大肠杆菌acrA基因的克隆、表达、抗体制备及不同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平的检测

检测不同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平，探讨耐药水平与AcrA蛋白表达水平之间的关系。对acrA基因进行克隆、表达、制备抗AcrA抗体，Western blot方法比较同耐药水平大肠杆菌AcrA表达水平。结果表明，多重耐药株SEMR的AcrA表达明显高于单药耐药株SEICI和SEICH以及质控株ATCC25922。因此SEMR多重耐药性的产生与AcrA的高效表达直接有关。     

连翘对大肠埃希菌多重耐药基因AcrA的影响研究

为了研究和开发理想的大肠埃希菌多重耐药抑制剂,用连翘作用于多重耐药大肠埃希菌,提取其基因组DNA,并以大肠埃希菌AcrA基因的编码序列设计引物,成功扩增出AcrA基因中1005bp的片段,与多重耐药菌种中的AcrA基因序列进行对比。结果表明,连翘改变AcrA基因的编码序列,并能有效抑制多重耐药大肠埃希菌的生长,减弱其耐药性。     

河北省鸡源大肠杆菌分离、鉴定及药敏试验

近年来,大肠杆菌耐药性日趋严重,多表现为多重耐药性和交叉耐药性,增加了治疗难度,制约了养殖业健康发展。大肠杆菌耐药性的增加反映了选择性压力对耐药菌的影响以及潜在耐药性基因的广泛传播[1-2]。同时大肠杆菌被认为是致病性革兰阴性菌的耐药基因库,常和其他病原菌混合感染,为耐药     

仔猪黄痢病原菌的分子生物学鉴定及多重耐药基因检测

旨在确定引起安徽地区猪场仔猪黄痢发生的病原菌种类,并从分子水平上揭示其多重耐药机制。利用麦康凯培养基对从仔猪黄痢病死猪肝脏样本中初步分离到的9株细菌进行选择性培养;提取分离菌株的基因组DNA,利用PCR法扩增其16SrDNA序列并进行测序;将测序结果提呈至NCBI数据库,与GenBank中已发表的序列进行BLAST比对,对分离菌株进行种水平鉴定;采用纸片扩散法开展分离菌株对抗菌药物的敏感性试验;利用PCR法检测分离菌株携带多重耐药基因AcrA的情况。结果表明,9株分离菌在麦康凯琼脂培养上均呈中等大小的玫瑰红色菌落,符合大肠杆菌的菌落特征;9株分离菌的16SrDNA序列与GenBank中公布的大肠杆菌16SrDNA序列的相似性均在99.0%以上,提示分离菌株均为大肠杆菌;9株分离菌对12种抗菌药物呈现不同程度的耐药性,对阿米卡星、大观霉素和氯霉素的耐药性较强;9株分离菌的AcrA基因携带率为100%。综上提示,多重耐药性大肠杆菌是引起该地区猪场仔猪黄痢发生的致病菌,在临床治疗中应引起足够重视。     

重庆地区鸡源大肠杆菌、沙门氏杆菌耐药性的测定与分析

为了掌握重庆地区养鸡场大肠杆菌、沙门氏杆菌的耐药情况,试验选取10种抗生素对分离到的110株大肠杆菌、14种抗生素对分离到的8株沙门氏杆菌进行药敏试验,测定大肠杆菌的耐药基因,比较分析大肠杆菌耐药表型与耐药基因的关系。结果表明:多黏菌素对所有大肠杆菌均敏感,4株大肠杆菌对环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟耐药,20株大肠杆菌对恩诺沙星耐药,24株大肠杆菌对卡那霉素耐药,28株大肠杆菌对链霉素耐药,40株大肠杆菌对阿莫西林、氟苯尼考耐药,72株大肠杆菌对磺胺甲口恶唑耐药;在110株大肠杆菌中80. 00%为多重耐药株,其中对2种抗菌药物耐药占32. 73%,对7种药物耐药占7. 27%,多重耐药性主要集中在二到四重,占63. 64%。沙门氏杆菌对环丙沙星、氨曲南、头孢噻肟敏感;而对氯霉素、磺胺异口恶唑、氨苄西林、四环素、复方新诺明、头孢唑啉、多西环素均耐药; 8株沙门氏杆菌中100%为多重耐药株,其中对2种抗菌药物耐药占12. 50%,对8种药物耐药占12. 50%,多重耐药性主要集中在四到八重,占87. 50%。大肠杆菌药敏试验和耐药基因的检测结果表明,磺胺类耐药基因与耐药表型符合率较高,为75. 00%(72/96)。β-内酰胺类中头孢噻肟耐药基因与耐药表型符合率较低,为6. 78%(4/59);阿莫西林耐药表型与耐药基因符合率为67. 80%(40/59)。大部分检测的基因在受试菌株中具有较高的流行性,表明这些基因在编码受试菌株耐药性中发挥非常重要的作用。说明分离的大肠杆菌沙、门氏杆菌耐药性十分严重。     

