大白菜下胚轴不定芽再生过程中内源激素和多胺含量的变化

研究了大白菜[Brassica campestris ssp．pekinensis(L．)Olsson]下胚轴不定芽再生过程中内源激素和多胺含量的动态变化。结果表明,芽原基出现以前(接种后0～8d)外植体内源玉米素核苷(ZRs)和脱落酸(ABA)含量上升,而吲哚乙酸(IAA)含量下降；不定芽出现(接种后8d)后变化趋势相反；ABA／IAA值和ZRs／IAA值在培养初期(接种0～8d)增大,不定芽出现以后逐渐减小。不定芽分化过程中外植体内源腐胺(Put)、精胺(Spm)和亚精胺(Spd)含量都表现为先上升后下降,均在培养第8d时达到峰值；Spm／Put值和Spd／Put值的变化趋势也与此相似。说明大白菜下胚轴不定芽的再生与内源激素和多胺含量及平衡有密切关系。     

结球白菜高效离体子叶不定芽再生的研究

以 2个日本优质结球白菜爱知结球白菜 (C1 ) 和新理想白菜 (C2 ) 的子叶为外植体, 研究了不同激素配比、AgNO3浓度和苗龄对不定芽再生的影响。结果表明, 与 6 BA相比, TDZ对子叶不定芽再生的效果更好。在MS 0 5mg·L-1 NAA 1mg·L-1 TDZ培养基中, 2个品种的子叶不定芽再生率分别达到 75 0%和 55 0%。在此基础上, 添加 5mg·L-1 AgNO3 时, C1 和C2 子叶不定芽再生率分别达到 96 7%和 80 0%, 并以 5~8d为子叶不定芽再生的最佳苗龄。     

结球白菜高效离体子叶不定芽再生的研究

以2个日本优质结球白菜爱知结球白菜(C1)和新理想白菜(C2)的子叶为外植体,研究了不同激素配比、AgNO3浓度和苗龄对不定芽再生的影响.结果表明,与6-BA相比,TDZ对子叶不定芽再生的效果更好.在MS+0.5 mg·L-1 NAA+1 mg·L-1 TDZ培养基中,2个品种的子叶不定芽再生率分别达到75.0%和55.0%.在此基础上,添加5 mg·L-1 AgNO3时,C1和C2子叶不定芽再生率分别达到96.7%和80.0%,并以5～8 d为子叶不定芽再生的最佳苗龄.     

普通不结球白菜抗虫转基因植株的获得

以普通不结球白菜品种“中脚黑叶”和“矮脚黑叶”种子无菌苗的子叶为外植体材料,在附加２ｍｇ／Ｌ ＣＰＰＵ、０．１ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ和７．５ｍｇ／Ｌ ＡｇＮＯ３的稍作修改的ＭＳ培养基上诱导不定芽,子叶（柄和子叶切段诱导不定芽频率分别为３２．５２％、４．３５％和４．７９％、１１．５５％。应用农杆菌介导法将含有豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（ＣｐＴＩ）和新霉素磷酸转移酶基因（ＮＰＴⅡ）的重组质粒导入普通不结球白菜,获得具有卡那霉素抗性的再生植株。具有卡那霉素抗性的当代转基因植株（Ｔ０）及其自交后代（Ｔ１）植株经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分子检测,确认抗虫基因已整合到受体植株的基因组中,并通过有性生殖遗传给后代。体外生物学测定结果,显示抗虫性在转基因植株自交后代植株中得到表达。     

