柑桔衰退病毒强弱株系诱导甜橙差异表达蛋白研究

据中国农业科学院柑桔研究所的研究人员杨方云等的研究报道,采用比较蛋白质组学方法对柑桔衰退病毒强弱株系侵染甜橙后诱导寄主蛋白质表达变化进行了研究。利用双向荧光差异电泳     

猪瘟病毒（HCV）石门株部分p23和p14基因的克隆,序列测定及与其…

应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株部分ｐ２３和ｐ１４基因，然后采用平端克隆法将扩增的ｃＤ－ＮＡ克隆到ｐＵＣ１９和ＳａｍⅠ位点，用双脱氧终止法牟重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他１０株ＨＣＶ相同基因区域用ＤＮＡＳＩＳ计算机软件进行同源性比较和系统树分析。结果表明，大部分毒株为同一个型，该型共包括９个ＨＣＶ株，以Ｂｒｅｓｃｉａ株为代表，石门（Ｓｈｉｍｅｎ）株也属该型；而Ａ     

沼肥对土壤培肥和柑桔产量的影响（综述）

阐述了沼肥,即沼液和沼渣的主要成分及其特性,并就其对改善土壤理化性状、提高土壤肥力、改善土壤酶活力和土壤微生物数量的作用,以及对柑桔增产、提高果品质量、抗病、防虫和抗逆性等的影响作了综述。     

乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序和SA14、SA14-14-2的序列比较

该研究通过RT-PCR扩增乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序后,将测序结果与GenBanK发表的JEV SA14基因序列和SA14-14-2进行比较分析,结果发现分离株与JEV SA14强毒株的同源性为98.1%,与SA1-14-2株的同源性为97.1%;在477-2477长为2 000 nt决定JEV抗源性的PrM/E区中.分离株与SA14株仅有40个碱基不同,其中12个碱基为错义突变,导致E基因2个氨基酸序列(E135和E232)与SA14的E区两个氨基酸的不同;而分离株与SA14-14-2株有48个碱基不同,导致E基因12个氨基酸序列与SA14-14-2不同.由于确定JEV毒性的10个关键性基酸的位置均在E蛋白上,分离株与SA14强毒株这10个氨基酸的位置完全一致,因此序列的比较结果表明;乙脑病毒分离株为强毒株.由此可以看出基因分析对于病毒毒力的判断具有重要参考意义.     

乙型脑炎病毒分离株PrM／E基因澳序和SA14、SA14—14—2的序列比较

该研究通过RT—PCR扩增乙型脑炎病毒分离株PrM／E基因测序后,将测序结果与GenBanK发表的JEVSA14基因序列和SA14—14—2进行比较分析,结果发现分离株与JEVSA14强毒株的同源性为98．1％,与SA1-14-2株的同源性为97．1％;在477-2477长为2000nt决定JEV抗源性的PrM／E区中,分离株与SA14株仅有40个碱基不同,其中12个碱基为错义突变,导致E基因2个氨基酸序列（E135和E232）与SA14的E区两个氨基酸的不同;而分离株与SA14—14-2株有48个碱基不同,导致E基因12个氨基酸序列与SA14—14—2不同。由于确定JEV毒性的10个关键性基酸的位置均在E蛋白上,分离株与SA14强毒株这10个氨基酸的位置完全一致,因此序列的比较结果表明;乙脑病毒分离株为强毒株。由此可以看出基因分析对于病毒毒力的判断具有重要参考意义。     

猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因的克隆、序列测定及与其他HCV株的比较

应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株部分ｐ２３和ｐ１４基因，然后采用平端克隆法将扩增的ｃＤ－ＮＡ克隆到ｐＵＣ１９的ＳｍａⅠ位点，用双脱氧终止法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他１０株ＨＣＶ相同基因区域用ＤＮＡＳＩＳ计算机软件进行同源性比较和系统树分析，结果表明，大部分毒株为同一个型，该型共包括９个ＨＣＶ株，以Ｂｒｅｓｃｉａ株为代表，石门（Ｓｈｉｍｅｎ）株也属该型；而Ａｌｆｏｒｔ株和Ｐ９７株与上述９个毒株差异较大，不属同一型。     

