乌鸡肠道中一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

本试验采用添加碳酸钙的MRS培养基作为筛选培养基，从乌鸡肠道中筛选乳酸菌，并对分离到的菌种进行16S rDNA基因序列鉴定以及益生性能研究，测定其生长速率、产酸能力、耐酸和耐胆盐性能、抑菌能力及抗生素敏感性。试验结果表明：分离到的溶钙圈较好的菌株N为乳酸菌，分离菌株N产酸能力强，达到对数期的时间短，在低pH、高胆盐浓度时，仍具有较好生长活性。 [关键词] 乳酸菌|乌鸡|益生性能     

基于GGE双标图分析紫花苜蓿根瘤菌的抗盐性

为准确评价紫花苜蓿根瘤菌的抗盐性,采用GGE双标图对来自兰西地区、哈尔滨地区的6个紫花苜蓿根瘤菌(Rhizobium)菌株分别进行耐盐性、耐酸碱及其泌酸碱能力的评价研究,结果表明:哈尔滨地区紫花苜蓿根瘤菌株Hmx c耐盐性极强,在10％ NaCl培养基上生长正常;兰西地区紫花苜蓿根瘤菌株Lmx-a和哈尔滨地区紫花苜蓿根瘤菌株Hmx-b耐酸性最强,能在pH4.0的培养基上正常生长;耐碱性最强的是兰西地区菌株Hmx-c,可以在pH12.0的培养基上正常生长.进一步试验表明,菌株Hmx-a既能抗pH4.0的酸逆境,又能抗pH11.0的碱逆境.同时,菌株耐碱性的强弱与其泌酸能力相关.GGE双标图为研究紫花苜蓿根瘤菌的抗逆性提供了更为直观有效的分析手段.     

卤水中耐酸耐盐产细菌素乳酸菌的筛选

为筛选出适合作为微生物饲料添加剂且有抑菌活性的乳酸菌，以贵州省黔东南苗族侗族自治州农家生产卤水为试验对象，筛选耐酸、耐盐且有抑菌活性的乳酸菌。采用琼脂扩散法，对其生长曲线、产酸能力、耐酸能力和耐盐能力进行研究，经过观察其生长特性、生理生化鉴定、16S r DNA测序分析对菌种进行鉴定，并通过排酸试验、排过氧化氢试验和蛋白酶敏感试验对其抑菌物质种类进行初步分析。结果显示：从卤水中初步分离出的155株菌，筛选得到1株MMB-09，对金黄色葡萄球菌、腐败希瓦氏菌、大肠杆菌以及蜡样芽孢杆菌有良好的抑菌效果，其中对腐败希瓦氏菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达（14.3±0.42）mm；该菌株在8 h时OD600达到2.0以上，在12 h进入生长稳定期；有较好的产酸能力，8 h时其pH就已经降至4.2；具有较好的耐酸性和耐盐性，在pH为3和盐含量80 g/L时仍生长良好。对菌株进行形态学特征、生理生化鉴定和16S r DNA测序分析鉴定其为植物乳杆菌。该菌株在pH为6时还保留50.15%的抑菌活性，对过氧化氢酶不敏感以及蛋白酶处理后抑菌效果下降明显（P <0.05），表明其抑菌成分中包含蛋白类...     

3株乳酸片球菌的鉴定及其耐酸耐盐特性和抑菌作用研究

为了探索从日本处理有机废弃物样品中分离的乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)耐酸耐盐特性和抑菌作用,采用浸注培养法从处理有机废弃物样品中进行菌株分离,并对分离菌株R-4、B-7、D-13进行生理生化及16S rDNA鉴定;分别将其接种于pH4的MRS肉汤培养基和50 mg/mL NaCl的MRS肉汤培养基中37℃培养48 h,观察其生长情况;通过牛津杯法测其培养液对大肠埃希菌K88、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌的抑菌作用。结果从日本处理有机废弃物样品中分离得到13株乳酸球菌,其中菌株R-4、B-7、D-13经鉴定均为乳酸片球菌;并在50 mg/mL NaCl和pH4的MRS肉汤培养基中生长良好且呈现较好的耐酸耐盐特性;3株乳酸片球菌的培养液对4种指示菌均呈现抑制作用,其中菌株B-7的培养液对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,抑菌圈直径达17.02 mm±0.33 mm,但其培养液中酸性产物及H_2O_2产物排除结果说明,对金黄色葡萄球菌的抑菌作用可能与其在生长过程中产生的酸有关。研究结果为乳酸片球菌特性及其应用的进一步研究提供了科学依据,为筛选出处理有机废弃物的微生物发酵菌奠定了基础。     

