解豆粕相比,添加30%小麦麸的酶解豆粕的干燥速率变化不大,但是干燥后物料结块现象不明显;纯豆粕酶解干燥后,6目大颗粒占总物料含量由0增加至7%,6~18目颗粒占总物料含量由20%增加至40%;添加30%小麦麸的豆粕酶解干燥后,6目大颗粒含量变化不明显,6~18目颗粒含量由25%增加至30%。综上可知,在本试验条件下,酶解豆粕中添加30%小麦麸能够有效降低豆粕中的抗营养因子以及减少在高水分条件下酶解豆粕结块。     

蛋白酶在体外对豆粕球蛋白和β-伴球蛋白降解效果的研究

本试验旨在体外评估几种蛋白酶对豆粕中球蛋白和β-伴球蛋白的降解效果,为饲用蛋白酶效果的快速评估提供依据。试验设4个处理(3个蛋白处理组和1个空白对照组),每个处理3个重复,蛋白酶DP100、蛋白酶J和蛋白酶K的添加量分别为1%、0.25%和0.3%,为各蛋白酶制剂产品推荐添加量的20倍。豆粕和豆粕加酶样品在相同的缓冲体系中酶解,用试剂盒检测豆粕酶解前后球蛋白和β-伴球蛋白的含量,进而评估不同蛋白酶对豆粕中球蛋白和β-伴球蛋白的降解效果。结果表明:豆粕中球蛋白和β-伴球蛋白的含量分别为13.47%和13.96%,占豆粕总蛋白含量的29.6%和30.3%;不同蛋白酶在体外对豆粕中球蛋白和β-伴球蛋白的降解幅度不同,蛋白酶DP100、蛋白酶J和蛋白酶K对豆粕中球蛋白降解率分别为73.3%、5%和5.9%,对豆粕中β-伴球蛋白的降解率分别52.1%、8.4%和0%。表明,蛋白酶DP100在体外对豆粕中球蛋白和β-伴球蛋白的降解效果明显优于蛋白酶J和蛋白酶K。