马丁干粉培养基的性能研究

将研制的马丁干粉培养基与新鲜马丁培养基比较,证明用干粉培养基培养链球菌、多杀性巴氏杆菌和丹毒杆菌,其每1 mL中活菌数和灵敏度均与新鲜马丁培养基相当.干粉培养基用于生物制品的生产及检验更方便且质量稳定,可推广应用.     

两种培养基生产布氏杆菌病猪型二号活疫苗的对比试验

培养基是动物细菌性疫苗生产的重要物质基础。马丁肉汤培养基是生物制品生产领域常用的培养基,在疫苗制造、细菌培养、分离、鉴定等方面发挥着不可或缺的作用。按照《兽用生物制品规程》的要求以新鲜牛肉汤为主要原材料制作的马丁肉汤培养基含有丰富的天然营养成分,一直是常规生产布氏杆菌疫苗用的传统培养基,马丁肉汤制作工艺繁琐复杂、费时费力,批次间离散度大、浪费大,针对这些问题本试验对猪种布鲁氏菌2号弱毒株C79-2用马丁干粉培养基和自制马丁汤做对比实验,结果发现用马丁干粉培养基培养布氏杆菌,每毫升中的活菌数都比用新鲜马丁汤培养基多,其成品的安检、效检均一次通过,可用于布鲁氏菌病猪型二号活疫苗的生产。使用马丁干粉培养基可降低成本,增加效益。     

改良培养基生产仔猪副伤寒活疫苗的研究

为提高仔猪副伤寒活疫苗质量,降低生产成本,使用某培养基生产企业生产的仔猪副伤寒干粉培养基,添加0.75%的水解乳蛋白,配制成合成培养基(以下称改良培养基),用于仔猪副伤寒活疫苗(C500株)的生产,同时与自制培养基进行比较。结果表明,改良培养基培养的活菌数平均达到515×108CFU·m L-1,高于自制培养基水平(450×108CFU·m L-1);改良培养基生产的6批活疫苗活菌率达50%以上,分别用兔做安全检验、产品经12个月的保存后计活菌数,均符合《中华人民共和国兽药典》2010年版三部[1]的质量要求。试验表明,改良培养基替代自制培养基用于仔猪副伤寒活疫苗(C500株)的生产是可行的,并能降低生产成本。     

沙门氏菌类活疫苗活菌计数参考疫苗的研究

为研制沙门氏菌类活疫苗活菌计数的参考疫苗,以期更科学地评价活菌计数结果的有效性,研究制备了一批仔猪副伤寒活疫苗作为参考疫苗候选物,对其性状、纯粹检验、真空度、剩余水分进行检测,对其运输稳定性、均一性进行测定,组织协作标定对参考疫苗候选物进行赋值,用协作标定的方法统计参考疫苗候选物在18个月的保存期,将参考疫苗初步应用于仔猪副伤寒活疫苗活菌计数的检验。结果表明,参考疫苗的性状、纯粹检验、剩余水分和真空度测定均符合《中国兽药典》的规定,均一性试验结果显示10瓶参考疫苗候选物计数结果的变异系数小于10%,说明其均一性良好。协作标定统计出参考疫苗候选物的赋值范围为(3.0,4.0)×109CFU/头份,保存期试验结果显示参考疫苗候选物在-70℃以下保存18个月菌数稳定。参考疫苗的初步应用显示本参考疫苗不仅可以为沙门氏菌类活疫苗活菌计数提供参照物,而且还可用于控制普通琼脂培养基的质量。     

用不同培养基生产猪多杀性巴氏杆菌活疫苗的试验研究

用马丁干粉和马丁肉汤培养基培养猪多杀性巴氏杆菌,分别生产3批猪多杀性巴氏杆菌活疫苗.结果用马丁干粉培养基生产的制苗用茵液的活菌数分别为1.80×1010 CFU/mL、1.75×1010 CFU/mL、1.80×1010 CFU/mL;冻干后的存活率分别为64%、69%、67%.用马丁内汤培养基生产的制苗用菌液的活菌数分别为1.20×1010 CFU/mL、1.50×1010 CFU/mL、1.10×1010 CFU/mL,冻干后的存活率分别为50%、49%、54%.用两种培养基制备的疫苗按<兽用生物制品检验标准>(以下简称<标准>)检验6批疫苗均合格.     