贵州黄壤地区葛藤根际溶磷细菌溶磷、分泌IAA及其它特性研究

从葛藤(Pueraria lobata)根际分离出8株具有较强溶解无机磷能力的菌株,溶磷圈法测定菌株的HD/CD值(溶磷圈直径HD,菌落直径CD)在2.14～6.73,液体振荡培养下菌株对磷酸钙的溶解量在72.28～159.15mg/L,菌株培养液pH值较初始培养基的pH值7.0均下降。菌株GTR2和GTR15溶解磷酸钙(分别为159.15mg/L、138.72mg/L)及分泌IAA能力(分别为12.71mg/L、14.44mg/L)均较大,且均为碱性菌株,能在甘露醇等多种碳源上较好生长。综合各菌株的溶磷及分泌IAA能力,菌株GTR2和GTR15有望成为高效微生物磷肥接种剂的优良菌种。     

一株来自东祁连山高寒草地土壤纤维素分解真菌培养特性的研究

对一株来自东祁连山高寒草地土壤具有纤维素分解能力的真菌的培养特性进行了研究.结果表明:供试菌株的菌丝生长温度5～35℃,最适生长温度30℃;在参试的pH范围均能生长,并且在pH7.08的环境生长最快;供试菌株具有一定的耐盐和抗干旱胁迫的能力;对不同的碳、氮源利用能力不同,在供试的11种碳源和12种氮源中,乳糖和大豆蛋白...     

绵羊肺炎支原体肺炎诊断及病原分离鉴定

1材料与方法1.1主要材料SPF鸡胚,购自山东省农科院家禽研究所。培养液的制备:(1)基础液:N aC l 2.5 g,KC l0.2 g,N a2HPO4·12 H2O 0.8 g,M gSO4·7H2O0.1 g,葡萄糖5.0 g,水解乳蛋白2.5 g,溶解于500m l去离子水中,115℃灭菌20 m in。(2)培养基:基础液100 m l,猪血清13 m l,25%酵母浸出液10 m l,青霉素10万IU,1%酚红0.1 m l,1/80醋酸铊1 m l。上述成分各自除菌后,在无菌条件下,混合均匀,并用1 m o l的N aOH调pH 7.7~7.8,装瓶保存。一部分,加入2%~2.5%琼脂,制成固体F rey氏培养基。1.2病料采集发病羊为30日龄的刚断奶羊羔,死亡率100…     

一株猪源粪肠球菌的益生性能评价

为评价一株来源于动物肠道的粪肠球菌SX106的益生性能,本试验对其生长曲线、产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力、药敏性以及抗氧化能力等指标进行了分析。试验得出：该菌株37℃厌氧培养2 h开始进入对数生长期,12 h进入稳定期;培养液pH值在第2 h迅速下降,第12 h降至4.15,乳酸产量达到45.56 mmol/L;该菌株在pH 3.0环境下存活率达到50%以上,在0.3%胆盐浓度下存活率达到95%以上;该菌株对氟苯尼考和多西环素敏感,对环丙沙星、左氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟、氧氟沙星、阿莫西林和恩诺沙星中度敏感,对青霉素、链霉素、甲氧氨苄嘧啶、氨苄西林、阿奇霉素、卡那霉素和庆大霉素不敏感;对DPPH自由基的清除率达到88.24%。综上,粪肠球菌SX106能耐受胃酸环境,且有良好的耐胆盐能力和抗氧化能力。     

两株干酪乳杆菌生物学特性的研究

在模拟人体消化道环境中,对2株干酪乳杆菌耐酸、耐胆盐和耐NaCl等生物学特性进行了研究.结果表明,2株干酪乳杆菌在pH值为2.5～4.5的人工胃液或人工肠液中作用3h后均能生长,活菌数达到1010个/mL左右.此外,在胆盐浓度为2.5g/L或高盐浓度比例为7.5%的条件下亦能正常生长.该研究表明,这2株菌株在人体或动物中具有较好的适应性,可以作为益生菌用于食品工业.     

戊糖片球菌的耐酸及耐胆盐能力研究

本实验对戊糖片球菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验.结果表明,在pH 2.5、3.5条件下培养4h后,戊糖片球菌PP的活菌数分别能达到108 cfu/mL和1010 cfu/mL以上.在胆盐质量分数为0.1％、0.2％和0.3％的MRS培养基中培养4h后,戊糖片球菌PP生长良好,活菌数均在106cfu/mL以上,其中胆盐质量分数为0.1％时,戊糖片球菌PP存活率能达到133.3％.模拟胃液和模拟肠液实验结果表明,该菌株能够有效通过胃环境,能在肠道中繁殖.结果可见,戊糖片球菌PP具有较强的耐酸耐胆盐能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求.     