鹅细小病毒国内分离株主要结构蛋白（VP2-VP3）基因的克隆和序列分析

根据国外已发表的鹅细小病毒（GPV）A株基因组核苷酸序列设计了一对引物,对国内两株鹅细小病毒毒株(GPV　CC株)和(GPV　FS株)主要结构蛋白（VP2-VP3）基因进行PCR扩增，并克隆到pCR3.1T载体，分别获得正向、反向连接重组质粒pVPC1、pVPC2和pVPF1、pVPF2，经酶切鉴定筛选出阳性克隆质粒并进行核苷酸序列分析比较，序列分析结果表明：GPV　CC株和GPV　FS株VP2-VP3的核苷酸大小分别为1　764　bp和1　763　bp,其中GPV　CC株与A株同源性达到98.9%；GPV　FS株缺失一个碱基,与A株同源性为93.5%,与GPV　CC株同源性为93%。     

鹅细小病毒国内分离株主要结构蛋白（VP2—VP3）基因的克隆和序列分析

根据国外已发表的鹅细小病毒（GPV）A株基因组核苷酸序列设计了一对引物，对国内两株鹅细小病毒毒株（GPV CC株）和（GPV FS株）主要结构蛋白（VP2－VP3）基因进行PCR扩增，并克隆到pCR3.1T载体,分别获得正向，反向连接重组持粒PVPC1，PVPC2和PVPF1，PVPF2，经酶切鉴定选出阳性克隆质粒并进行核苷酸序列分析比较，序列分析结果表明：GPV CC株和GPV FS株VP2－VP3的核苷酸大小分别为1764bp和1763bp，其中GPV CC株与A株同源性达到98．9％，GPV FS株缺失一个碱基，与A株同源性为93．5％，与GPV CC株同源性为93％。     

禽流感病毒分离株A／Chicken／Wangcheng／4／2001（H9N2）核蛋白基因（NP）的克隆和序列分析

用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感鸡体分离株A／Chicken／Wangcheng／4／2001(H9N2)(WC2001)，提取病毒总RNA。根据已发表的A型流感病毒株NP基因序列，设计—对引物，运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增该病毒分离株的NP基因，克隆后进行序列测定。序列分析表明，扩增的NP基因为相应的开放阅读框架。WC2001株NP基因序列与数株A型流感病毒NP序列进行比较，相互间同源性在80％左右，其中与A／Duck／Hong Kong／Y280／97(H9N2)有很高的同源性，而与人流感病毒株和猪流感病毒株差异较大，显示禽流感病毒特征。     

转铁蛋白受体上的犬细小病毒壳体结合位点及其亲和力改变对细胞吸收和感染的影响（摘要）

犬细小病毒及其相近的猫泛白细胞减少征病毒与转铁蛋白受体（TfR）1型结合后而感染宿主细胞,但研究显示犬猫TfRs的不同使病毒的宿主范围和组织嗜性也有所不同。通过点突变及增加或减少糖基化信号改变顶端及类蛋白酶区域残基,然后检测这些突变的TfR与壳体的相互作用,发现大多数的置换体对病毒的结合和摄取几乎没有影响,但在受体顶端区域的一些位点突变可以阻止壳体的结合或在不同程度上降低受体的亲和力。     

蚜虫体内柑橘衰退病毒分子生物学检测研究进展

由柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus, CTV）引起的柑橘衰退病是具有经济重要性的病害,褐色橘蚜是CTV的最有效传播介体。应用分子生物学方法检测蚜虫体内CTV已被研究多年,本文重点阐述了定性检测和定量检测,介绍了反转录PCR(RT-PCR)、反转录巢式PCR (RT-nested-PCR)、以及实时RT-PCR (Real-time RT-PCR)的应用。同时,对这些技术应用于研究CTV蚜传机理和CTV-介体-寄主三者的互作关系方面做了简要展望。     