氮磷营养盐条件下大肠杆菌对氯霉素耐药性及机理研究

为探讨氮磷营养盐对环境大肠杆菌(E.coli)耐药性的影响及其机制,本试验通过建立模型生态系统研究氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素(CHL)产生耐药表型的影响,并对分离到的耐药菌株和敏感菌株进行cat基因检测.结果显示,添加不同剂量氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药性,46株耐氯霉素大肠杆菌cat基因的阳性率为89.13%;16株对氯霉素敏感的大肠杆菌未检出cat基因.结果表明,模拟生态系统中加入氮磷营养盐可引发大肠杆菌对氯霉素产生耐药;氮磷营养盐引发大肠杆菌对氯霉素耐药与cat基因有关.     

豫北地区猪源大肠杆菌耐药性及基因多态性分析

为了解豫北地区规模化养殖场猪源大肠杆菌的耐药性及基因多态性,对分离的21株猪源大肠杆菌进行药物敏感实验,采用PCR技术对其耐药基因进行检测,RAPD技术进行基因多态性分析。结果表明:豫北地区规模化养殖场分离的猪源性大肠杆菌菌株对常见16种抗生素存在不同情况的耐药性。其中对四环素、红霉素、麦迪霉素、阿莫西林、磺胺异恶唑、环丙沙星、新生霉素、复方新诺明、恩诺沙星、甲氧苄啶的耐药率均为100%,对庆大霉素、洛美沙星的耐药率为85%以上,对其他药物的耐药率相对较低;PCR检测得到8种耐药基因的条带;对菌株进行RAPD分析得到7种不同的基因型。大肠杆菌极易产生耐药性,耐药基因广泛存在于耐药菌株中,但耐药表型与耐药基因之间无绝对相关性。豫北地区猪源大肠杆菌感染多重耐药十分严重,严重影响了该地区猪源大肠杆菌病的诊治和预防。     

一株致猪肺炎大肠杆菌的分离鉴定及其耐药表型、耐药基因型分析

为了了解猪肠外致病性大肠杆菌的耐药性,试验采用菌落形态观察、小鼠毒力试验、回归动物试验和PCR等方法对1株引起猪肺炎的病原菌进行鉴定,并通过微量稀释法进行耐药性检测,在全基因组测序的基础上对耐药基因型进行分析。结果表明:该病原菌是肠外致病性大肠杆菌,呈多重耐药,其染色体基因组携带有外排调控基因Mar C、SoxR,外排泵基因MATE和ABC,耐药基因移动原件IS,四环素耐药基因tet,氟苯尼考耐药基因FloR及氯霉素乙酰转移酶基因等。     

大肠杆菌耐药性及氟苯尼考耐药基因floR的研究

本实验对某地养殖场猪源和鸡源大肠杆菌的耐药性及氟苯尼考耐药基因flo R进行分析,旨在了解我国大肠杆菌的耐药现状,以降低对养殖业的危害,减少菌株耐药性的传播,为兽医临床用药及兽药管理提供科学依据,为新型抗菌药物的研制奠定理论基础。采用国标法分离鉴定大肠杆菌,肉汤微量稀释法进行药敏实验,PCR法检测氟苯尼考flo R基因,膜过滤法进行转化接合实验。结果表明:共分离大肠杆菌293株,分离率为73.3%,其中猪源157株,鸡源136株;大肠杆菌对磺胺类、四环素类和氨基糖苷类药物的耐药性相对严重,对氯霉素类、氟喹诺酮类和β-内酰胺类药物相对敏感;与欧盟EUCAST标准相比,该地区大肠杆菌的MIC分布出现明显右移现象;80%以上的大肠杆菌均为多重耐药菌株,以8重和9重耐药菌株为主;氟苯尼考耐药基因flo R携带率为61.2%,flo R基因可以在菌株间相互转移。样品采集地区养殖场大肠杆菌污染严重,耐药种类逐渐增多,多重耐药现象严重,质粒介导的耐药基因可以在菌株间相互转移。     