新梢内源激素变化对设施葡萄花芽孕育的影响

【目的】通过研究花芽分化进程中葡萄新梢内源激素的变化规律,明确激素对设施促早栽培葡萄花芽孕育的影响,为解决设施葡萄促早栽培中“隔年结果”问题提供理论依据。【方法】以4年生贝达嫁接的‘京蜜’（V.vinifera cv. Jingmi,耐弱光品种,在日光温室促早栽培条件下不需采取任何措施即可连年丰产）与‘夏黑’（V. vinifera-V. labrusca cv. Summer Black,非耐弱光品种,在日光温室促早栽培条件下需采取更新修剪措施方能连年丰产）为试材,进行设施促早栽培（‘京蜜’和‘夏黑’）和露地栽培（‘夏黑’）处理。采集基部第1节粗度大于0.5 cm的葡萄新梢,选取其上2-3节冬芽主芽作为研究对象,借助石蜡切片法绘制取样时期-分化比率花芽分化进程图,观察其花芽分化进程;同时借助酶联免疫法测定新梢基部2-3节枝段赤霉素（GAs）、细胞分裂素（ZRs）、脱落酸（ABA）和生长素（IAA）等内源激素含量和比值的变化。【结果】新梢内源激素含量变化：与成花极差的设施促早栽培‘夏黑’不同,成花良好的设施促早栽培‘京蜜’和露地栽培‘夏黑’自雏梢生长点的未分化期（新梢展5-7叶）至雏梢生长点的顶分期（初花期）新梢内源ZRs含量一直呈稳定上升趋势;自雏梢生长点的半球/平顶分化盛期（花穗分离期）至始原始体分化盛期（坐果期）新梢内源ABA含量迅速增加;自雏梢生长点的未分化期（新梢展5-7叶）至始原始体分化盛期（果实膨大初期）新梢内源GAs的含量呈降-升-降的变化趋势;在整个花芽分化进程中新梢内源IAA的含量较高。新梢内源激素含量比值变化：与成花极差的设施促早栽培‘夏黑’不同,成花良好的设施促早栽培‘京蜜’和露地栽培‘夏黑’于花穗分离期（雏梢生长点半球/平顶期至顶分期）和果实膨大期（始原始体至花序主轴及各小穗原基形成期的分化盛期）新梢内源ZRs/GAs的比值显著增加;自花穗分离期（雏梢生长点半球/平顶期至顶分期）新梢内源ZRs/IAA的比值略微上升随后（半球/平顶期到花序二级轴分化盛期）保持平稳,且维持在较低水平;果实膨大后期（始原始体出现盛期至花序二级轴开始形成）新梢内源的ABA/GAs比值显著增加;果实膨大期（始原始体至花序主轴及各小穗原基形成期的分化盛期）之后新梢内源的ABA/IAA比值保持稳定,维持在较低水平。【结论】果实膨大期（始原始体形成）之前是花芽分化调控的关键时期。果实膨大期之前新梢内源GAs含量缺乏变化、初花期前ZRs含量和花穗分离期至坐果期ABA含量迅速下降、花芽分化进程中新梢内源IAA含量低可能是设施葡萄不能形成良好花芽的重要原因。激素间通过特定时期的平衡互作调控设施葡萄的花芽分化。花穗分离期之后新梢保持较低且稳定的内源ZRs/IAA比值利于成花,花穗分离期和果实膨大期新梢内源ZRs/GAs比值的显著上升、果实膨大期之后较高的ABA/GAs比值和较低且稳定的ABA/IAA比值促进了始原始体及花序主轴发育和二级轴的形成。     

大樱桃花芽分化期内源激素含量的变化

在大樱桃花芽分化期观察的基础上，对该期花芽和叶芽内源激素ZRs（玉米素核苷）、IAA（生长素）、GA1／3（赤霉素）、ABA（脱落酸）含量变化进行了研究。结果表明：大樱桃花芽分化期需要有高水平的ZRs、低水平的GA1／3和IAA。结合激素平衡学说，本研究认为：ZRs/IAA、ZR s/GA1/3、ABA／IAA和ABA／GA1／3值增大，可促进芽体上营养生长向生殖生长转变，有利于花芽的形成。     

