免疫乳中特异性抗体对3种细菌所致小鼠腹泻的被动免疫保护作用

以9株人肠道病原茵(大肠杆茵3株、志贺氏茵3株、沙门氏茵3株)制备的混合抗原对孕牛进行系统免疫，以获得对人致病肠道杆茵具有特异性的牛乳抗体。其免疫初乳中针对9种致病肠道杆茵的特异性IgG效价为2^11-2^12，为非免疫初乳的128-256倍；免疫常乳中针对9种致病肠道杆茵的特异性IgG效价为2^6-2^8。为非免疫常乳的16-64倍。动物实验表明，免疫初乳及效价为1：64的免疫常乳对肠产毒性大肠杆茵、鼠伤寒沙门茵、福氏志贺茵所致小鼠腹泻均有保护作用，这是由免疫乳中特异性IgG所决定的。     

针对9种常见肠道致病菌的免疫乳的研究

以9株人肠道病原菌(致病大肠杆菌3株、志贺氏菌3株、沙门氏菌3株)制备的混合抗原对孕牛进行系统免疫，以获得对人致病肠道杆菌具有特异性的牛乳抗体。对母牛进行系统免疫后，免疫乳和非免疫乳中IgG总含量没有显著变化。但经免疫处理的母牛，其初乳(产犊后24h内)中针对9种致病肠道杆菌的特异性IgG效价为2^10-2^12，而非免疫母牛为2^7-2^10，免疫处理后初乳中特异性IgG效价提高了2—9倍；经免疫处理的母牛，其常乳中针对9种致病肠道杆菌的特异性IgG效价为2^6-2^10，而非免疫母牛为2^1-2^6，免疫处理后常乳中特异性IgG效价提高了8-14倍。对免疫乳中IgG热致变性进行研究，其结果为：经60℃、10min，60℃、30min，70℃、10min，70℃、30min，80℃、10min，80℃、30min加热处理，免疫乳中IgG变性率分别为14．81％、25．20％、76．44％、85、58％、100％、100％。对免疫乳中IgG酸稳定性进行研究，其结果为：经pH2、10min，pH2、30min，pH4．5、60min，pH4．5、120min处理，免疫乳中IgG活性持留率分别为66.69％、56．55％、100％、100％。     

免疫乳研究及开发进展

一、免疫乳及乳抗体的特异性免疫乳（Immune Milk）是指给哺乳动物（主要是指奶牛）选择性地接种一些能够引起人和动物疾病（主要是肠道疾病）的细菌（如致病性大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等），病毒（如轮状病毒）或其它一些外来抗原（如隐性孢子虫等）刺激机体发生免疫应答以分泌特异性的抗体（Specific antibody）进入乳中，这种含有特异性乳抗体的乳称为免疫乳。在机体免疫应答过程中，除了产生特异性的抗体之外，机体还会产生一些淋巴因子，其中的一些也会随泌乳进行而进入乳中，如在免疫乳中发现的抗炎因子（Anti－hypertension F…     

传统Raib型牛奶发酵乳中野生Leuconostocs菌和乳酸球菌的分离及鉴定

Raib(Rayeb)是由乳球菌和明串珠菌发酵产酸进而酸化和产生风味的一种自然发酵乳。Raib及其副产品是许多地中海和撒哈拉以南非洲国家的传统食品。当前尚未有用于发酵Raib的专门发酵剂。本研究目的是分离和鉴定可用于Raib及其副产品的生产,并能保持自身传统特性的天然乳球菌和明串珠菌菌株。在实验室中采用M17和MRS(含万古霉素)培养基,从新鲜阿尔及利亚牛乳、绵羊乳、山羊乳、马乳、骆驼乳等原料乳或其发酵乳中分离了优势乳酸球菌,提取这些菌株的DNA,并且采用Rep-PCR技术对上述菌株指纹图谱分析。采用Rep-PCR技术结合Enterococcus属特异性引物、Lactis/hordniae和Cremoris ofLactococcus lactis.亚属特异性引物,对菌株进行鉴定。分离获得菌株的3个与Raib生产相关的特性被确定,其中包括在正常的相关温度范围内体现的高酸化能力、蛋白酶活性及柠檬酸代谢能力。84株菌被定性,其中包括4株乳球菌和4株明串珠菌;具有抗万古霉素的肠球菌,常常被共分离。一株Leuconostoc mesenteroides菌与亚种模式菌株以及其他天然明串珠菌相比,显示了非典型的表型特征。两株分离自骆驼发酵乳,并具有蛋白酶活性的Lactococcus lactis subsp.lactis biovar diacetylactis和分离自马发酵乳的Leuconostocmesenteroides subsp.Mesenteroides在乳中显示高的酸化潜力;以上3株菌适合用作酸化发酵剂,它们既可保留传统Raib的传统的感官特性,同时可以改善Raib的安全性和延长货架期。     

