鸡骨髓源树突状细胞体外诱导

为了探讨鸡骨髓源树突状细胞（bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs）的体外诱导培养方法,并分析鸡树突状细胞（DCs）的主要生物学特性,将用淋巴细胞分离液分离的鸡骨髓细胞经差速贴壁纯化后获得单个核细胞,然后经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素4（IL-4）体外诱导分化,细胞培养后第7天再加入脂多糖（LPS）继续培养48 h刺激成熟,分别于倒置显微镜和电子显微镜下进行形态变化观察,同时应用流式细胞仪对鸡骨髓源树突状细胞表面标志进行分析、鉴定。结果显示鸡骨髓细胞培养7 d后,细胞体积增大,细胞表面长出树突状小突起,细胞表面高表达MHCⅡ和CD11c分子,经LPS刺激后,突起伸长变粗,扫描电镜观察呈典型的树突状细胞形态,细胞表面MHCⅡ表达显著升高,依据上述方法成功获得大量而高纯度的鸡骨髓源树突状细胞,为进一步研究禽类DCs的生物学功能及其在某些疾病发生中的作用奠定了基础。     

鸡骨髓源树突状细胞体外转化培养

为深入探讨家鸡获得性免疫应答的分子机制,本研究探索了体外定向诱导和分化鸡骨源树突状细胞(Dendritic cell,DC)的方法。通过体外分离雏鸡骨髓源细胞,加入重组的鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)定向诱导培养获得大量未成熟DCs,经过接种新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)而激活,对其进行细胞形态学鉴定。结果表明:诱导4d后,部分细胞由单一的圆形球状逐渐生长呈短梭状;诱导6d后,细胞在40倍镜下可见基本呈短梭状且部分伸出触手;接种NDV后,细胞体积增大,触手伸长,形态趋于成熟,说明已成功建立体外利用细胞因子诱导分化鸡骨髓源DC的方法。     

奶牛外周血树突状细胞体外诱导培养与鉴定

通过粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)体外诱导外周血单核细胞为树突状细胞,为利用树突状细胞免疫疗法治疗奶牛乳房炎奠定基础和提供细胞模型。利用淋巴细胞分离液分离获得奶牛外周血单核细胞,在6孔板内培养2 h后,弃掉含有大量的T细胞和B细胞上清液,贴壁的基本上是单核细胞,磷酸盐缓冲液清洗5次,加入含有GM-CSF和IL-4的2 m L培养基进行3 d诱导。之后,从培养基顶部小心吸弃1.4 m L的培养基,然后再补加含有GM-CSF和IL-4的1.8 m L培养基继续诱导3 d。每天通过显微镜观察细胞形态。第7天经流式检测细胞表面抗原CD11c、CD14、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)、CD40、CD80、CD86的表达。结果表明:1)第2天,一些细胞表面可以生长出刺突并伴随着伪足的生长。第3天,细胞表面的刺突和伪足越来越多。第4、5天,一些带有刺突和伪足的细胞开始聚集和融合。第6天,单核细胞基本被诱导为树突状细胞,细胞表面含有大量清晰可见的刺突和伪足。2)经流式检测,CD14、CD11c、MHCⅡ阳性表达细胞分别占诱导细胞的6.8%、65.0%、75.9%,CD80和CD86阳性表达细胞分别占诱导细胞的2.0%和1.2%。综上所述,采用奶牛外周血单核细胞经体外诱导能够获得一定纯度的奶牛树突状细胞。     

小鼠髓源未成熟树突状细胞的分离与培养

本试验旨在建立一种体外诱导培养小鼠未成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法。应用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)在体外诱导小鼠骨髓前体细胞分化为未成熟树突状细胞,进行形态学观察、细胞表型分析、刺激T细胞增殖等方法,对小鼠髓源未成熟树突状细胞的体外诱导培养进行鉴定。试验结果显示,小鼠骨髓来源的DC在体外培养8 d后,特异性细胞表面标志CD11c的表达量达到81.09%,中度表达MHCⅡ,低表达CD40、CD80、CD86。本试验成功地建立了体外小鼠髓源DC扩增的方法。     

HD11来源NDV Ex对鸡骨髓源树突状细胞活化和细胞因子水平的影响

利用重组鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(chGM-CSF)和重组鸡白细胞介素4(chIL-4)体外诱导鸡骨髓细胞分化为鸡骨髓源树突状细胞(chicken bone marrow-derived dendritic cells,chBMDCs),对诱导条件进行优化,利用鸡巨噬细胞系HD11来源的NDV Ex刺激未成熟ch...     

