用于检测马铃薯X病毒HB株系的单克隆抗体的研制

 经诱导耐受性免疫、细胞融合及克隆化培养,建立了2类6株稳定分泌抗马铃薯X病毒(PVX)株系特异性高滴度的单克隆抗体(McAb)小鼠杂交瘤细胞系。间接DAS-ELISA测定表明:Ⅰ类细胞系(1-6G8,1-7E8,2-5G9)分泌的抗体只与PVX-HB和PVX-c反应,Ⅱ类细胞系(1-6F1,1-9C11,1-9C8)分泌的抗体与测试的5个株系均有反应,但当用病毒直接包被ELISA板时,Ⅲ类抗体同PVX-C不产生反应。因此将两类单克隆抗体配合使用可鉴别诊断PVX-HB株系。用辣根过氧化物酶(HRP)对McAb1-7E8进行了标记并成功地以DAS-ELISA法检测。这两类能鉴别诊断PVX-HB株系的抗体对马铃薯抗病品种的选育、无病毒种薯的生产及进口种苗的检测都是相当有用的试剂。     

用单克隆抗体结合酶联免疫吸附试验检测棉铃虫幼虫体内的核多角体病毒

在常规ＥＬＩＳＡ间接法的基础上，应用单克隆抗体检测感染棉铃虫核型多角体病毒的棉铃虫幼虫体内病毒粒子。３龄幼虫饲喂表层涂有ＨａＮＰＶ人工饲料后９小时，即可在幼虫抽提液中检出病毒粒子抗原，而典型病虫显症需５～６天后才出现。因此本法是一种灵敏、快速、特异性强的检测昆虫杆状病毒的方法。利用单克隆抗体结合ＥＬＩＳＡ试验分别检测来自江苏和山东不同地区棉田自然死亡的棉铃虫幼虫，表明在江苏和山东不同棉区均可检测到ＨａＮＰＶ病毒粒子，但地区间棉铃虫核型多角体病毒检出频率有显著差异     

番茄环斑病毒单克隆抗体的制备及检测

将纯化的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)制剂免疫BALB/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株分泌ToRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为1H8、1D4.用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG1亚类.间接ELISA效价测定结果1H8为1:105,1D4为1:106.TAS-ELISA实验结果表明此2株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的从德国引进的番茄环斑病毒分离物、从美国ATCC引进的番茄环斑病毒分离物PV-100、PV-174、PV-239发生特异性反应,而不与同属其它3种病毒:烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus,ArMV)、马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)发生反应.     

香石竹斑驳病毒单克隆抗体的制备及检测应用

 用香石竹斑驳病毒(CarMV)免疫的BALB/c鼠脾细胞与Sp2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得5株能稳定传代且分泌抗CarMV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞,并分别制备它们的单克隆抗体腹水。5株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-6,其中3G1、1B9、2A9和2F8的抗体类型及亚类均为IgG1,而2F₂为IgG3。Western-blot分析表明,5株单克隆抗体均与CarMV 38 kD的外壳蛋白亚基有特异性反应。利用2A9单抗建立的抗原包被的间接ELISA (ACP-ELISA)检测CarMV方法,病叶1:800倍稀释、提纯CarMV病毒浓度为1 ng/mL (绝对检测量为0.1 ng)时仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA对田间香石竹样品的检测表明,CarMV在香石竹上发病很普遍。     

用单克隆抗体结合酶联免疫吸附试验检测棉铃虫幼虫体内的核多角…

在常规ＥＬＩＳＡ间接法的基础上，应用单克隆抗体检测感染棉铃虫核型多角体病毒的棉铃虫幼虫体内病毒粒子。３龄幼虫饲喂表层涂有ＨａＮＰＶ人工饲料后９小时，即可在幼虫抽提液中检出病毒辣粒子抗原，而典型病虫显症需５－６天后才出现。因此本法是一种灵敏、快速、特异性强的检测昆虫杆状病毒辣的方法。利用单克隆抗体结合ＥＬＩＳＡ试验分别检测来自江苏和山东不同地区棉田自然死亡的棉铃虫幼虫，表明在江苏和山东不同棉区可检测     

