转Cry1Ac+Cry2Ab抗虫棉对3种害虫的存活、生长发育及中肠相关酶活性的影响

 以转Cry1Ac基因棉花和常规非转基因棉花为对照,系统研究了转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花对棉铃虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾的存活、生长发育及中肠酶活性的影响。研究结果表明,与常规棉对照相比,转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花和转Cry1Ac基因棉花叶片对3种害虫的慢性毒性差异较大,对每种害虫的抗性程度也有一定的差异;饲喂转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花和转Cry1Ac基因棉花叶片的3种害虫幼虫生长发育进度明显缓慢、体重明显减轻,相关酶活性也有不同程度的变化,但每种酶的变化有一定的差异。     

苏云金芽孢杆菌Cry1Ab和Cry1C同源重组及转化大豆

在研究和确定Cry1Ab和Cry1C蛋白对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾协同杀虫作用的基础上,利用同源重组技术进行Cry1Ab和Cry1C之间的结构域交换获得高效融合蛋白,利用农杆菌介导的子叶节法将融合抗虫基因表达载体导入大豆中,从而获得抗虫转基因大豆新材料。采用PCR及蛋白试纸条检测法对获得的大豆再生植株进行鉴定,测得结果初世代阳性植株为121株。对部分后代转基因植株的遗传分析表明外源基因能够稳定遗传。室内接种斜纹夜蛾鉴定表明,含有重组基因的转基因大豆对斜纹夜蛾有较强的抗性。因此,利用同源重组技术进行Cry1Aa和Cry1C之间的结构域交换,是获得高抗食叶性害虫大豆的有效途径。     

澳大利亚批准孟山都第三代抗虫保铃棉-Ⅲ

正澳大利亚农药和兽药管理局(APVMA)建议批准孟山都公司的转基因棉花产品——抗虫保铃棉-III,用于防治棉铃虫和甜菜夜蛾。孟山都表示,抗虫保铃棉-III为棉花种植者提供了更强大的抗性管理手段。在抗虫保铃棉-II中发现了Bt蛋白(Cry1Ac和Cry2Ab),而在抗     

长江流域虫害对转Bt基因抗虫棉的危害与防治措施

近几年,随着Ｂｔ抗虫基因成功导入棉花中,涌现出了一批具有优良性状的棉花品种,并已在长江流域棉区迅速推广普及。但由于转Ｂｔ基因抗虫棉的抗虫特性决定其虫害发生规律与常规棉比有很大不同,所以二者治虫策略也有很大不同。如果掌握不好这些规律,在引种热潮中就容易出偏差,抗虫棉就不能实现真正的高产、优质、抗虫。１　转Ｂｔ基因抗虫棉的抗虫特性及虫害发生规律１．１　仅抗鳞翅目害虫,且对鳞翅目各种不同害虫抗性有强弱,其顺序为棉铃虫、玉米螟大于红铃虫、卷叶蛾、造桥虫大于地老虎、斜纹夜蛾,对后两种害虫抗性很差。１．２　…     

Zwittermicin A对Cry1Ac杀虫活性的增效作用

Zwittermicin A (ZwA)能够增加苏云金杆菌(Bacillus thuringienesis,Bt)Cry1Ac蛋白的杀虫活性.生物测定使用生长在人工饲料上的甜菜夜蛾幼虫.用 Cry1Ac蛋白单独处理甜菜夜蛾初孵幼虫,体重抑制活性明显,杀虫活性较低;单独用ZwA处理时无杀虫活性.当ZwA浓度为0.1 mg/mL、Cry1Ac浓度为1 mg/mL时,48 h校正死亡率达90%.对甜菜夜蛾5龄幼虫进行生物测定,当用25 μg ZwA和5 μg Cry1Ac分别饲喂试虫时,无杀虫活性;用25 μg ZwA和5 μg Cry1Ac同时饲喂试虫时,84 h试虫全部死亡.对甜菜夜蛾5龄幼虫中肠组织切片分析发现,口服25 μg ZwA和5 μg Cry1Ac的幼虫12 h,中肠变细小,中肠壁变厚,围食膜无法正常形成;36 h后中肠壁逐渐恢复正常,围食膜重新形成.     