猪树突状细胞的体外培养及其主要免疫生物学特性研究

为建立体外诱导、培养猪外周血单核细胞来源树突状细胞(DC)的方法,并对其进行免疫生物学特性鉴定,本实验从猪外周血无菌分离单核细胞—DC前体细胞,以猪源重组GM-CSF和IL-4联合诱导培养,从形态学、表型及功能方面对其进行检测。结果证实,经体外诱导培养的猪DC具有典型的树突状形态;培养6d的未成熟DC表面SLA-II-DR、CD1、CD172a表达的阳性率分别为61.50%、83.10%和24.90%;培养8d的成熟DC表面SLA-II-DR、CD1、CD172a表达的阳性率分别为71.70%、50.10%和19.30%;培养的DC具有吞噬异物的功能,以及刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力。本文首次在国内成功地建立了体外培养猪外周血单核细胞来源DC的方法,为进一步研究DC在猪传染性疾病致病机制中的作用奠定了基础。     

猪外周血树突状细胞的体外培养及鉴定

从猪外周血中分离获得单核细胞,分别加入150μg/L pGM-CSF和100U/mL pIL-4,体外培养6d后诱导出大量树突状细胞（Dendrictic cell,DC）,通过显微镜观察,可见其细胞表面具有典型的树突状突起,呈毛刺状。在培养末期加入TNF-α后可促进DC进一步成熟,其表面高水平表达MHCⅡ、CD80/86和CD16。猪DC的体外获得将为进一步研究许多病毒性疾病的致病机理奠定的基础。     

猪骨髓源树突状细胞体外诱导培养与鉴定

树突状细胞(DC)是机体主要的抗原递呈细胞,在固有免疫及适应性免疫中发挥重要作用。为进一步探究DC功能及诱导其分化的方法,本研究采用硬膜外腔麻醉法麻醉受试猪,以骨髓采集针从髋骨处抽取骨髓,裂解红细胞后,差速贴壁法获得前体细胞后,添加重组猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组猪白细胞介素4诱导其分化,以形态学方法和流式细胞术鉴定其特征。结果显示,骨髓前体细胞经诱导分化后具有典型的DC形态,其标记分子分化抗原簇1在第6 d和8 d阳性率分别达65.13%(p0.01)和56.5%(p0.01),标记分子二型猪白细胞抗原(SLA-IL-DR)在诱导后第6 d和8 d阳性率分别为86.87%(p0.01)和84.60%(p0.01)。本研究建立了活体猪骨髓源DC的体外分离培养和诱导分化方法,为基于DC的疾病防控研究提供依据。     

鸡骨髓源树突状细胞的诱导分化及鉴定

为建立鸡骨髓源树突状细胞(Dcs)的体外培养和鉴定方法,本研究无菌抽取10日龄健康SPF雏鸡的骨髓,体外分离纯化骨髓细胞,将其培养于含有重组的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4 (rhIL4)的RPMI 1640营养液中,诱导培养鸡骨髓源DCs.采用显微镜观察其体外培养过程中的形态特征及流...     

猪圆环病毒2型感染猪皮肤源树突状细胞炎性反应能力的变化

用PCV2 B1株经鼻腔接种40日龄SPF仔猪,于接种后3、7、14 d宰杀,收集皮肤源树突状细胞(DC).利用实时荧光定量PCR技术对感染仔猪皮肤源DC的IL-10、TNF-α、IFN-α、IL-8、趋化因子受体1(CCR1)、CCR5在mRNA转录水平的变化进行定量分析.结果表明,IFN-α在接种后3 d(3DPI)显著下调(P＜0.05),TNF-α、IL-10在7DPI时显著上调(P＜0.05);趋化因子IL-8在3、7、14 DPI时均下调,差异接近显著;MCP-1在感染后3、14DPI下调,7DPI均上调,但不显著;MIP-1β在3、7DPI明显上调,14DPI恢复正常;趋化因子受体CCR1、CCR5在3、7和14DPI均上调,且7DPI显著上调(P＜0.05).以上结果表明PCV2在感染早期可抑制DC炎性反应的能力,免疫应答失调,影响了动物机体的细胞和体液免疫功能的发挥.     