CQ10-LPSp对紫花苜蓿幼苗内生细菌多样性及其根瘤菌的影响

为了探究成团泛菌CQ10脂多糖（Pantoea agglomerans CQ10 Lipopolysaccharide,CQ10-LPSp）对紫花苜蓿（Medicago sativa L.）幼苗内生细菌多样性及其根瘤菌（Rhizobium）的影响,本试验首先研磨分离‘巨能551’紫花苜蓿幼苗内生细菌,后设置6个不同浓度梯度（0,0.133 5,0.200 3,0.267 0,0.333 8,0.400 5 EU·mL^-1）的CQ10-LPSp与紫花苜蓿互作,再分离并测定了其根系内生细菌的种类和数量以及根瘤菌的数量。结果显示,随着CQ10-LPSp浓度的增大,紫花苜蓿内生根瘤菌的数量呈先升高后降低的变化趋势,在0.267 0 EU·mL^-1 CQ10-LPSp下根瘤菌数量最多,为6.98×10⁷ cfu·g^-1,且该浓度下根系内生细菌种类较种带细菌多样性减少。结果表明,CQ10-LPSp处理下会影响植物内生细菌的种类和数量,且在一定浓度范围内能增加紫花苜蓿内生根瘤菌的数量。本研究结果为开发促进紫花苜蓿内生根瘤菌生长的外源添加剂奠定一定的理论和实践基础。     

碱蓬根际和内生细菌菌株对盐碱胁迫下苜蓿生长的影响

为研究碱蓬根际和内生细菌菌株对盐碱胁迫下苜蓿幼苗生长的影响,试验以龙牧801紫花苜蓿为供试品种,将前期从碱蓬根内(JG1)、根际土壤(JT4)和茎内(JJ5)筛选出的具有较强耐盐碱胁迫能力的根际及内生细菌菌株接种于苜蓿幼苗根部。接菌1周后将中性盐(NaCl、Na₂SO₄)和碱性盐(NaHCO₃、Na₂CO₃)按NaCl∶Na₂SO₄∶NaHCO₃∶Na₂CO₃=9∶1∶1∶9混合,并设置0、100、150、200 mmol·L^-1盐碱浓度溶液浇灌苜蓿幼苗根部,进行盐碱胁迫处理。分析盐碱胁迫下碱蓬根际及内生细菌菌株对苜蓿生长及生理的影响,并通过隶属函数和主成分分析综合评价碱蓬根际和内生细菌菌株对盐碱胁迫下苜蓿生长的影响。结果表明:3株促生细菌均能缓解盐碱胁迫对紫花苜蓿生长的抑制作用,促进紫花苜蓿生长,不同促生细菌对盐碱胁迫下苜蓿促生效果为JT4>...     

贵州尾矿区野生豆科牧草根瘤菌及其抗性测定

为了筛选获得对复合重金属具有耐受能力且能在本地豆科植物根系内定殖共生的抗性根瘤菌,本研究从贵州省内的锰矿区、铅锌矿区采集野生豆科牧草根瘤样品,经分离纯化、菌体形态观察、16S rRNA基因序列比对分析,获得71个根瘤菌保存菌株。系统发育和区系分析结果表明,分离菌株分属7属28种,其中根瘤菌属(Rhizobium)的分布频率高达54.93%,为优势属,木兰根瘤菌(R.indigoferae)的分布频率最高(15.49%),为优势种。选择来自不同尾矿区、不同种类的根瘤菌17株,采用重金属平板法测定各供试菌株对贵州尾矿土分布较多的Pb²⁺,Zn²⁺,Cr⁶⁺,Mn²⁺,Cd²⁺五种重金属的耐受性,结果发现17个菌株对3种或3种以上的重金属都具有不同程度的耐受能力,其中HMZT039-6,HSST042-6,HSST042-1,ZHQT052-1和HXTT050-1对5种重金属离子均有耐受能力,为筛选出的最优抗性根瘤菌株。本研究结果可为本地区土壤重金属污染的修复治理提供共生微生物资源。     