给广大棉农提个醒抗虫棉治虫不可忽视

近日,笔者调查发现,现在仍有不少棉农片面地认为,既然是抗虫棉就不用防治任何虫害了,其实不然。这是因为目前推广的抗虫棉只对棉铃虫、红铃虫等鳞翅目害虫具有抗性,而对地下害虫、红蜘蛛、棉蚜、盲椿象等却没有抗性,对甜菜夜蛾的抗性也不够理想。在此,笔者特提醒广大棉农朋友：     

苯甲酰脲类杀虫剂中第一大产品虱螨脲登记情况分析

正虱螨脲是苯甲酰脲类杀虫剂中的第一大产品,在国内主要应用在柑橘、蔬菜、棉花、玉米、果树等作物上。虱螨脲可防治多种害虫,对多种鳞翅目害虫有高效,还可用于防治刺吸式口器害虫,特别对甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、玉米螟、粘虫、草地贪夜蛾、棉铃虫等抗性害虫具有优异的药效。最早在1993年,先正达最先上市虱螨脲,主要应用在玉米上。其杀虫机理是通过抑制幼虫几丁质合成酶的形     

针对棉花害虫新变化调整防治措施

<正>4月上中旬以来,我国棉花先后进入了播种育苗时期,棉花害虫也将陆续入侵棉田。近几年来,广大棉区基本普及了转基因杂交抗虫棉或者常规抗虫棉,随之,棉花的害虫群体结构也悄悄地发生了一些变化。过去为害比较严重的棉铃虫、红铃虫已转为次要害虫,棉盲蝽、棉粉虱、甜菜夜蛾在很多地方已上升成为主要害虫。提起这三类害虫,植棉农民常大吐苦水。一、棉盲蝽。棉盲蝽种类很多,其     

转Bt基因抗虫棉病虫草害防治

<正> 转Bt基因抗虫棉是利用现代生物技术将苏云金杆菌(简称Bt)的杀虫蛋白基因导入棉花植株体内而培育出来的棉花新品种。由于转Bt基因抗虫棉自身能产生杀虫蛋白,对棉铃虫等鳞翅目害虫有较好的抗性,减少了化学农药的用量和使用次数,降低了植棉成本,减少了农药对农田生态系统的破坏,受到了普遍欢迎。但是,由于转Bt基因抗虫棉品种繁多,不同品种之间抗虫性差异较大,加之宣传误导,棉农认为"抗虫棉"就是"无虫棉",不需要用药防治,结果导致部分抗虫棉抗性差、棉铃虫发生较重、非靶标害虫严重发生的现象。针对抗虫棉生产中存在的问     

对Bt毒蛋白不同抗性水平棉铃虫品系的生物学研究

用对Bt毒蛋白(Cry1Ac)具有一定抗性水平的安阳品系和相对敏感的新疆品系棉铃虫进行Bt毒蛋白(Cry1Ac)的室内毒力测定结果表明,两品系的LC50值分别为8.7645g·L 1和0.2547g·L 1,前者是后者的34.4倍。用转Bt基因抗虫棉中棉所29和常规棉花品种中棉所35蕾期的倒3叶饲养安阳品系和新疆品系棉铃虫的初孵幼虫(孵化后24h),结果表明:两个棉铃虫品系在取食抗虫棉后的累计校正死亡率在1～2d内差异不明显;新疆品系棉铃虫在转Bt基因抗虫棉上发育的最高龄期为4龄,其比率为6.7%;而安阳品系部分棉铃虫能够在转Bt基因抗虫棉上完成生长发育,其4龄幼虫的比率为45.5%,5、6龄幼虫的比率分别为12.6%和3.8%,有1.6%的幼虫能够正常化蛹;用常规棉棉叶饲养的安阳品系和新疆品系棉铃虫各龄幼虫的发育历期差异不显著,而用转Bt基因抗虫棉棉叶饲养的安阳品系棉铃虫幼虫的发育历期与新疆品系虽然差异不显著,但前者的发育历期均短于后者。     

转基因棉对棉蚜生长发育及其主要代谢物质含量的影响

近年来,转基因棉田非靶标害虫种群数量呈明显的上升趋势,棉蚜是转Bt(Bacillus thuringiensis)基因棉田发生危害较严重的非靶标刺吸性害虫之一.在实验室内,棉蚜分别用转Bt基因棉和亲本常规棉饲养40代以上,采用酶联免疫法( ELISA)检测转Bt基因棉SGK321上棉蚜体内的Bt蛋白含量,研究转Bt基因...     