青岛市兔源产ESBL大肠杆菌的耐药性及多重耐药调控基因SoxS序列的分析

[目的] 了解兔源产ESBL大肠杆菌耐药特点,为掌握其造成的耐药性危害提供数据参考。[方法] 2015年3-4月从青岛4个养兔场采集118份兔粪便棉拭子,进行大肠杆菌分离,并检测对16种抗生素的耐药谱,及对多重耐药调控基因SoxS携带率。[结果] 从118份兔粪便棉拭子分离获得68株大肠杆菌,确证筛选出47株产ESBL大肠杆菌,占兔源大肠杆菌的69.1%。药敏结果显示所有产ESBL大肠杆菌菌株耐药性较强且呈现多重耐药,仅对碳青霉烯类药物敏感率100%。兔源产ESBL大肠杆菌多重耐药调控基SoxS携带率为100%,且不同动物源性产ESBL大肠杆菌的多重耐药调控基因同源关系较近。[结论]青岛地区兔源产ESBL 大肠杆菌分离率高且耐药谱广,多重耐药调控基因SoxS携带率高,主要涉及到细菌主动外排泵出机制,使得大肠杆菌对抗生素的敏感性中起到了至关重要的作用,本研究对抗生素在临床中的应用起指导意义。     

不同源性大肠杆菌多药耐药基因AcrA、AcrB部分基因的同源性分析

通过聚合聚链式反应从不同源性大肠杆菌的染色体DNA上扩增出大肠杆菌多药耐药基因AcrA,AcrB的部分片段，将该片段分别连接到克隆载体pMD-18T的BamHI,XhoI酶切位点中，测定插入片段的核苷酸序列，并分别推导出其氨基酸序列。序列分析表明，不同源性大肠杆菌的AcrA的部分基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列与GeneBank中该基因序列的同源性较高；不同源性大肠杆菌的AcrB的部分基因的核苷酸序列的同源性较低。所推导的氨基酸序列与GeneBank中该基因序列的同源性较高。     

3株猪源大肠埃希氏菌耐药基因的初步定位

本试验旨在对临床分离的猪源大肠埃希氏菌耐药基因进行初步定位。采用常规细菌分离培养、16S rRNA PCR扩增和序列测定方法从江西省3个规模化猪场送检的子宫脓液中分离鉴定病原菌,并通过质粒提取、转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞及药敏试验对临床分离株的耐药基因进行初步定位。结果显示,分离鉴定到3株大肠埃希氏菌,其中JX-22分离株仅对氧氟沙星、大观霉素敏感,JX-26分离株仅对链霉素、氧氟沙星等4种药物敏感,JX-28分离株仅对氧氟沙星等3种药物敏感,均为多重耐药菌;3株大肠埃希氏菌均可纯化到分子质量大小不一的质粒。分离株、质粒转化菌及大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞药敏试验对比结果显示,3株大肠埃希氏菌的耐链霉素、林可霉素、甲硝唑、氨苄西林、阿莫西林、大观霉素、丁胺卡那基因,JX-22和JX-26分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐头孢曲松基因,JX-28分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟、诺氟沙星基因均定位于细菌质粒上;JX-28分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐诺氟沙星基因和JX-26分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟基因均定位于其染色体上;3株分离株均无氧氟沙星耐药基因。本试验初步确定3株多重耐药猪源大肠埃希氏菌的大部分耐药基因定位于质粒上,为进一步研究猪源大肠埃希氏菌的耐药机理和有效控制措施奠定基础。     

曲靖地区仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定与耐药性分析

为了解曲靖地区仔猪出现腹泻的细菌性病因,对5个养殖场148份出现仔猪腹泻症状的样品进行细菌分离培养及耐药性分析,结果显示,检出致病性大肠杆菌(E.coli)114份,阳性率为77.03%;沙门氏菌(Salmonella)26份,阳性率为17.57%,混合感染率为17.57%.致病性大肠杆菌和沙门氏菌对多种抗生素产生了耐药性,其中114株致病性大肠杆菌中97株呈多重耐药性,占总菌数的85.09%,26株沙门氏菌中20株呈多重耐药性,占总菌数的76.92%.结果表明,致病性大肠杆菌是导致当地哺乳仔猪腹泻的主要细菌性病原,部分仔猪继发感染沙门氏菌,两种细菌对多种抗生素产生了耐药性,多重耐药现象较严重.     