苜蓿绿汁发酵液发酵条件研究

苜蓿(Medicago sativa)绿汁发酵液作为青贮添加剂,可以提高青贮的质量。在苜蓿绿汁发酵液中添加不同比例的葡萄糖(0%、1%、2%和5%)和氯化钠(0%、0.5%和1%),做3×4正交试验,研究其对绿汁发酵液发酵品质和乳酸菌数量的影响。结果表明:绿汁发酵液中氯化钠和葡萄糖水平及其交互作用对pH值、可溶性碳水化合物、氨态氮和乙酸含量的影响极显著(P<0.01);添加0.5%氯化钠,氨态氮含量和pH值极显著低于0%和1%;可溶性碳水化合物含量极显著高于氯化钠0%和1%添加水平(P<0.01);苜蓿绿汁发酵液中以同时添加0.5%氯化钠和2%葡萄糖的发酵品质最好。     

青海箭筈豌豆根瘤菌的筛选及其共生体耐盐性研究

箭筈豌豆是我国传统肥饲兼用的豆科绿肥作物,有关箭筈豌豆根瘤菌的研究尚属空白。为获得抗逆性强的根瘤菌菌株,在青海主产区采集样本,经分离、鉴定得到61株箭筈豌豆根瘤菌。采用水培回接法,通过主成分分析筛选出5株对宿主结瘤生长促进作用较强的根瘤菌(J1-3-2、J2-6-2、J3-12-1、J4-3-3和J5-5-3)。对该5株根瘤菌进行了离体耐盐性评价,发现菌株J5-5-3最大耐盐极限值在0.9%左右,其他4菌株最大耐盐极限值均在1.2%左右,并且5菌株的耐盐特征呈3个明显不同类型:J3-12-1和J2-6-2耐盐性最强,菌株J1-3-2和J4-3-3居中,菌株J5-5-3最差。进一步采用盆栽方法评价了其中3株(每类型1株)根瘤菌-箭筈豌豆共生体的耐盐性,结果表明,在0.15%NaCl胁迫下接种根瘤菌J5-5-3植株结瘤数最多,在0.30%NaCl胁迫下3种接种处理无显著差异;在0.15%和0.30%NaCl胁迫下,接种J3-12-1共生体株高显著大于对照(P<0.05);在0.15%和0.30%NaCl胁迫下根瘤菌J3-12-1和J5-5-3可显著提高植株干重(P<0.05);J5-5-3在0.15%和0.30%NaCl胁迫下可显著提高植株含氮量并显著提高0.15%NaCl胁迫下的植株吸氮量(P<0.05);J3-12-1显著提高了0.15%NaCl胁迫下的植株吸氮量(P<0.05)。综合来看,J3-12-1和J5-5-3可以作为在盐胁迫下提高箭筈豌豆生物量和含氮量的预选菌株。     

不同苜蓿品种种子萌发时期的耐盐性比较

借鉴农作物研究的理论和方法,在实验室条件下用质量分数为0、0.3%、0.6%、0.9%、1.2% 5个梯度的NaCl溶液对7个苜蓿Medicaga sativa品种的种子进行处理,每个处理设置3个重复。通过发芽率、发芽指数、活力指数、活力指数相对下降率对各苜蓿种子萌发期的耐盐性进行了比较。结果表明：低质量分数的NaCl溶液能促进种子的萌发,高质量分数的NaCl溶液则抑制了其萌发特性。综合种子的发芽率和萌发的速度与整齐度,7个苜蓿品种中耐盐能力最强的是巨人和三德力,显著高于其他品种（P<0.05）,其次是WL323、德宝、皇冠、L90,耐盐能力最弱的是歌德。     

Screening of Pychrotrophic Lactic Acid Bacteria from Changbai Mountain Soil

The purpose of the experiment was to screen psychrotrophic lactic acid bacteria with strong stress-resistant growth ability,acid production ability and good bacteriostatic characteristics in vitro,and analyze its related biological characteristics,so as to provide excellent psychrotrophic lactic acid bacteria resources for low temperature silage in Northeast China.The culture condition of 10 ℃ was used to screen the psychrotrophic lactic acid bacteria.After the determination of the growth characteristics of Lactobacillus under different pH,temperature and salinity conditions,the species identification of the candidate strains was carried out,and the growth curve,acid production curve,acid and bile salt resistance,bacteriostatic performance and feeding test of mice were conducted for the candidate strains.The results showed that 11 strains of psychrotrophic lactic acid bacteria could grow well at 10 ℃.The strains C37,C34 and C4212 were identified as Lactobacillus plantarum by 16S rRNA sequencing analysis.The pH of C37,C34 and C4212 decreased to below 4.25 after 7 days of culture.In addition,C37,C34 and C4212 could grow well at 4 ℃,45 ℃,pH 3.0 and 6.5% NaCl.The analysis of growth curve showed that the three strains of Lactobacillus all had a fast growth rate,entered the logarithmic growth period at 4 h,and entered the stable growth period in 10-12 h after inoculation.In the aspect of acid production rate,C37,C34 and C4212 could reduce pH below 4.04 at 24 h of culture.At pH 3.0,C37 and C4212 had a high survival rate,they all had a certain tolerance to 0.5% bile salt,and the survival rate was more than 80%.C37,C34 and C4212 had inhibitory effect on enterotoxin producing Escherichia coli,Salmonella Typhimurium,Staphylococcus aureus and Salmonella Enteritis,and the animal test of three Lactobacillus plantarum were safe.Based on the results of this experiment,Lactobacillus C37,C34 and C4212 were screened and identified from the forest soil of Changbai Mountain,which could provide excellent lactic acid bacteria resources for low temperature silage in winter in Northeast China.     