多糖对树突状细胞功能的影响

树突状细胞（dendritic cells,DC）是目前已知机体内功能最强的抗原递呈细胞,也是惟一能启动初始T细胞介导免疫反应的一类细胞。论文综述了多糖对DC功能的影响,多糖能够刺激DC分裂增殖,同时能够显著地诱导DC成熟,能够有效增强DC表面分子表达与增强细胞因子分泌的能力,从而促进DC的抗原递呈能力。     

硒对树突状细胞和巨噬细胞功能的调控作用

旨在探讨硒对树突状细胞（dendritic cells,DCs）和巨噬细胞功能的影响,试验将硒分别与髓源性树突状细胞（bone marrow derived dendritic cells,BMDCs）和腹腔巨噬细胞共同培养后,用流式细胞术检测未成熟BMDCs和巨噬细胞的吞噬活性以及BMDCs上的MHCⅡ、CD86、CD80和CD40的表达量,测定经硒处理后的成熟BMDCs对刺激同种异体淋巴细胞增殖和抗原递呈能力,并用ELISA检测BMDCs和巨噬细胞上清液中细胞因子（IL-12、IL-1β、IFN-γ、IL-6、IL-10、TNF-α、NO）水平的变化。结果显示,当硒的质量浓度在0.18~0.09 mg·L^-1时,BMDCs和巨噬细胞的吞噬活性显著增强（P<0.05）,并且BMDCs上的MHCⅡ、CD86和CD80的表达量显著升高（P<0.05）,对刺激同种异体淋巴细胞的增殖和抗原递呈能力也显著增强（P<0.05）。此外,在BMDCs的上清中,IFN-γ、IL-12和IL-10的含量显著升高（P<0.05）;在巨噬细胞的上清中,IFN-γ、TNF-α和NO的含量显著升高（P<0.05）。结果表明,一定质量浓度的硒可以增强树突状细胞和腹腔巨噬细胞的功能,值得进一步探究硒对免疫功能的影响。     

黄芪多糖对树突状细胞形态和功能影响研究进展

树突状细胞(DC)是目前发现功能最强的一类抗原递呈细胞(APC),因其在机体免疫应答及免疫功能发挥中担当重要角色,成为免疫学研究热点。多糖是中药黄芪的重要有效成分,由己糖醛酸、果糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸等组成,具有免疫调节、抗肿瘤、抗应激和抗氧化等作用。黄芪多糖的免疫调节一直是人们研究的重点,研究发现其可通过促进DC成熟而发挥免疫调节作用。论文从DC的形态和功能变化、DC的成熟和DC表面标志CD80、CD86、CD83和相关细胞因子表达等方面,综合分析了黄芪多糖对DC抗原递呈能力的影响。     

旋毛虫重组蛋白谷胱甘肽S-转移酶对小鼠骨髓源树突状细胞成熟和活化的影响

通过原核表达和镍柱亲和层析获得纯度达95%以上的重组旋毛虫蛋白谷胱甘肽S-转移酶(rTs-GST),相对分子质量26 000。分离小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC),体外培养至第7天,加入rTs-GST和rTs-GST+LPS刺激48h后,收集细胞进行流式细胞术和ELISA分析。流式结果显示:rTs-GST可抑制由LPS诱导的树突状细胞(DC)表面MHC-II和CD 86表达率的升高。ELISA结果显示:rTs-GST可促进DC分泌抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β;抑制由LPS诱导的促炎性因子TNF-α和IL-1β的分泌。因此,旋毛虫可能通过蛋白谷胱甘肽S-转移酶改变DC活化和成熟,诱导T细胞向Th 2方向发展,从而调节宿主免疫反应达到长期寄生。     

