食品中克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)双重PCR检测方法研究

根据克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)16S rRNA基因以及局部大分子合成(MMS)操纵子特异序列设计2对引物,经反应体系和条件优化,建立了双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,Cronobacter spp.菌株PCR扩增均可见2条特异性条带,而其他菌株PCR扩增均为阴性。纯菌检测双重PCR的灵敏度为6.3×103 CFU.mL-1,而相对应单重PCR的灵敏度分别为6.3×101 CFU.mL-1和6.3×103 CFU.mL-1;人工污染的食品样品(奶粉、牛奶、鸡肉)在经过24 h增菌后,检测限均可达100 CFU.mL-1或100 CFU.g-1。在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)存在的条件下,双重PCR的检测限没有受到影响。表明本试验建立的双重PCR检测方法具有很好的特异性和灵敏度,能克服食品样品基质及杂菌的干扰,可应用于食品中Cronobacter spp.的检测。     

食品中阪崎克罗诺杆菌的药物敏感性及分子分型研究

克罗诺杆菌是一种革兰氏阴性菌,是配方粉中威胁婴幼儿健康的主要致病菌。近年来,乳制品及食品中常有克罗诺杆菌耐药株的报道,耐药株的出现给临床治疗带来巨大挑战。为探究PFGE型别与耐药表型之间的关联性,采用BD PhoenixTM-100全自动细菌鉴定及药敏系统对食品分离的68株阪崎克罗诺杆菌进行药敏检测,共选择19种抗生素,并采用PFGE对其进行分子分型。结果表明：4株阪崎克罗诺杆菌具有耐药性,耐药率为5.88%。其中,3株对头孢唑啉耐药,1株对四环素耐药。18株菌表现为中介,其中16株对头孢唑啉中介,2株对氯霉素中介。所有菌株对其余16种抗生素均敏感。68株阪崎克罗诺杆菌可分成58个PFGE带型,其中PT037、PT050、PT054、PT007、PT043及PT046带型分别含有4、3、3、2、2、2株菌,其余52个带型各含1株菌,带型较分散。3株头孢唑啉耐药菌株包含3个PFGE带型,18株中介菌株包含16个PFGE带型。检测的阪崎克罗诺杆菌食品分离株耐药率较低,未发现多重耐药菌株,且呈现出高度基因多态性,菌株PFGE带型与耐药性之间无明显相关性。     

阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数实时定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值。[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测。     

阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及特性分析

本研究以灭活阪崎克罗诺杆菌（CS）为免疫原免疫BALB/c小鼠,5次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合。利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,制备抗CS特异性单克隆抗体。对单克隆抗体进行效价及特异性测定,确定其抗体亚型及单克隆抗体之间的抗原竞争性。结果表明：经4次亚克隆后得到2株稳定产生抗体的细胞株,分别命名为9D10、2H2,9D10抗体和2H2抗体效价较高,分别为2×106、6×106;9D10抗体和2H2抗体与单增李斯特菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌等均不发生交叉反应,特异性良好;2株抗体重链均为IgG2a,轻链均为Kappa;2株抗体之间无抗原竞争性。抗CS单克隆抗体的制备可为其快速检测方法的建立提供基础。     

陕西市售婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌流行状况及相关特性研究

对陕西省62个品牌的366份市售婴幼儿配方乳粉和米粉及其他食品中阪崎克罗诺杆菌的污染状况进行调查,并对分离株的相关特性进行分析,旨在阐明陕西市售婴幼儿食品的食用安全性。结果表明,87份样品检出阪崎克罗诺杆菌阳性,平均检出率为23.8%。乳粉阳性样品检出率为18.3%,米粉为27.3%,其他婴幼儿配方食品检出率20.0%。共检出169株阪崎克罗诺菌,其中168(99.4%)株对利福平产生抗性,对其他抗生素耐药的菌株比例依次为阿莫西林20.12%、链霉素18.93%、四环素17.16%、氨苄西林12.43%、庆大霉素11.24%和头孢曲松0.59%等。135株(79.88%)分离株携带ompX基因,120株(71.01%)携带cpa基因、111株(65.68%)携带sip基因、93株(55.03%)携带hly基因。按照95%的相似性,169株分离株脉冲场凝胶电泳(Pulse field gel electrophoresis,PFGE)分型后可被分为4个大簇、8个小簇和1个单基因型,部分源于不同品牌或批次食品的菌株基因型相似性较高,表明陕西省市售婴幼儿配方粉及婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌染问题不容忽视,存在严重的食品安全危胁。     

婴幼儿配方乳粉中阪崎肠杆菌检测方法探讨

通过对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的菌落形态、生化特性等方面的试验,确定采用灭菌蒸馏水(DW)前增菌、肠道菌增菌肉汤(EE)增菌、显色培养基(X--αGlcA)分离培养、再以API20E生化系统鉴定的方法为检出该菌的理想方法。     