昼夜不同温度对2种Bt棉苗期叶片杀虫蛋白表达量和棉铃虫死亡率的影响

为探讨Bt棉的抗虫性对不同昼夜温差变化的响应机理,应用生物测定和ELISA方法,于苗期对2种不同来源的Bt棉棉株进行连续96 h的不同昼夜温度处理,用处理后的叶片饲喂棉铃虫,研究昼夜温度变化对Bt蛋白表达及棉铃虫死亡率的影响。结果表明,白天高温35℃,夜间低温18℃,能显著影响Bt棉蛋白表达量和幼虫死亡率,且随着胁迫时间的延长,杀虫蛋白含量和幼虫死亡率急剧下降;虽然白天高温35℃,夜间正常温度28℃,也会影响杀虫蛋白表达量和幼虫死亡率,但影响程度较小,且随着胁迫时间的延长,Bt蛋白的下降幅度趋于稳定。2个不同基因来源的品种间,美国棉‘邯杂154’蛋白表达量高于‘皖棉11’,且美国棉品种受到昼夜温度变化的影响较小。白天极端高温,晚上极端低温可以显著影响Bt棉抗虫性,并且胁迫时间越长,影响越强,该研究结果将为中国棉花种植过程中经常出现的极端天气下Bt棉的抗虫性安全应用提供理论基础。     

Constitutive expression of Cry proteins in roots and border cells of transgenic cotton

Transgenic cotton plants expressing Cry1Ac and Cry2Ab, from the soil bacterium Bacillus thuringiensis (Bt), provide effective control of certain lepidopteran pests, however, little is known about the proteins below ground expression. We used ELISA to quantify in vitro expression of the Cry1Ac and Cry2Ab proteins in mucilage, root border cells and root tips in five transgenic cultivars of cotton compared to conventional cultivar Sicot 189. Expression of Cry proteins in roots and border cells of the transgenic cotton cultivars was constitutive and at detectable levels, with Cry1Ac and Cry2Ab protein expression ranging from <20 ppb to >100 pbb. To determine if genetically modified cotton demonstrated simple differences in properties of the root, when compared to an elite parental line (cv. Sicot 189), we enumerated border cells on seedling radicles. Border cell counts of 14 cultivars ranged from 0.2 to 1.1 × 10⁴ cells per root tip with an average of 5 × 10³ border cells. Border cell production in the transgenic cultivars was generally similar to that of both donor and elite parents, the exception being the cultivar Sicot 189, which had substantially more border cells than all of its transgenic derivatives. Comparison of border cell number with varietal disease resistance ranking found a limited relationship (r ² = 0.65, n = 7) between border cell numbers and the commercial resistance rank against Fusarium wilt of cotton. The implications of differences in cotton cultivar border cell number and root tip expression of Cry proteins for plant–microbe interactions in the rhizosphere and the soil ecosystem are yet to be resolved.     

双抗夹心酶免疫法检测转Bt基因抗虫棉种子的研究

 应用中国农业大学化控中心筛选的抗Bt Cry1Ac蛋白鼠单克隆抗体和兔多克隆抗体，建立了Bt Cry1Ac蛋白的双抗夹心酶联免疫检测法（Sandwich ELISA）。该方法的检测范围为0.78~50.0 ng·g^-1，线性回归方程y=0.6634x-1.7387，决定系数为0.992。该方法与国外商业化试剂盒检测结果完全一致，可用于转基因抗虫棉Bt毒蛋白定性和定量检测。采用所建立的方法对亲本之一为非转基因抗虫棉的杂交F₁、F₂种子进行检测，结果F₁全部为阳性，F₂阴性和阳性数量比为1∶3，符合性状分离定律；此外，模拟检测种子的偶然基因改造成分混杂（Adventitious Presence，AP）检测结果为：对于Bt毒蛋白含量在140 ng以上的单粒种子，最低检测比例为1∶110。     