免疫乳研究开发进展

前言 哺乳动物乳汁是机体免疫协凋作用的分泌物之一。免疫乳(Immune milk)是指给哺乳动物(主要指牛、山羊)选择性地接种一些能够引起人或动物疾病的细菌、病毒或其它一些外来抗原,刺激机体产生免疫应答以分泌特异性的抗体(Antibody)或称为免疫球蛋白(Immunoglobulin)进入乳中,这种乳称为免疫乳。抗原(Antigen)是指存在于环境中能够刺激机     

几株益生乳酸菌对Caco-2细胞的黏附及其对致病菌黏附的影响

以Caco-2细胞作为体外模型研究几株乳酸菌的黏附性能及其对大肠杆菌K88和鼠伤寒沙门氏菌的黏附抑制性能。采用荧光标记法评价这几株乳酸菌的黏附性能,并通过竞争、排斥和置换试验检测其对上述2株病原菌黏附的抑制作用。结果表明:1)除了乳酸乳球菌外,其他乳酸菌对Caco-2细胞的黏附率均高于这2株病原菌,且黏附率为乳杆菌(Lactobacillus)>肠球菌>致病菌>乳球菌。2)来源于健康鸡肠道的乳杆菌与分离于人肠道的鼠李糖乳杆菌(Lacto-bacillus rhamnosus)和食果糖乳杆菌(Lactobacillus fructivorans)的黏附率接近。3)大部分乳酸菌菌株能通过置换作用抑制大肠杆菌K88和鼠伤寒沙门氏菌的黏附。结果提示,这几株乳酸菌对肠上皮细胞均有较高的黏附率,尤其是乳杆菌,且它们的黏附有菌属特异性。乳酸菌抑制上述2种病原菌的黏附主要通过置换方式,但没有菌属特异性,且与其自身的黏附力也没有必然的联系。     

分泌型和非分泌型表达猪细小病毒VP2蛋白的重组乳酸菌经口免疫小鼠的效果分析

对比分析在不同细胞部位表达猪细小病毒（PPV）主要免疫保护性抗原VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统作为口服疫苗的免疫效果。将构建的细胞表面表达和分泌表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌分别经口免疫BALB／c小鼠，免疫分3次进行，时间间隔为2周，每次连续接种3d，每只小鼠每次接种100μL10^10CFU／mL的菌量，对照组小鼠接种相同剂量的PBS。初免后不同时间收集免疫小鼠粪便及肠黏液样本测定小鼠产生抗PPV的特异性sIgA抗体水平，采集小鼠血液样本测定其血清中抗PPV的特异性IgG抗体水平。间接ELISA检测结果表明，两种表达系统均能诱导小鼠产生黏膜及系统免疫应答，分泌型的重组菌系统免疫小鼠诱导机体产生的抗PPV的特异性sIgA和IgG抗体水平高于细胞表面表达型的重组菌系统的免疫效果，表明分泌型的重组乳酸菌作为活菌疫苗具有更好的免疫性。     

内蒙古锡林郭勒牧区自然放养家畜肠道中乳酸菌的分离鉴定与潜在益生特性的筛选

乳酸菌是动物肠道内重要的生理性菌群,本研究以内蒙古锡林郭勒盟牧区自然放养的牛、马、山羊和绵羊为研究对象,对其肠道中的乳酸菌进行分离和16S rRNA鉴定,并对38株罗伊氏乳杆菌进行耐酸性、模拟胃肠液转运和胆盐耐受性试验。乳酸菌分离鉴定结果显示共分离到乳酸菌纯培养物96株,包括双歧杆菌属、肠球菌属、乳杆菌属和链球菌属四个菌属,其中乳杆菌属数量最多,为所有分离株的82.29%;乳杆菌属中罗伊氏乳杆菌所占比例最大,为48.10%。益生特性筛选试验结果显示菌株IMAU10240、IMAU10230和IMAU10256具有良好的耐酸、耐胃肠液和胆盐特性,可作为潜在益生菌进行进一步的益生功能研究。     

