鸡呼肠孤病毒分离与鉴定

从广西玉林市某鸡场出现跛行、瘫痪、跗趾关节和腱肿胀等症状的不同发病鸡群中分离到两株病毒。经病毒分离培养、理化特性鉴定、血清中和试验、动物回归试验、抗体检测以及PCR诊断,确定所分离到的两个病毒株为禽呼肠孤病毒。     

水貂肠道冠状病毒和呼肠病毒的病原性及在腹泻中的作用

1 前言水貂流行性腹泻是继水貂病毒性肠炎(MVE)、阿留申病、犬瘟热之后发现的传染性疾病。1975年首次报道于美国,称之为水貂流行性卡他性胃肠炎(ECG)或犹他州肠炎。我国自1987年起在许多貂场也有本病暴发,给养貂业造成严重的经济损失。1987年韩慧民等人报道在病貂粪便中发现有冠状病毒样粒子,但冠状病毒分离培养困难,因此无法进一步证实其对水貂的致病性。我们在研究过程中,用貂肺传代细胞系(ML)分离获得2株冠状病毒,用小鼠L细胞分离     

禽呼肠孤病毒的分离和鉴定

从患关节炎肉鸡的飞节分离到一株病毒。该病毒能致死鸡胚;能在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肾细胞和鸡胚肝细胞培养物中生长并形成合胞体。经三次空斑纯化后,能抵抗脂溶剂、pH5.0和 pH9.1、胰蛋白酶和5-氟脱氧尿核苷、50℃2小叫和60℃1小时处理:1M MgCl_2能增强该病毒对热的稳定性:感染病毒的 CEF 经吖啶橙染色可见胞浆有黄绿色荧光;对鸡、鹅、鸭、兔、豚鼠、小鼠、绵羊、家鼠的红细胞均无凝集性。病毒粒子点径为65～68nm,没有囊膜,具订双层衣壳和空心壳粒。在被感染的 CEK 和绒毛尿囊膜的中胚层细胞浆里部可见呈晶格状排列的病毒粒子。琼脂扩散试验证明,该病毒与禽呼肠孤病毒 U.conn S1133株的抗原相关。该病毒的各种特性证明为禽呼肠孤病毒.     

鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定

近几年,鹅“白点病”频发。本研究从江苏沛县地区肝脏有坏死点的发病鹅中收集肝脏病料,进行病毒分离,通过RT-PCR检测、序列分析进行病毒鉴定,并回归雏鹅进行致病性试验。结果发现：该毒株在鹅胚上生长良好;回归鹅能完全复制出临床中肝脏出现坏死点的病变,并能从实验鹅中重新分离到该病毒;对其主要抗原基因σC进行测序比对和进化树分析发现,其与番鸭呼肠孤病毒基因序列的进化关系较近,同源性为89.6～98.9%。本研究证实了鹅“白点病”的病原为番鸭呼肠孤病毒,为该病的防控奠定了基础。     

番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

本文采用病毒分离鉴定的常规方法,从某番鸭养殖户自然死亡的番鸭中分离到1株病毒,用分离到的毒株试验感染1日龄敏感番鸭,其死亡率达100％,临床及病理变化与自然感染发病的番鸭基本一致,并可回收到该病毒,分离毒株与番鸭呼肠孤病毒有一定的血清学交叉反应。根据试验结果,初步确定该病毒为呼肠孤病毒。     

种番鸭呼肠孤病毒的分离及RT-PCR鉴定

从表现为肝、脾表面坏死的240日龄种番鸭组织脏器中分离到1株病毒,暂命名为ZJ-10-06株,参照胡奇林等发表的文献进行RT-PCR[3]初步认定所分离到的毒株为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒。序列分析表明,ZJ-10-06与引起鸭脾坏死症HC/China病毒株同源率最高(95.3%),遗传进化分析可将番鸭呼肠孤病毒分成2个分支,ZJ-10-06和HC/China共处一相对独立小分支。     

鹅呼肠孤病毒江苏分离株的分离鉴定

2010年3月起,我国江苏、浙江等地鹅场相继发生一种以雏鹅瘫痪、不能行动为主要特征的传染病,发病率为10%-50%,死亡率一般为10%-40%.由于该病流行日趋严重,病因未明,因此该病的病原学研究备受关注.本文对病料进行病原的分离鉴定,证实该病例感染有鹅呼肠孤病毒,将其命名为JS10.     