培养副鸡嗜血杆菌用干粉培养基的优化研究

优化副鸡嗜血杆菌干粉培养基配方。通过单因素平行对比配方中碳源、血清、辅酶等营养物质,确定各个因素对副鸡嗜血杆菌生长的影响。研究筛选出了适宜副鸡嗜血杆菌生长的干粉培养基配方：鸡肉蛋白胨、酪胨、多价胨、酵母粉、葡萄糖等,再添加7.5%鸡血清和10 mg/L辅酶Ⅰ,于37℃、5%CO₂恒温培养箱中160 r/min振荡培养14～16 h。优化后的配方更适于培养副鸡嗜血杆菌,为副鸡嗜血杆菌疫苗大规模生产提供了参考依据。     

猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌选择性显色培养基的研发和应用

为研制便于检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原含量的选择性显色计数琼脂(以下简称猪三联显色培养基)以代替传统的马丁琼脂,对比研究了干粉马丁琼脂、新鲜马丁琼脂和猪三联显色培养基的理化特性和生长特性,并通过活菌计数方法平行对比了猪丹毒单价苗、猪肺疫单价苗和猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗的抗原含量.结果显示,猪三联显色培养基在活菌...     

运用OD值对常见畜禽腹泻病原菌计数的研究

本研究就畜禽常见腹泻病原菌的生长特性、细菌悬液浊度和细菌计数之间的关系进行探讨,通过对常见畜禽腹泻病原菌大肠杆菌(O8型和O139型)、鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和鸡伤寒沙门菌不同培养时间段吸光度(optical density,OD)值的测定,结合平板活菌计数法来确定这5种细菌的生长曲线,并对细菌浊度和细菌计数相关性进行统计分析,发现极显著相关(P <0.01),建立了5种细菌在生长期和稳定期的OD值-细菌数对数的曲线回归方程,O8型大肠杆菌：y=2.55x+6.72(r²=0.96);O139型大肠杆菌：y=1.45x+8.77(r²=0.95);鸡伤寒沙门菌：y=4.50x+7.02(r²=0.95);鼠伤寒沙门菌：y=5.59x+7.67(r²=0.97);鸡白痢沙门菌：y=9.72x+6.60(r²=0.98)。利用该回归方程可快速准确地确定菌液浓度,为探讨细菌的培养特性、致病机制及动物实验中攻毒剂量的确定等相关实验提供参考依据。     

兽用药品无菌检验用硫乙醇酸盐培养基的研究

按《中国兽药典》（2005年版）灵敏度法以5种质控菌株对不同配方T．G进行对比试验,筛选出T．G培养基C,其对大肠杆菌C83549株、乙型溶血性链球菌C55943株、铜绿假单孢菌CMCC（B）10110株、金黄色葡萄球菌ATCC6538株、生孢梭菌CMCC（B）64941株灵敏度达10^-9的试验统计次数分别为4／6、2／7、7／13、8／17、9／9,高于其它配方。又按《欧洲药典》（2005年版）微生物促生长方法用3种质控菌株进行配制用水、pH值、高压方式的对比试验,确定配制用水的电导率低于0．5μs／cm、pH值为6．8—7．0,高压灭菌方式为116℃30min。研制的4批培养基用于接种1CFU金黄色葡萄球菌、2CFU铜绿假单孢菌、6CFU生孢梭菌均达3／3生长,结果与进口培养基一致,而国产同类培养基达1／3～2／3生长,结果显示研制的培养基促生长性能均达到或超过国外同类产品,高于国内同类产品。     