应用单克隆抗体免疫学技术检测种姜姜瘟病的初步研究

姜瘟病是由青枯病菌(PsedomonasSolanacearum)引起的一种细菌病害,俗称姜腐烂病。70年代以来,我国山东、浙江、福建和四川等生姜集产区均遭到其不同程度的危害。病地一般减产1至2成,重者达5成     

水稻条纹病毒单克隆抗体的制备及检测应用

 用水稻条纹病毒(RSV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得4株能稳定传代且分泌抗RSV单克隆抗体的杂交瘤细胞。各株单抗腹水的ELISA效价均在1:80000~1:5120000之间。Westernblot分析表明,4株单抗均与RSV的35kDa的外壳蛋白亚基有特异反应。建立了间接ELISA测定RSV的方法,4株单抗检测病汁液的稀释度能达到2560倍以上,与其它病毒无交叉反应。对江苏省部分县市的大田灰飞虱带毒率进行检测,结果显示灰飞虱的带毒率为12.5%~41.5%     

应用DIBA检测植物病毒的研究

 点免疫结合测试法(Dot Immunobinding Assay,DIBA)检测提纯TMV、PVY、CMV的最低检出率分别达到0.184ng/ml、1.28×10³ng/ml、0.056ng/ml。检测感病叶片粗汁液的最高稀释度依次为1:819,200、1:102,400、1:819,200。其中,检测TMV的最低检出率及最高稀释度分别比Hibi(1985)[1]的报道高544倍和100余倍。检测PVY粗汁液的最高稀释度比Banttari(1985)的报道高15倍[2]。HRP-IgG、抗血清在所使用的稀释度范围内(1:1000-8000、1:500-4000)对结果没有明显影响。但检测PVY时,随着血清稀释度的提高最低检出率明显下降。利用HRP-A代替HRP-IgG可以获得更为理想的检测效果。改进的DIBA(暂称为DSA-DIBA)检测TMV时未发现有任何假阳性反应。DIBA检测PVY、TuMV、PRSV-T揭示了它们相互间有效远缘的血清学相关性。实验表明,DIBA是检测植物病毒专化、快速、简便、灵敏、经济的新方法。     

应用单克隆抗体检测香蕉束顶病

应用香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）建立了检测香蕉束顶病的间接ＥＬＩＳＡ方法，其检测香蕉病组织汁液的最大稀释度为１：１２８０，健康香蕉组织汁液无非特异性反应。用间接ＥＬＩＳＡ方法检测了采自广东、广西９个市（县）的香蕉产区的８０个大田香蕉束顶病样本和２５个荫棚香蕉试管苗样本，其中大田样本ＢＢＴＶ的带毒率为７６．５％，试管苗样本的带毒率为８．０％。香蕉束顶病株不同部位ＢＢＴＶ含量检测表     

番茄环斑病毒单克隆抗体细胞株的建立及检测方法的研究

用纯化的番茄环斑病毒（ＴｍＲＳＶ）免痊Ｂａｌｂ／ｃ小白鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合。筛选出６株分泌ＴｍＲＳＶ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。抗体免疫球旦白分属于１ｇＧ２ａ，ＩｇＧ３和１ｇＭ。用免疫电镜诱捕法检测，６个ＭｃＡｂ与加拿大分离物反应均为阳性，其中ＣＥ３，ＣＧ８，９Ｇ９不与西德分离物反应。属于１ｇＧ３的单抗具有与Ａ旦白结合的特性。     