表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌对仔猪安全性及免疫效力研究

为了检验青岛农业大学预防兽医学重点实验室构建的能够表达猪传染性胃肠炎SLN基因的乳酸乳球菌对仔猪的安全性及免疫效力,试验以口服的方式给试验猪免疫重组菌,监测免疫接种后试验猪体重、临床症状及肠道内正常菌群的变化;给小鼠等非靶标性动物口服该重组菌,检验其安全性,同时利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法监测仔猪体内特异性IgG抗体的变化情况。结果表明:试验仔猪口服免疫重组菌后体重与肠道内正常菌群不受影响,重组菌对仔猪及非靶动物没有致病性,且不会向环境微生物转移; ELISA检测该重组菌免疫仔猪后特异性IgG抗体与免疫前相比有明显差异。说明重组SLN基因的乳酸乳球菌对于预防猪传染性胃肠炎是安全有效的。     

表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的重组乳酸菌的构建及蛋白免疫原性分析

试验旨在构建能表达牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）E2抗原蛋白的重组乳酸乳球菌（Lactococcus lactis），为进一步研制BVDV乳酸菌口服活载体疫苗奠定基础。将BVDV E2基因克隆后测序，根据乳酸乳球菌的密码子偏嗜性进行优化，再将优化的基因片段插入表达载体pNZ8148中，并电转化乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞，构建重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000，经1 ng/mL乳链菌肽诱导表达后，对菌体物进行了SDS-PAGE和Western blotting分析。将重组乳酸菌pNZ8148-E2/NZ9000口服免疫6~12月龄健康犊牛，在免疫后不同时间点采集血液样品并分离血清，用间接ELISA方法检测抗体水平。结果显示，PCR扩增到了1 149 bp的目的片段，乳酸菌密码子偏嗜性优化后，GC含量从45.28%变为34.30%。重组质粒pNZ8148-E2经酶切鉴定插入片段与预期大小相符，在菌体裂解物中出现大小约42 ku的条带，与预期蛋白大小一致，且该蛋白可与BVDV E2抗体反应。在免疫犊牛的血清中检测到特异性抗BVDV E2蛋白的抗体。本研究结果表明，表达BVDV E2蛋白的重组乳酸菌口服免疫可诱导犊牛产生特异性的体液免疫反应，该重组菌具有较好的免疫原性。     

免疫乳与血中抗轮状病毒和大肠埃希氏菌抗体的比较研究

以引起婴儿腹泻的轮状病毒和大肠埃希氏菌为免疫原给妊娠后期乳牛免疫,定期采乳和血,分别用试管凝集反应和反向间接血凝抑制试验检测抗大肠埃希氏菌和轮状病毒抗体,比较血和乳中抗体相互关系。结果表明,乳牛在免疫前只能在初乳中检出抗体;免疫后在初乳和近２个月常乳中均能检测到抗体,两者呈平行关系,仅乳中抗体效价比血中抗体效价低２个滴度。     

免疫乳和免疫初乳

免疫乳是指给牛、羊等哺乳动物选择性地接种一些能引起人或动物疾病的细菌、病毒、毒素等抗原，刺激动物体发生免疫应答，分泌特异性抗体并进入乳汁中，这种乳称为免疫乳。对妊娠期动物接种一种或多种特定抗原所获得的初乳，称为免疫初乳。人饮用免疫乳汁或免疫初乳，就可以获得被动免疫保护，预防一种或多种不同的病原微生物所引起的疾病。     