鸡源致病性大肠埃希菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测

为了解鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性变化和钝化酶耐药基因的携带情况及耐药基因与耐药性的相关性,从陕西、河南、河北、山西、宁夏和甘肃6省(区)的部分规模化养鸡场的病、死鸡中分离鉴定320株致病性大肠埃希菌。采用K-B药敏纸片法检测分离菌对6种氨基糖苷类药物的敏感性,PCR方法检测6种氨基糖苷类钝化酶耐药基因,用DNA Star软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性大肠埃希菌分离株对庆大霉素、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为53.4%、49.3%、37.5%、34.7%、22.8%和5.3%,对妥布霉素和卡那霉素耐药率呈上升趋势,而对庆大霉素的耐药率虽呈下降趋势,但仍维持在40%以上。3重以上耐药菌株占80%(256/320)。氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aph(3′)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰ的检出率分别为50.9%、25.9%和3.1%,未检测到aac(3)-Ⅳ、ant(3′′)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅱ基因。研究表明,分离的鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性普遍存在,以多重耐药为主,且对妥布霉素和卡那霉素的耐药性不断上升。耐药基因aac(3)-Ⅱ和aph(3′)-Ⅰ的检出率与其耐药性呈正相关。     

Antimicrobial resistance in commensal faecal Escherichia coli of hospitalised horses

The objective of this study was to examine the impact of hospitalisation and antimicrobial drug administration on the prevalence of resistance in commensal faecal E. coli of horses. Faecal samples were collected from ten hospitalised horses treated with antimicrobials, ten hospitalised horses not treated with antimicrobials and nine non-hospitalised horses over a consecutive five day period and susceptibility testing was performed on isolated E. coli. Results revealed that hospitalisation alone was associated with increased prevalence of antimicrobial resistance and multidrug resistance in commensal E. coli of horses. Due to the risk of transfer of resistance between commensal and pathogenic bacteria, veterinarians need to be aware of possible resistance in commensal bacteria when treating hospitalised horses.     

猪源耐黏菌素大肠杆菌PFGE分型及耐药性研究

为了解河南省焦作市、许昌市规模化养殖厂耐黏菌素大肠杆菌的流行情况,对分离到的32株耐黏菌素大肠杆菌使用微量肉汤稀释法检测其药物敏感性,并采用脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对分离株进行分型研究。结果显示,32株耐黏菌素大肠杆菌对四环素、多西环素、磺胺异噁唑、复方新诺明的耐药率均高达90%以上,32株猪源大肠杆菌可分为30种带型。结果表明,两地市养殖场猪源大肠杆菌耐药性普遍存在,且以多重耐药为主,PFGE分型结果显示,32株耐黏菌素大肠杆菌整体上表现出较大的遗传多样性,但不同菌株存在着不同程度的亲缘关系。     

地锦草等中药提取物对大肠杆菌耐药消除作用的初步研究

对动物源大肠杆菌采用二倍稀释法对氨基糖苷类药物及其他药物进行了MIC的测定,结果显示对十种西药全部耐药。应用1/2MIC的中药提取物对耐药菌株进行了耐药性消除的初步探索研究,结果表明临床多重耐药大肠杆菌用中药提取物作用24代以后,地锦草提取物耐药消除最强,三黄汤提取物次之,对某些氨基糖苷类药物的MIC明显下降。另外,对消除前后的细菌提取质粒,扩增氨基糖苷类的耐药基因,发现随着MIC的降低,耐药基因的数量也不同程度地减少和消失。由此可见地锦草等中药提取物对可移动的耐药基因元件有一定的消除作用,对耐药基因的扩散有抑制作用。