柑橘黄龙病对纽荷尔脐橙叶片营养元素及土壤微生物群落的影响

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing, HLB)堪称柑橘的癌症,严重为害产业健康发展。本研究采用盆栽试验,通过ICP-MS、平板计数法及微平板法测定了不同染病时间的纽荷尔脐橙叶片的矿质营养元素含量、土壤微生物种群数量及微生物功能多样性。研究结果表明,在黄龙病侵染的纽荷尔脐橙病株中,叶片中显著性减少的矿质营养元素多与叶绿素合成及光合系统相关。而土壤微生物群落功能多样性的下降时间段与土壤纤维素分解菌的增加时间段相吻合,表明根系生态系统的破坏多发生于黄龙病侵染后的6-8个月。     

基于文献计量的甜高粱研究态势分析

甜高粱(Sorghum bicolor)是一种重要的饲用和能源作物。近年来,国内外对其的相关研究越来越多。为了解该领域的研究现状,挖掘重点研究主题和热点,本研究基于Scopus和CNKI数据库,利用文献计量学方法,从发文量、发文国家和机构、高被引论文、核心作者、载文期刊、关键词等方面,对国内外发表于1985-2015年的有关甜高粱的论文进行了分析。结果表明,近十年来,甜高粱方面的相关研究处于非常活跃的态势,论文发表量增长迅猛,利用甜高粱生产乙醇的技术是目前国内外的研究热点。中国甜高粱的研究总体居世界先进水平,发文量、研究机构和核心作者数量等指标均为全球第一;中国科学院,上海交通大学以及辽宁、黑龙江、新疆等省级农科院作为国内主要研究机构,以品种选育、乙醇制取技术、抗逆性、种质资源引进和鉴定及评价等为重点研究方向,开展了大量卓有成效的工作,有力地促进了甜高粱产业的发展。本研究可为相关研究者和决策者提供参考。     

盐胁迫下AMF对枳实生苗生长及生理代谢的影响

为揭示丛枝菌根真菌（AMF）对增强枳实生苗耐盐性的作用,以期为盐渍土条件下提高柑橘生长提供依据。在正常水分和盐胁迫（100 mmol /L NaCl）下,研究接种Funneliformis mosseae对盆栽枳实生苗生长和生理代谢的影响。结果显示：接种AMF显著提高了盐胁迫下枳的株高、叶片数、总鲜重、二级和三级侧根数、根系总长、投影面积、表面积和体积;接种AMF还显著提高了盐胁迫下枳叶片中叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量,以及枳根系和叶片的蔗糖含量。此外,盐胁迫下接种AMF显著抑制了叶片MDA和H2O2以及根系H2O2和O2?－的积累,显著提高了盐胁迫下根系和叶片Cu/Zn-SOD、Mn-SOD、POD和CAT的活性以及根系Fe-SOD活性。本研究表明盐胁迫下接种AMF的植株维持了更高的植物生长、根系发育、光合色素、蔗糖含量和抗氧化酶活性,因而具有高的耐盐性。     

我国新城疫病毒分离株分子生物学特性和基因型的研究

利用一步法RT-PCR技术成功扩增了37个新城疫病毒分离株的(其中2株属于鸽源病毒)F基因片段(约500bp)，通过对分离株的测序和基因分型表明，24株属于基因Ⅶ型，1株属于基因Ⅵ型，2株属于基因Ⅲ型，1株属于基因Ⅰ型，6株属于基因Ⅱ型，另外有3株从氨基酸方面分析是基因Ⅶ和Ⅵ型的杂交体，但从进化树方面，分离毒SD054和SD069属于基因Ⅵ型，SD052属于基因Ⅶ型。可以看出，我国新城疫的流行是极其复杂的，既有老基因型的威胁，又有新基因型的不断流行，同时发现有3株病毒发生了两基因型间的杂交现象。     