优质、抗热同源四倍体不结球白菜的创制及鉴定

以二倍体抗热不结球白菜品种‘依伶’为材料,用不同浓度秋水仙素溶液处理子叶期生长点,对变异株进行倍性鉴定,研究不同倍性水平的营养品质、农艺学性状以及抗热性。结果表明：（1）0.2％秋水仙素处理4次的效果最好,四倍体加倍率为7.64％。与二倍体相比,叶片长和宽、叶柄长和宽、花器官、气孔、花粉粒、叶重、柄重、开展度、单株重均增加或增大,但结实率明显降低,以上指标差异均达显著或极显著水平。流式细胞仪及染色体鉴定四倍体DNA含量、染色体数目均为二倍体的2倍。小区产量比二倍体高出12.62％;（2）四倍体叶片和叶柄中可溶性总糖、可溶性蛋白、干物质分别增加了7.32％、74.85％,3.91％、17.22％,1.94％、4.89％,有机酸降低了22.56％、25.00％,差异显著;（3）热胁迫下,二、四倍体不结球白菜叶片的MDA、游离脯氨酸、可溶性蛋白含量均增加,恢复期内含量都降低,但二倍体MDA、游离脯氨酸含量一直高于四倍体,可溶性蛋白低于四倍体。四倍体表现出优质、抗热的特点。     

向日葵(Helianthus annuus L.)不同外植体组织培养及其再生的研究

【目的】建立向日葵不同外植体离体培养再生体系，为向日葵遗传转化、突变体筛选奠定基础。【方法】以不同基因型向日葵为材料，研究了向日葵不同外植体在不同的培养基中诱导不定芽再生的频率。【结果】向日葵不同基因型外植体在含适宜吲哚-3-乙酸（IAA）、6-苄氨基嘌呤（6-BA）等激素的培养基中均较易形成愈伤组织，但愈伤组织诱导不定芽的能力则较弱；不同基因型向日葵外植体的不定芽诱导率依次为子叶节＞下胚轴＞子叶＞真叶；诱导子叶节不定芽再生的适宜6-BA浓度为1.2～1.8 mg•L-1， 下胚轴为1.8 mg•L-1，子叶为0.6 mg•L-1，真叶却未见到诱导出不定芽；MS + 0.03 mg•L-1 IAA + 1.2～1.5 mg•L-1 6-BA培养基可用于向日葵子叶、子叶节和下胚轴再生体系；不同基因型向日葵诱导不定芽的能力差别较大，其中，基因型PR29再生能力较强。【结论】本研究成功地建立了向日葵不同外植体离体培养再生途径，并获得了再生植株。     

罗汉果子叶高效再生体系的建立

以无菌萌发罗汉果子叶为外植体,进行罗汉果高效离体再生体系的研究。探讨了不同MS、琼脂含量、不同激素浓度配比、种子萌发时间和活性炭在罗汉果种子萌发、子叶诱导不定芽及试管苗生根方面的影响。结果表明：1／4 MS、0．5％-0．6％的琼脂含量比较适合罗汉果种子萌发,萌发率达89．2％;降低无机盐和蔗糖浓度有利于罗汉果试管苗的生根;最适生根培养基为1／2 MS＋IBA0．5mg／L＋1．5％蔗糖;罗汉果子叶直接诱导不定芽最适合培养基为1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．1mg／L,分化率达94．8％,平均每块子叶出芽10个;培养基中添加低浓度（0．2％）活性炭有利于生根,但不利于子叶不定芽的诱导;子叶不定芽的分化率还受种子萌发时间的影响,萌发时间以2—4d为宜;试管苗经过炼苗2～4d能极大提高移栽成活率,达91．7％。     

大白菜组织培养与植株再生研究

以大白菜3个结球类型的不同品种（自交系）为试材,研究了不同基因型、不同外植体及不同培养基附加成分对植株再生的影响。结果表明：大白菜不同基因型间不定芽分化率有明显差异,以叠抱类型的“秋白19号”和合抱类型的“福山包头”再生率较高,直筒类型大白菜不定芽分化率低;带柄子叶是离体培养较理想的外植体,分化培养的最佳培养基为Ms＋6-BA2mg／L＋NAA0．5mg／L＋AgNO3 4mg／L＋ABA0．3mg／L＋蔗糖3．0％＋琼脂1．0％。建立了大白菜带柄子叶的高频再生系统,从接种到获得再生植株只需55—60d。     

黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生

以黄灯笼辣椒无菌苗子叶为外植体,研究激素对不定芽分化及植株再生的影响。结果表明:6-BA对子叶不定芽的诱导效果最好;IAA与6-BA配合能明显提高子叶不定芽的分化率;在分化培养基中添加4mg/LGA3,有利于不定芽的伸长。不定芽分化的最适培养基为MS 6-BA5mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L,平均诱导率达75%;不定芽伸长的最适培养基为MS 6-BA3mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L GA34mg/L,平均伸长率可达90%;最佳生根培养基为MS IAA0.5mg/L,生根率达95%;建立了辣椒子叶植株再生体系。     

大白菜离体再生体系的建立及其不定芽对抗生素的敏感性

以大白菜纯合自交系92S105为试材,对激素、外植体类型、苗龄等再生因素进行优化,研究大白菜再生芽对抑菌抗生素及其筛选抗生素的敏感性。结果显示,在MS附加0.3 mg.L-1TDZ和0.5 mg.L-1NAA的再生培养基上,92S105再生率最高,可达到76.19%。生根培养基为1/2MS附加1.0 mg.L-1IBA或1.0 mg.L-1IAA,生根率都达到100%。在遗传转化中,以5 mg.L-1潮霉素作为筛选抗生素,来筛选抗性芽和抗性植株。用头孢噻肟钠和羧苄青霉素作为抑菌剂,均抑制不定芽的分化,但羧苄青霉素对不定芽分化影响较小,所以使用羧苄青霉素作为抑菌剂。     

接种方式对大白菜下胚轴离体不定芽再生及生理指标的影响

以大白菜品种‘贵龙5号’的下胚轴为材料,以3种不同方式接种,观察不定芽分化情况,并比较不同接种方式的下胚轴不定芽再生过程中可溶性蛋白质含量、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化。结果表明,以正插(形态学下端插入培养基)方式接种的下胚轴在接种8~10 d时不定芽开始产生,不定芽分化率达87.8%,平均每外植体再生的不定芽数为15.1个,其不定芽再生能力显著大于反插(形态学上端插入培养基)和平放的外植体;下胚轴在不定芽分化过程中各生理指标呈现规律性的变化,可溶性蛋白质含量、POD和SOD活性在芽原基形成以前表现出上升趋势而CAT活性下降,不定芽分化后呈相反变化趋势;不同接种方式的下胚轴在不定芽发生过程中各生理指标的变化有一定差异。以上结果表明大白菜下胚轴不定芽发生过程中形态学变化和生理变化紧密相关。     

小白菜再生培养基中适宜激素浓度的筛选

以子叶盘和下胚轴切段为外植体，研究了小白菜再生培养基中不同激素及其浓度水平对外植体产生愈伤、不定芽和根的影响。结果表明，小白菜子叶盘的再生频率较下胚轴的高。较适宜的愈伤组织诱导培养基为MSB 2，4-D0.1mg/L AgNO35.0mg/L，诱导频率为28.3％，较适宜的不定芽诱导培养基为NSB 6-BA4.0mg/L IAA0.1mg/L AgNO35.0mg/L，诱导频率为94.1％，较适宜的生根培养基为MSB IAA0.15mg/L，生根率为95.0％。     

磨盘柿无节茎段不定芽的再生研究

以磨盘柿组培苗的无节茎段为外植体,通过3因素3水平正交试验,研究了基础培养基、激素种类及浓度对磨盘柿无节茎段不定芽再生的影响。同时,首次就无节茎段在组培苗上的着生节位、切段大小及接种方式对不定芽再生的影响进行了研究。结果表明:ZT对分化率和平均不定芽数的作用最大,基础培养基次之,IAA的作用最小。IAA对愈伤组织形成的作用大于ZT和基础培养基;组培苗顶端前2节位伸长无节茎段,切成4 mm左右,平放于培养基中可以获得最高的再生效率。组培苗无节茎段在MS(1/2N)+ZT4.0 mg/L+IAA0.1 mg/L培养基中、直接光照培养条件下分化率可达到83.65%,平均不定芽数为2.25。     