短乳杆菌LB-02培养条件及培养基成分优化研究

研究通过单因子优化试验和正交试验对短乳杆菌培养条件和培养基成分进行初步的优化。结果表明:短乳杆菌属于兼性厌氧菌,最佳培养条件是:温度35℃、培养时间24h,pH5.5,接种量为1%;优化培养基成分:蛋白胨12g,酵母提取物5g,牛肉膏12g,葡萄糖16g,乙酸钠5g,柠檬酸铵2.15g,Tween801mL,MgSO4·7H2O0.58g,MnSO4·4H2O0.05g,K2HPO42g,水1000mL。优化培养后OD值达到1.839,活菌数能达到728亿CFU/mL。     

琼脂扩散试验检测附红细胞体抗体

采用琼脂扩散试验检测自然感染猪附红细胞体抗体和兔抗猪附红细胞体抗体,结果表明,猪附红细胞体抗原与自然感染附红细胞体猪血清、首免和二次免疫后收集的兔抗血清的琼脂扩散试验结果均呈阴性,第3次免疫后的血清效价为1∶16。     

兽用生物制品活菌计数方法改进的研究

活菌计数是细菌类活疫苗质量标准中重要的检验参数,与疫苗的保护效果显著相关。现行兽用细菌类生物制品检验中的活菌计数方法部分步骤易产生误差,试验成立标准表述笼统,最终影响到细菌活疫苗质量评判。因此,从检验实际需求出发,参照国内外活菌计数相关规程,通过比对试验研究,对“活菌计数法”中平板干湿程度、菌液滴加方法、菌液分散方法进行改进,提出及验证以标准差(s)衡量结果的有效性并提供参考值。改进后的方法要求更明确,普适性更高,从而减少了操作误差,提升了“活菌计数法”的规范性、可操作性及检验结果可靠性。     

仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵工艺应用研究

为确定仔猪副伤寒活疫苗合成培养基发酵参数,根据发酵过程中的关键技术,设计3种不同工艺,分别发酵培养21 h,每隔3 h取样进行活菌计数表明,培养15~21 h均可达细菌稳定期,工艺3培养菌数高于其余2种,其最适培养时间为18 h;将合成培养基以1%、2%和3%的接菌量按工艺3分别发酵18 h,发现3者培养菌数基本一致。进一步比较4批合成培养基和普通肉汤发酵18 h的培养效果,期间15、18 h抽样的合成培养基培养菌数分别比普通肉汤高12%和25%;发酵18h的菌液对小鼠安全性及对兔的免疫原性,两者基本一致,接种小鼠均10/10健活,免疫攻毒兔均达4/5~5/5保护,对照攻毒兔5/5死亡。结果表明,发酵培养工艺3可行,可实现仔猪副伤寒活疫苗合成培养基高密度培养,且发酵菌体安全性及免疫原性良好。     

溶磷菌在5种不同培养基中溶解磷矿粉的性能比较

通过小麦、苜蓿根际分离的4株溶磷菌(Lx81、Dm84、Jm92、Lx191)接种于PKO、SP、NBRIY、NBRIP、NBRIYP等5种培养基中测定菌落直径、溶磷圈大小、培养液有效磷含量、pH值及总有机酸含量的方法,研究溶磷菌在不同培养基上的生长情况和溶磷特性。结果表明:Lx81和Lx191在PKO培养基上的菌落直径最大,Dm84和Jm92在NBRIY培养基上的菌落直径最大;4菌株在NBRIP培养基中的溶磷量、总有机酸含量、pH下降值均显著高于其他培养基中的值。为了得到更多、更有效的溶磷菌株,在以后的工作中建议采用NBRIP培养基。     

改良Frey氏液体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究

为探究改良Frey氏液体培养基质控菌CVCC2960滑液支原体(以下简称MS)生长规律,本试验首次同时采用CFU计数、CCU测定和p H值测定的方法,比较不同接种浓度、接种体积和不同代次MS生长情况。结果显示:5%与10%接种量的CCU测定结果峰值差异不明显,但5%接种的CFU计数峰值更高,pH下降更慢;1~5代菌在生长曲线各阶段的测定结果均无明显差别;3种不同接种方式的测定结果显示,用0.5 m L菌液接种9.5 m L培养基的方式更利于MS生长。本试验为改良Frey氏液体培养基的质控标准化提供依据。     