马铃薯环腐病棒杆菌单克隆抗体的制备

 用马铃薯环腐病棒杆菌的细胞壁蛋白粗提物作为抗原,应用杂交瘤技术,成功地建立了六株分泌抗马铃薯环腐病棒杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株CH₁、CH₂、CH₃、CH₄、CH₅和cH₆。对这些杂交瘤细胞株所分泌的相应六种单抗McAb₁、McAb₂、McAb₃、McAb₄、McAb₅和McAb₆进行专化性测定的结果表明,McAb₄对环腐病菌具有亚种特异性,其它5种单抗除与环腐病菌呈阳性反应外,还与其它亚种的棒杆菌有不同程度的交叉反应。细胞株CH₄经体外培养传代30余代和液氮冻存5个月,其分泌抗体的滴度无明显改变。McAb₄属于IgG2a亚类,其诱发的小鼠腹水抗体效价达1:2×10⁵,CH₄的染色体数为95-102条。应用ELISA夹心法,McAb₄所能检测环腐病菌的最低浓度为10³个细菌/毫升。检测感染环染环腐病的马铃薯汁液,稀释1000倍仍呈阳性反应。     

用酶联免疫法检测香蕉花叶心腐病病毒

用纯化的黄瓜花叶病毒株ＣＭＶ－Ｂ制备小鼠腹水抗体，其效价为１：５０００，间接ＥＬＩＳＡ法可检测香蕉病叶汁液的最大稀释度为１：１２８０，健叶汁液无非特异性反应，在送检的５０份香蕉试管苗中，有１份样品被出带有ＣＭＶ病毒。     

植物病毒分子检测方法概述

植物病毒粒体主要由核酸和蛋白外壳构成,蛋白外壳由许多外壳蛋白(CP)组成. CP和核酸因病毒的不同而异,是检测、鉴定植物病毒的主要依据.广义的植物病毒分子检测方法包括蛋白质检测(或血清学试验)和核酸检测方法,本文分别介绍.     

应用RT-PCR检测温州蜜柑萎缩病毒

温州蜜柑萎缩病是以日本为主的少数亚洲国家柑橘上的重要病毒病害,多数柑橘品种隐症带毒,不易发现,对其早期准确快速检测尤为重要.以毒源植株的叶、枝皮为材料,对提取的总RNA和总核酸进行反转录和PCR扩增,通过SDV特异引物的设计与筛选,反应体系与反应程序的建立与优化,扩增得到一个251 bp的特异片段,测序结果与日本Iwanami报道的SDV序列同源性为99.6%.RT-PCR检测体系的灵敏度为100ng,同时应用该检测体系可以全年检测到毒源植株嫩叶、嫩皮、老叶、老皮中的SDV.     

10种植物病毒的基因芯片检测技术研究

 本研究设计了10种植物病毒和各种对照的探针, 将探针固定在醛基化玻璃片基上制备基因芯片。用常规的Trizol法提取植物总RNA, 根据病毒的外壳蛋白基因或复制酶基因设计特异性引物, 经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3-dCTP进行标记。将标记的PCR产物与芯片杂交, 扫描仪对杂交结果扫描, GenePix Pro 4.0软件对杂交图像进行分析。结果表明, 该芯片可以从病毒感染样本中检测到特异性识别信号, 检测灵敏度比RT-PCR高10~100倍, 所以, 基因芯片能对植物病毒作出快速、准确的检测。     

检测植物病毒的三种血清学方法敏感性的比较

 以芋花叶病毒和豇豆花叶病毒为试验材料,进行了酶联免疫吸附试验,免疫吸附电子显微术和点免疫结合试验检测植物病毒的敏感性的研究。无论是检测感染组织粗汁液还是纯化的病毒,点免疫结合试验均优于酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术。在使用羟基吲(口乃木)磷酸盐和氮蓝四唑为碱性磷酸酶的底物时,点免疫结合试验检测纯化的豇豆花叶病毒的可测感度为0.35ng,芋花叶病毒为0.83ng。对三种检测植物病毒的血清学方法进行了比较,并讨论了点免疫结合试验的优点。     

浅谈植物病毒ELISA检测试剂盒中阳性对照问题

在植物病毒的血清学检测技术中,阴性和阳性对照的设立是必需的。由于ＥＬＩＳＡ试验本身的优点,使得它在血清学检测技术中应用最为广泛,随着技术的发展,现在有多种商品化的试剂盒出现。就ＥＬＩＳＡ试剂盒而言,毫无疑问需要给用户提供相应的对照,包括阴性和阳性对照...