欧李茎尖分生组织培养与快速繁殖技术研究

以欧李茎尖分生组织为外植体,研究了在培养基中添加不同的激素成分及不同浓度对不定芽诱导、继代增殖和生根培养的影响。结果表明:不定芽诱导的最佳培养基是MS 6-BA0.4mg/L IAA0.5mg/L;增殖培养的最适培养基为MS 6-BA0.3mg/L IAA0.4mg/L;最佳生根培养基是2/3MS IAA0.5mg/L。应用症状诊断和指示植物鉴定法进行病毒检测,平均脱毒率为73%。     

内源激素对同源四倍体黑皮冬瓜自交花粉萌发生长的影响

【目的】探讨同源四倍体黑皮冬瓜Benincasa hispida(Thunb.)Cogn.花粉萌发生长与内源激素的关系,为同源四倍体黑皮冬瓜自交低稔性机理研究开拓新思路。【方法】以同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜为试材,对自交花粉在雌蕊上的萌发与生长情况及花粉与雌蕊中内源激素含量进行比较研究。【结果】同源四倍体黑皮冬瓜自交花粉在柱头上的萌发率低,花粉管在花柱中生长缓慢,且花粉管在生长过程中易出现粗细不均匀、结节、先端膨大、双花粉管及扭曲、折叠等现象。同源四倍体黑皮冬瓜花粉和雌蕊中促进花粉萌发生长的内源激素玉米素核苷(ZR)和异戊烯基腺苷(IPA)含量极显著低于二倍体(P0.01),吲哚乙酸(IAA)含量略低于二倍体(P0.05),雌蕊中的赤霉素(GA_3)含量显著低于二倍体(P0.05),花粉中的GA3含量略低于二倍体(P0.05),而抑制生长类激素脱落酸(ABA)含量显著高于二倍体(P0.05),w(IAA+GA_3+ZR+IPA)∶w(ABA)极显著低于二倍体(P0.01)。【结论】同源四倍体黑皮冬瓜花粉和雌蕊中内源激素调控了花粉萌发生长,导致花粉管出现异常现象,是引起同源四倍体黑皮冬瓜自交低稔性的原因之一。     

空心莲子草不定根与贮藏根中六种内源激素含量比较

研究了入侵植物空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)未膨大的不定根和膨大的贮藏根之间6种内源激素含量的差异,以及从贮藏根顶端到末端内源激素含量的分布情况。结果表明,无论不定根还是贮藏根,ABA在6种内源激素中含量最高,其次为IAA,其余4种内源激素(BR,GA,JA,ZR)含量较低,ABA和IAA是空心莲子草根系中两种重要的内源激素;贮藏根中ABA和BR的含量极显著高于不定根(P≤0.01),ABA和BR可能在空心莲子草不定根膨大过程中具有重要作用;IAA、GA、JA、ZR 4种内源激素在不定根和贮藏根中的含量差异不显著(P≥0.05)。在空心莲子草贮藏根中,BR表现出明显的从顶端向末端递减规律,IAA在贮藏根中部的含量最高,ABA、GA、JA、ZR 4种内源激素在贮藏根顶部、中部、尾部的含量差异不显著(P≥0.05),分布比较均匀。     

辣椒胞质雄性不育与花蕾内源激素含量的关系

以辣椒Capsicum annuum细胞质雄性不育系‘北A’及其保持系‘北B’、恢复系‘B162’和杂种F1为材料,采用间接酶联免疫(ELISA)检测技术测定分析了各材料不同发育时期花蕾中内源IAA、ABA、ZRS和GA3的含量和比值变化.结果表明,不育系‘北A’花蕾中IAA和ABA的含量在各个时期均显著高于相应的保持系和恢复系,而ZRS的含量则显著低于可育材料;GA3的含量在造孢细胞期至四分小孢子期呈缓慢降低的趋势,并且在四分小孢子期显著低于可育材料.不育系花蕾中IAA/ZRS、ABA/ZRS以及IAA/GA3的比值均高于相应的保持系和恢复系.初步认为花蕾中较高的IAA和ABA含量及较低的ZRS和GA3含量可能与辣椒细胞质雄性不育有关.