新致病型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定

鸭感染呼肠孤病毒最早在1950年发生于南非[1],直到1972年法国学者才从患病雏番鸭中分离到第一株番鸭呼肠孤病毒(Muscovy Duck Reovi-rus,MDRV)[2],该病毒多感染2～4周龄番鸭,发病率较高,死亡率为10%～30%;     

一起鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定

2019年1月以来,山东菏泽、聊城、济宁、潍坊等地雏鹅发生了肝脏有密集性白色坏死灶的传染病。为寻找发病原因,笔者对发病鹅进行了症状观察、病理剖检、病原分离和PCR检测。剖检结果表明,病死鹅肝、脾密集性坏死灶出现几率近100%。PCR检测和序列比对结果表明,病原初步确定为番鸭呼肠孤病毒。根据检测结果采取了免疫接种、消毒等综合措施,病情得到了控制。     

一株鸡呼肠孤病毒的分离鉴定

为了对从山东滨州某养鸡场疑似鸡呼肠孤病毒感染的发病鸡群进行病毒鉴定,采取了病毒分离、RT-PCR鉴定、直接免疫荧光鉴定及动物回归试验。结果表明:所分离到的病毒为鸡呼肠孤病毒。     

检测水貂肠道呼肠孤病毒的血凝—血凝抑制试验

水貂流行性腹泻又叫水貂流行性卡他性胃肠炎(ECG),主要是由冠状病毒和呼肠孤病毒协同引起的.由于本病病原复杂,确诊时须对各种病原逐一进行检测.用于检测本病冠状病毒的特异性方法已见报道,本研究建立了检测呼肠孤病毒的血凝—血凝抑制试验.     

鹅呼肠孤病毒GRV-LA16株的分离鉴定

为探明安徽省某养鹅场60日龄鹅出现的软脚,排白色粪便,严重者导致鹅死亡的原因,对病死鹅进行剖检,发现其以肝脏肿大,脾脏肿大和坏死以及肺脏充血、出血为主要特征。对分离毒株进行RT-PCR扩增试验、序列分析及动物回归试验,结果表明,该分离毒株为鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV),命名为GRV-LA16株,其ELD50为10-5.7/0.2 m L。病理组织切片结果显示,与对照组相比,肺泡壁胀破融合,毛细血管扩张出血,且肺泡腔有红色丝网状纤维素渗出物。σC基因测序结果分析表明,其与鸭呼肠孤病毒σC基因同源性为87%。GRV-LA16与鸭呼肠孤病毒亲缘关系较近,为同一拓扑群,而与经典的禽呼吸肠孤病毒(Avian orthoreoviruses,ARV)、GRV、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)处于不同拓扑群。     

绿头野鸭新型呼肠孤病毒的分离鉴定

本研究从山东临沂地区发生肝脾出血的绿头野鸭中分离到一株病毒,经RT-PCR及序列测定分析,确定为新型鸭呼肠孤病毒(命名为SD12)。该病毒可在鸡胚、鸭胚中繁殖,并导致胚体水肿、出血、死亡,同时可适应鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸭胚成纤维细胞(DEF),细胞病变主要表现为多个细胞聚集成团,形成大的合胞体,然后细胞拉网并逐渐脱落。将该病毒分别以脑内接种、颈部皮下接种、口服三种方式接种3日龄健康雏鸭,结果颈部皮下方式雏鸭的发病率和死亡率最高,分别为30%和20%。     

一株鹅源呼肠孤病毒的分离与鉴定

一株从雏鹅肝脾脏病料中分离到的病毒，在电镜下观察到病毒粒子呈球形，无囊膜，有可见的双层衣壳结构，外壳直径75nm，内核直径50nm；经病毒分离培养、理化特性鉴定、动物回归试验、抗体检测，确定所分离到的毒株为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属鹅呼肠孤病毒。     

山东地区新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

为了解山东地区肉鸭呼肠孤病毒的流行情况,从山东地区收集肉鸭坏死脾脏病料,经研磨处理,接种鸭胚,对分离病毒进行PCR扩增和σC基因测序分析。PCR扩增结果显示共分离得到6株病毒,测序结果显示,6株病毒σC基因核苷酸同源性为99.0%～100.0%,与新型呼肠孤病毒毒株核苷酸同源性为93.7%～99.3%。由此确定,分离的6株病毒均为新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)。该研究为山东地区NDRV的防控提供一定参考依据。     

雏半番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

自以肝脏、脾脏、胰腺、肾脏表面出现多量针尖大的白色坏死点和法氏囊出血为特征的病死雏半番鸭脏器中 ,以番鸭胚分离到病毒 ,经对分离的病毒株 (FZ2 株 )进行形态学观察、理化特性测定以及血清定性中和试验等 ,发现该病毒无囊膜 ,直径为 5 5～ 70 nm;对氯仿处理敏感 ,对乙醚处理不敏感 ;无血凝活性 ;可被鸡关节炎病毒阳性血清、雏番鸭呼肠孤病毒阳性血清所中和 ,但与鸡传染性法氏囊病病毒、鸡减蛋综合征病毒无血清学关系。据此 ,确定 FZ2 株病毒为呼肠孤病毒