辣椒制品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,在一定条件下可引起人和动物致病。为了加强对食品中有害细菌的监管力度,在对1份辣椒制品实施大肠杆菌常规项目检验的过程中分离出可疑菌株,经分离培养、革兰氏染色、API 20E和全自动VITKE 2生化反应鉴定及实时荧光PCR检测,确定该可疑菌株为阪崎肠杆菌。表明,辣椒制品存在阪崎肠杆菌的污染风险。     

北美冬青的园林特性及其应用

北美冬青是冬青科冬青属多年生落叶灌木,是秋冬切枝、环境美化和盆栽的优良观赏树种,近年来引种到我国的多个品种表现出较强的抗性和适应性,具有很大的推广应用价值和市场潜力。本文系统阐述了北美冬青的园林特性、观赏特性以及栽培管理和病虫害防治措施,提出了北美冬青在我国园林绿化中的主要应用途径,并对其在园林应用过程中可能遇到的问题进行了综合分析。     

一种基于TaqMan探针法的阪崎肠杆菌qPCR全自动检测技术体系的建立

[目的]建立快速准确地检测食物样品中食源性致病菌的体系。[方法]配套湖州市微生物制剂与农产品安全重点实验室自主研发的微生物分子检测仪,建立一种基于Taq Man探针法的阪崎肠杆菌q PCR检测体系。[结果]体系建立成功,标准曲线斜率为-3.44,R~2=0.995 5,扩增效率为95.3%。[结论]该q PCR体系特异性强,灵敏度高,明显缩短了检测时间,并具有良好的稳定性与重复性,为食品中阪崎肠杆菌的高通量和自动化检测提供了一个新的途径。     

Establishment of Real-Time Ouantitative PCR Method for Determination of Transposon Copy Number in Cronobacter sakazakii

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法.[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值.[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝.[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测.     

麻花头属植物化学成分研究进展

麻花头属植物所含化学成分以植物蜕皮甾体类为主,另外也有类黄酮、倍半萜等其他类型的化合物.该属植物的药理作用广泛,主要表现在抗炎、抗肿瘤、增强免疫力、降低胆固醇等方面.作者综述近50年来国内外对于麻花头属植物化学成分和相关生物活性的研究成果,并对其中的植物蜕皮甾体类成分的结构进行总结,另对该属植物的研究开发前景进行了讨论,以期推动对该属植物资源的进一步研究与开发利用.     

绿僵菌的研究进展

综述了近年来国内外对绿僵菌属的分类、绿僵菌入侵寄主过程中的相关基因的研究、剂型开发等方面的概况。     

道地药材红豆杉规范化种植研究进展

基于中草药材规范化种植(GAP)的研究思路,系统地综述了红豆杉品种选择、繁育技术、生产管理,以及采摘粗加工整个过程的研究进展;并针对红豆杉GAP基地建设中的薄弱环节提出红豆杉研究方向,即优树选择的系统规范化,环境影响的重要性与目的性,施肥与激素影响的效用性、实用性,采摘的科学性,储藏与粗加工条件的规范化,原料质量的检测等。     

红豆杉繁殖与栽培研究进展

详细阐述了国内外红豆杉种子繁殖、扦插繁殖的研究进展,综述了施肥、光环境对红豆杉生长和紫杉醇含量影响的研究,评述了取得的成果及存在的不足,并提出今后的研究方向。     

中国东北地区落叶松球果花蝇研究进展

落叶松球果花蝇是中国东北地区落叶松球果种子的重要害早。国内对这一种团的种类的组成，生物学特性，防治及测报做了大量研究工作。目前，在东北地区落叶松球果内已知有７种：黑胸球果花蝇，贝加尔球果花蝇，稀球果花蝇，斯氏球果花蝇，落叶松球果花蝇，黄尾球果花蝇，方氏球果花蝇。     

鸢尾属植物育种研究进展

对近年来国内外有髯类鸢尾和无髯类鸢尾育种研究的进展和成果进行了综述。针对我国鸢尾属植物育种现状提出了见解并作出了展望,旨在推动我国鸢尾育种研究的进程。     

绿僵菌发酵工艺的研究进展

综述近年来国内外对绿僵菌发酵工艺研究的最新进展,主要包括液体深层发酵、固体发酵和液固双相发酵这三种发酵工艺。介绍每种发酵工艺的发酵流程、培养基质、影响因素、应用情况和优缺点。     

拮抗木霉菌的生防机制研究进展

从拮抗木霉菌的抑茵作用机理、诱导抗病性、促进植物生长等方面对木霉菌生防机制的研究进行了综述,并对其应用前景进行了概括。从生防功能的多样性来看,木霉菌是一种理想的生防菌株和难得的生防资源。