树突状细胞免疫功能的研究进展

树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是因其成熟的细胞具有许多树突样或伪足样突起,被命名为树突状细胞[J].目前,DC是所知体内抗原提呈功能最强的专职抗原提呈细胞(Antigen-presenting cell,APC)[2].近些年,随着对DC分布、发育和功能等方面研究的不断深入,人们发现DCs在免疫系统中具有独特的地位,与其他APC相比,其主要特点是能够刺激初始T细胞活化和增殖,而其他的APC仅能刺激以活化的或记忆性T细胞,因此DC能够促进固有免疫发生和启动获得性免疫.此外,DC还广泛参与肿瘤、感染、自身免疫性疾病的发生和发展,近年来已受到广泛的关注和重视.     

绿色荧光蛋白标记的树突状细胞对体外培养的自然杀伤细胞的影响

绿色荧光蛋白(EGFP)标记树突状细胞(DC),示踪树突状细胞的生长,并研究其对自然杀伤细胞(NKC)的活化及分泌的相关细胞因子的影响。采用连续贴壁法分离培养人外周血树突状细胞,采用Percoll不连续密度梯度离心法纯化人外周血自然杀伤细胞,将质粒EGFP-N1转染入DC,示踪转染前后DC表面分子表达的变化;转染后的DC和NKC共培养,ELISA法检测培养上清液中细胞因子IL-12、IL-15及IFN-γ的浓度。转染后树突状细胞表面分子CD80及HLA-DR的表达增高;转染后DC与NKC共同培养后,培养上清液中细胞因子IL-12、IL-15及IFN-γ的浓度均增加。本试验方法能成功诱导出具有典型特征的成熟树突状细胞,其与自然杀伤细胞共同培养后,可以促进NKC的活化。     

典型猪瘟病毒通过调节单核细胞衍生的树突状细胞抑制细胞的成熟未激活NF-κB

典型猪瘟病毒（CSFV）损害宿主的免疫系统,导致猪只发病。树突状细胞（DCs）是最强的免疫反应的发起者。此试验研究了典型猪瘟病毒对猪单核细胞衍生的树突状细胞（Mo-DCs）的影响。结果显示DCs表面标志的表达没有被削弱,例如MHC—II、CDSO、CD83和CD86,但是在感染典型猪瘟病毒后的48小时DCs表达CD172a明显增加。培养的Mo—DCs在不同处理后48小时,通过Q—RT—PCR检测细胞因子表达．细胞因子表达的剖面图被描绘出来。     

猪集落刺激因子和白细胞介素-4的真核表达及其体外诱导猪树突状细胞的研究

试验旨在建立猪集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）和白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）的真核表达体系,应用表达的2种细胞因子体外诱导猪树突状细胞并检测其细胞功能。首先构建GM-CSF和IL-4真核表达载体,并在HEK293细胞上进行表达验证;其次应用表达的2种细胞因子诱导猪骨髓源和血液源单核细胞;最后分别采用荧光显微镜、流式细胞术检测猪树突状细胞的表面标志CD1a、SLA-Ⅱ和SWC3a,并进行树突状细胞形态学和免疫学功能鉴定。结果显示,本研究构建的2种真核表达载体在HEK293细胞中成功表达GM-CSF和IL-4。形态学观察发现,细胞因子诱导的单核细胞培养3 d后有聚集现象,6 d时可观察到典型的树突状突起。流式细胞术检测发现,表达的细胞因子可成功诱导猪骨髓源和血液源单核细胞转化为树突状细胞,其SWC3a⁺/SLA-Ⅱ⁺和CD1a⁺/SLA-Ⅱ⁺双阳性比例显著提高,与商品化细胞因子处理组没有区别。细胞吞噬试验发现,表达的细胞因子诱导的树突状细胞为未成熟树突状细胞,具有很强的细胞吞噬能力。本试验成功建立了在真核细胞中表达猪重组蛋白GM-CSF和IL-4的方法,并联合应用2种重组细胞因子体外诱导获得猪骨髓源和血液源单核树突状细胞,为进一步研究猪树突状细胞与各种病原微生物作用奠定基础。