黄河流域田间棉铃虫对转Bt基因棉抗性监测

利用改进的单雌系F1/F2代法,对黄河流域主要棉区河南安阳县、河北威县、山东武城县的棉铃虫种群进行了系统监测。在2007-2009年,连续3年保守地估计了以上3个主要植棉县棉铃虫种群对Cry1Ac的抗性基因频率。结果表明,山东武城棉铃虫种群3年的抗性等位基因频率分别为0.00086、0.00097和0.00052;安阳田间棉铃虫种群2008和2009年抗性等位基因频率分别为0.00090和0.00103;河北威县的田间棉铃虫种群抗性等位基因频率为0。所有家系F1代和F2代的相对平均发育级别均值比较结果显示,山东武城县棉铃虫种群耐受性高于其它2个地区,其次为安阳县种群,威县种群敏感度最高。总之,我国黄河流域这3个主要棉区田间棉铃虫种群对Cry1Ac毒素还没有产生明显的抗性,抗性基因频率仍处于正常水平,但是棉铃虫对Cry1Ac毒素的耐受性有升高趋势,需要进一步加强全国性的监测工作。     

一株苏云金芽孢杆菌的分离与杀虫基因的鉴定

采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。     

Agrobacterium-meditated Genetic Transformation of an Upland Cotton (Gossypium hirsutum cv Coker 310) Using a Novel Bt Gene Cry 2Ac

The development of transgenic cotton varieties resistant to bollworms has been a major success of applying plant genetic engineering technology to agriculture,evidenced by phenomenal increase in the cultivable area under (B.thuringiensis) Bt cotton in recent years worldwide.Of late,there are reports of insects developing resistance against the most commonly used Bt toxin CrylAc.Hence,there is an urgent need to broaden the source of resistance by employing new genes in order to reduce the chances of insects developing Bt resistance.Keeping this objective in view,cotton (Gossypium hirsuturn cv Coker 310) plants expressing a novel insecticidal crystal protein Cry2Ac were developed in the present study.     

烟夜蛾幼虫中肠Bt Cry1Ac毒素受体蛋白cDNA片段的克隆和序列测定

利用RT-PCR技术扩增烟夜蛾(HelicoverpaassultaGuen啨e)幼虫中肠Bt毒素Cry1Ac受体蛋白APN(N-氨基肽酶,aminopeptidaseN,APN)基因片段,克隆和测序结果表明,测序得到的812bp的片段编码270个氨基酸残基,且该片段在阅读框内。通过同源性分析发现,其核苷酸序列与棉铃虫(H.armigera)、澳洲棉铃虫(H.punctiger a)、烟芽夜蛾(H.virescens)、舞毒蛾(Lymantriadispar)、小菜蛾(Plutellaxylostella)、印度谷螟(Plodiainterpunctella)RC688品系和HD198品系、烟草天蛾(Manducasexta)和家蚕(Bombyxmori)的Cry1Ac受体蛋白基因的同源性分别为97.0%,90.0%,78.0%,63.5%,55.0%,60.3%,61.2%,55.0%和59.0%。推导的烟夜蛾Cry1Ac受体蛋白基因的氨基酸序列与棉铃虫、烟芽夜蛾、斑实夜蛾、舞毒蛾的氨基酸序列同源性分别为95.6%,81 0%,82 7%和55 7%。该片段编码的氨基酸属于氨肽酶家族,与烟夜蛾对BtCry1Ac毒素的抗性有关。     

转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎生长发育的影响

测定了转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎的致死作用及生长发育的影响。结果表明,与常规棉对照相比,转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎幼虫具有一定程度的控制作用,但不理想;转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎幼虫的生长发育有较大的影响,表现为使各虫态发育历期延长,化蛹时间和羽化时间延长,幼虫虫体质量和蛹质量减轻,化蛹率和羽化率明显降低。