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。     

吖啶橙和二甲基亚枫对蚕胚胎发育影响的分析

蚕种解除滞育后,对不同发育阶段的蚕卵涂抹吖啶橙或二甲基亚枫溶液后保护至孵化,调查对蚕胚胎发育的影响,结果蚕胚胎在其发育进程中对吖啶橙涂抹卵表面有2个特别敏感的时期,一是在转青期(催青经过第8天)最敏感,处理区的孵化率只有51.22%,二是在催青的第3天,孵化率为56.40%。提取药物处理过的蚕卵蛋白,经SDS-PAGE电泳,转青期的蚕卵蛋白出现某些蛋白泳带的减少或条带染色有颜色深浅的差异。经双向电泳分析,处理区与对照区有4个蛋白质点的差异。     

重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展

重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒(Herpesvirus of turkey, HVT)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)、鸭瘟病毒(Duck enteritis virus, DEV)、鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus, ILTV)等。对疱疹病毒基因组序列进行分析显示,其基因组大,复制非必需区域多,容纳外源基因的能力强。同时疱疹病毒具有宿主范围广泛、免疫持续期长、安全性较好及相关基因操作技术成熟等优点。笔者总结了当前构建重组动物疱疹病毒的主要方法,包括传统同源重组技术、细菌人工染色体(BAC)技术、Fosmid文库及CRISPR/Cas9基因编辑技术,简述了各个方法的基本原理及技术特点,比较了各个方法的优缺点,并分析了各个方法的最适运用条件,从而更准确地为研究工作提供理论及技术参考;对外源基因的表达方式进行分析,论证了不同启动子对外源基因表达的调控作用不同,同时对不同疱疹...     

Influence of time on the genetic heterogeneity of Spanish porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates

The aim of the present study was to establish the degree of diversity of porcine reproductive and respiratory virus (PRRSV) isolates that circulate in the same geographical area in different years. Nucleotide sequences of open reading frame (ORF) 5 were determined for 28 Spanish field PRRSV isolates from different years and three European-type modified live virus vaccines. Sequences were aligned using Clustal W software and a phylogenetic tree constructed using the neighbour joining method. The results of pairwise homology comparisons of nucleotide and deduced amino acid sequences of these PRRSV isolates indicate a tendency for heterogeneity to increase with time. The study of the phylogenetic tree revealed that Spanish PRRSV isolates constitute two well-defined clades and a group of unrelated sequences. The observed heterogeneity does not appear to be due to temporal evolution exclusively. Early and recent isolates group themselves into different clusters independently of the time of isolation, indicating the co-circulation of different variants and the maintenance of variants of the original isolates in the field.     

狂犬病病毒ERA株在犊牛睾丸细胞(BTC)上连续传代的稳定性及毒种批的制备与检验

将狂犬病病毒ERA株接种犊牛睾丸细胞进行了 2轮传代 ,并逐代测定毒价 (LD50 )。结果 :第一轮从 1 5代传至 2 6代 ,其毒价均 >1 0 4 .0 LD50 /0 .0 3mL ,但 2 0代以后似有下降趋势 ;第二轮从 1代传至 2 8代 ,9～ 2 2代毒价为 1 0 4 .5～ 1 0 5 .33LD50 /0 .0 3mL ,2 3代为 1 0 4 .0 LD50 /0 .0 3mL ,2 7、2 8代均 <1 0 4 .0 LD50 /0 .0 3mL。将第 6、1 6、2 8、2 9代ERA/BTC培养物和第 3代ERA/BHK 2 1细胞培养物分别作电镜负染观察 ,比较病毒颗粒形态 ,未见明显差异。将第 1 1代ERA/BTC培养物经冷冻真空干燥制成毒种批 ,其病毒含量为 1 0 5 .2 2 LD50 /0 .0 3mL ,水分≤ 2 .38% ,安全性、免疫原性、特异性和纯净检验均符合规定