鼠李糖乳杆菌对早期断奶成华黑仔猪生长性能、免疫性能和肠道菌群的影响

本试验旨在研究饲粮添加鼠李糖乳杆菌对早期断奶成华黑仔猪生长性能、免疫性能和肠道菌群的影响。试验选用32头体重为(7.54±0.19) kg的28日龄断奶成华黑仔猪,随机分为2组,每组4个重复,每个重复4头仔猪。对照组饲喂基础饲粮;鼠李糖乳杆菌组在基础饲粮中添加5.56 mg/kg鼠李糖乳杆菌,使每千克饲粮活菌数达到2.78×10~9CFU。试验预试期7 d,正试期28 d。结果表明:1)与对照组相比,鼠李糖乳杆菌组断奶仔猪平均日增重和肉料比显著提高(P0.05)。2)与对照组相比,鼠李糖乳杆菌组断奶仔猪血清总蛋白、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-2、补体3和免疫球蛋白G含量、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性以及总抗氧化能力显著提高(P 0.05)。3) 16S rDNA基因高通量测序显示,厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)为断奶仔猪盲肠内容物菌群中的优势菌门。在属水平上,鼠李糖乳杆菌组盲肠内容物乳杆菌属(Lactobacillus)和Alloprevotella的相对丰度较对照组分别提高了21.00倍和3.79倍,而盲肠内容物普雷沃氏菌属9(Prevotella_9)和埃希氏菌-志贺氏菌属(Escherichia-Shigella)的相对丰度较对照组分别降低了54.54%和70.62%。综上所述,饲粮添加鼠李糖乳杆菌能够提高早期断奶成华黑仔猪平均日增重和肉料比,提高血清抗氧化能力和机体免疫性能,提高盲肠内容物乳杆菌属和Alloprevotella相对丰度,降低盲肠内容物埃希氏菌-志贺氏菌属相对丰度,改善肠道菌群结构,促进肠道健康,从而提高其生长性能和免疫性能。     

东北虎肠道降胆固醇乳杆菌的分离鉴定

为了筛选适宜开发降胆固醇保健食品的乳杆菌,试验采用乳杆菌选择培养基(LBS),从东北虎肠道分离、筛选得到10株乳杆菌。采用高胆固醇乳酸杆菌培养液(MRSO-CHOL)对分离菌进行体外降胆固醇试验,并对降胆固醇最高的3株菌进行耐酸及耐胆汁盐试验;对胆固醇降解率高、耐酸、耐胆汁盐的菌株进行形态学、生理生化反应和16S rDNA鉴定。结果表明:从东北虎肠道分离得到的10株乳杆菌,体外均有降解胆固醇的能力,降解率为25.00%～65.00%,平均降解率为45.00%。菌株1胆固醇降解率为55.00%,且耐酸、耐胆汁盐的能力均较强,鉴定其为嗜酸乳杆菌。     

被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对比格犬血清免疫指标及肠道菌群结构的影响

本试验旨在比较被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对比格犬血清免疫指标及肠道菌群结构的影响。制备被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39,采用平板计数法比较不同生物状态的植物乳杆菌LR-39经酸、胆盐环境处理后的存活率。选取15只3.5月龄比格犬,随机分为被膜组、浮游组及对照组3个组,每组5只。被膜组、浮游组每日早上采食犬粮后分别灌饲被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39菌液1 mL (1×10~9CFU/mL),对照组灌饲等体积磷酸盐缓冲液(PBS),连续灌饲28 d。检测血清免疫球蛋白G(IgG)、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,并对肠道菌群进行16S rDNA高通量测序分析。结果表明:1)经酸性和胆盐环境处理后,被膜态植物乳杆菌LR-39存活率显著或极显著高于浮游态植物乳杆菌LR-39(P0.05或P0.01)。2)与对照组相比,被膜组血清IgG和sIgA含量极显著提高(P0.01);与浮游组相比,被膜组血清sIgA含量极显著提高(P0.01),血清IL-6含量有降低趋势(0.05≤P0.10);与对照组相比,浮游组血清IgG、sIgA、IL-6、TNF-α含量无显著差异(P0.05)。3)α多样性分析显示,与对照组相比,被膜组和浮游组Observed species指数、Chao指数、Ace指数均升高,被膜组Shannon指数升高,Simpson指数下降;浮游组Shannon指数下降,Simpson指数升高。主坐标分析(PCoA)结果显示,3组样本间有明显聚类现象。4)在门水平上,与对照组相比,被膜组肠道厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度升高,肠道拟杆菌门(Bacteroidetes)、梭杆菌门(Fusobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)相对丰度降低;浮游组肠道Bacteroidetes、Fusobacteria相对丰度升高,Firmicutes、Actinobacteria相对丰度降低。5)在属水平上,与对照组相比,被膜组肠道双歧杆菌属(Bifidobacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、Allobaculum、消化链球菌属(Peptostreptococcus)相对丰度升高;浮游组肠道Lactobacillus、Peptostreptococcus、梭杆菌属(Fusobacterium)、普雷沃菌属(Prevotella)、萨特氏菌属(Sutterella)相对丰度升高。6)LEfSe分析表明,被膜组优势菌属是Lactobacillus,浮游组优势菌属是Fusobacterium,对照组优势菌属包括柯林斯氏菌属(Collinsella)、链型杆菌属(Catenibacterium)、真杆菌属(Eubacterium)。7) Spearman相关性分析显示,血清IgG、sIgA、IL-6、TNF-α含量与肠道富集菌群相对丰度无显著相关性(P0.05)。由此可见,被膜态与浮游态植物乳杆菌LR-39对犬肠道菌群结构影响不同,被膜态植物乳杆菌LR-39具有更强的耐酸及胆盐能力,可有效调整肠道菌群结构并能提高机体免疫水平。     