长白山原始森林土壤源耐低温乳酸菌的筛选

试验旨在筛选长白山原始森林土壤中耐胁迫生长能力强、产酸能力强、体外抑菌特性好的耐低温乳酸菌,并对其相关生物学特性进行分析,为东北地区寒冬季节低温青贮提供优良乳酸菌菌种资源。采用低温（10℃）进行耐低温乳酸菌初筛,经不同pH、温度及盐度等条件下进行乳酸菌生长特性测定后,进行候选菌株的种属鉴定,并对候选菌株进行生长曲线、产酸曲线、耐酸和耐胆盐性能、抑菌性能测定及小鼠饲喂试验。结果显示,通过10℃低温条件培养,初筛获得11株能够良好生长的耐低温乳酸菌,其中C37、C34和C4212经16S rRNA测序分析后鉴定为植物乳杆菌,在培养7 d时,pH均可下降至4.25以下,均能够在4℃、45℃、pH 3.0、6.5% NaCl等条件下良好生长。生长曲线分析发现,3株乳酸菌均在4 h达到对数生长期,10~12 h后进入生长稳定期。在培养24 h时,C37、C34和C4212可将pH分别降至4.04以下,在pH 3.0条件下,C37和C4212具有较高的存活率,且对0.5%胆盐具有一定的耐受性,其存活率均在80%以上。对常见病原菌体外抑菌表明,3株乳酸菌对产肠毒素大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及肠炎沙门氏菌均有抑制作用,小鼠饲喂试验表明生物安全性好。本试验结果表明,从长白山原始森林土壤中筛选和鉴定出的乳杆菌C37、C34、C4212可作为东北地区寒冬季节低温青贮优良乳酸菌菌种资源。     

牛瘤胃微生物的分离鉴定与生化特性分析

【目的】通过对瘤胃液中分离所得的菌株进行研究,为益生菌制剂的制备提供基础数据。【方法】采集10头健康荷斯坦奶牛的瘤胃液,通过涂布、特性培养、纯化等步骤获得单一菌株,提取细菌DNA,进行16S rDNA的PCR扩增。通过16S rDNA基因测序鉴定后进行序列比对并构建系统发育树,确定菌株种类。对不同种类的细菌进行0～48 h的培养测定其生长特性,并进行耐酸碱和耐胆盐试验。【结果】通过涂布分离菌株得到20株分离菌,经PCR扩增后测序发现20株菌属于7种不同的菌,大致确定L7为解淀粉芽孢杆菌、K7为枯草芽孢杆菌、S7为嗜麦芽窄食单胞菌、C2为地衣芽孢杆菌、M7为马链球菌、F7为弗氏酸柠檬杆菌、T7为吉氏库特菌。通过生长曲线可以看出,7株菌分别在24～36 h达到最快生长期。M7和K7对酸有较强的耐受性,而S7、C2和F7对酸性较为敏感,C2对碱的耐受性最强,而T7对胆盐的耐受性最强,S7对胆盐最不耐受。【结论】本研究从瘤胃中分离得到的7个菌株对酸碱和胆盐具有不同程度的耐受性,以及最适生长周期。     

pH和氮素形态对紫花苜蓿根瘤特性的影响

采用砂培方法,在营养液条件下研究了pH和不同氮素形态对接种中华根瘤菌的甘农3号紫花苜蓿根瘤特性的影响。结果表明,苜蓿对碱性条件的耐受性强于酸性条件。过低或过高的pH对苜蓿与根瘤菌的共生固氮效果具有抑制作用;同时,铵态氮下培养的紫花苜蓿根瘤数、根瘤重、固氮酶活性、根系全氮含量和生物量均高于硝态氮下培养。表明pH接近于中性和铵态氮条件更有利于紫花苜蓿的结瘤固氮和植株的正常生长。