固体高氧化电位消毒剂对禽舍空气质量的影响

在肉鸡饲养全过程中,用检科Ⅰ号固体高氧化电位消毒剂进行带鸡消毒试验,从24～46日龄,与对照组相比氨气浓度降低了83.2%;试验组喷雾前、喷雾后1 h和喷雾后6h氨气浓度的平均值分别为32.9、17.5和18.4mg/L.试验组鸡舍内空气中的细菌总数显著地少于对照组,喷雾消毒效果可维持6h.检科Ⅰ号消毒剂进行带鸡消毒可显著改善鸡舍内空气的质量.     

Lactobacillus fermentum F6的增殖培养基优化及高密度发酵的研究

对分离自少数民族传统乳制品中的Lactobacillus fermentum F6菌种的增殖培养基进行优化,并对其高密度发酵条件进行探索。通过测定不同组成培养基中菌体在600nm波长下的光密度和发酵液在不同发酵条件下的活菌数,得到最适增殖培养基配方及其高密度发酵条件。增殖培养基配方为:蔗糖62.0g/L、酵母粉35.5g/L、大豆蛋白胨12.0g/L、柠檬酸1.35g/L、柠檬酸钠22g/L、MgSO4·7H2O2g/L、MnSO4·5H2O100mg/L、Tween-801g/L。在5L发酵罐中,Lactobacillus fermentum F6经优化发酵条件,其活菌数可达到2.30×1010CFU/mL,加入保护剂经冷冻干燥后活菌数可达到1.45×1011CFU/g,存活率为79.11%。中试培养液中活菌数可达1.02×1010CFU/mL,存活率为58%。以上优化的增殖培养基和高密度发酵条件为Lactobacillus fermentum F6的工业化生产奠定了基础。     

乳腺康注射液质量标准研究

本研究旨在建立乳腺康注射液质量标准。按照《中国药典》（2015版）相关要求,分别建立乳腺康注射液中甘草、青皮、蒲公英的薄层色谱定性鉴别和重金属的检查方法并规定限度,采用HPLC法建立甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷及咖啡酸的含量测定方法并规定限度。结果表明,甘草、青皮、蒲公英的定性鉴别专属性强;甘草苷在0.0459~0.7340 μg,甘草酸铵在0.0661~1.0580 μg,橙皮苷在0.0592~0.9470 μg,咖啡酸在0.0384~0.6140 μg浓度与峰面积呈良好的线性关系;相关系数r分别为0.997、0.9990、0.9999、1.000;甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷及咖啡酸的平均加样回收率分别为101.25%、99.87%、98.39%、103.49%,相对标准偏差（RSD）值分别为4.82%、3.63%、2.94%、0.85%;乳腺康注射液中含甘草苷、甘草酸铵、橙皮苷及咖啡酸分别不低于88.90、138.48、136.50、21.54 μg/mL;按乳腺康注射液每日最大使用剂量计算,铅、镉、砷、汞、铜分别不得超过23、3、6、2及150 μg。本研究建立的质量标准可为控制乳腺康注射液的质量提供参考。     

支原体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究

为探究支原体液体培养基和固体培养基质控菌猪鼻支原体生长规律,以活菌浓度,菌液pH值为指标,比较了不同代次与不同传代方式猪鼻支原体生长情况。结果显示:3%与10%浓度传代,0~48 h内,活菌浓度持续上升,菌液pH值持续下降,3%浓度传代的支原体生长较均匀,更利于菌种生长;1~5代支原体活菌浓度无显著差异;通过0.3 mL菌液加9.7 mL培养基传代,20组菌液平均浓度为(24.4±5.7)×10~8CFU/mL,通过0.9 mL菌液加29.1 mL培养基传代,菌液平均浓度为(7.2±2.1)×10~8CFU/mL,两种浓度差异极显著,前种传代方式更有利于支原体生长。本次试验为支原体液体和固体培养基的质控工作标准化提供参考。