獭兔肠乳杆菌的分离鉴定

随机选择南昌某兔场养殖的的獭兔,从十二指肠中分离出多株乳酸菌,对其中7株优势菌用常规生化法结合分子鉴定法进行分离鉴定。结果显示：7株优势菌均为G+杆菌,生化特性与乳杆菌相符,分子特性与唾液乳杆菌相符。结论：7株优势菌均为唾液乳杆菌,唾液乳杆菌为獭兔肠道的优势常在菌。本试验可为开发獭兔源益生菌制剂提供优质的后备菌株分离方案。     

免疫酸奶制作的研究概况

免疫乳是指给哺乳动物（主要指牛、山羊）选择性地接种一些能够引起人或动物疾病的细菌、病毒或其他一些外来抗原,刺激机体产生免疫应答以分泌特异性的抗体或称为免疫球蛋白进入乳中,这种乳称为免疫乳。免疫乳中的免疫活性物质丰富,免疫球蛋白（Ig）是其中很重要的一种。然而,免疫乳在常规的巴氏消毒和超高温瞬时灭菌时,其中的免疫球蛋白活性会显著地降低。     

乳铁素参与乳房链球菌对乳腺上皮细胞的粘附

免疫印迹试验表明，试验用的3株乳房链球菌（Streptococcus uberis)菌株均可与乳铁素（Lactoferrin)结合。培养基中加入乳铁素或乳清可以显著促进细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附，抗乳铁素抗体可以特异性地抑制乳铁素或乳清预处理细菌与乳腺上皮细胞的粘附。乳铁素在细菌和细胞之间起着桥梁分子作用。有助于细菌与乳腺上皮细胞之间的粘附和乳腺感染的建立。     

抗奶牛乳腺炎多价卵黄抗体的制备及含量测定

本研究的目的是制备抗奶牛乳腺炎主要致病菌的多价卵黄抗体并检测特异性抗体的含量。采用金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌混合抗原免疫产蛋母鸡。通过水稀释法分离卵黄抗体。采用ELISA法检测抗体效价和特异性抗体含量。多价抗体与大肠杆菌的结合效价最高可达25600,与金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的结合效价为12800。每毫升卵黄液中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌特异性卵黄抗体（egg yolk immunoglobulin,IgY）的最高含量分别为2.13、2.01和1.92 mg。免疫后特异性抗体含量随时间变化趋势与抗体效价变化趋势一致。     

免疫乳的功能特点及其开发应用进展

通过对牛、羊等哺乳动物选择性地接种一些能引起人或动物疾病的细菌、病毒或其他一些外来抗原等物质导致机体发生免疫应答，从而获得免疫乳。随着研究地不断深入，已初步成功制备一些具有特异性抗体的免疫乳(或免疫初乳)。本文就初乳成分及免疫功能，免疫乳研究和开发的进展做一概括性地介绍。