孔雀石绿,拉响食鱼安全警报

孔雀石绿是一种合成的三芳基甲烷化学物质,长期以来许多国家曾将其作为水产养殖业的杀菌剂, 用于对鱼类高发的水霉病、原虫病的控制,获得了极佳的效果。但随着研究的不断深入,新的研究证实,孔雀石绿进入人类或动物机体后,通过生物转化可产生致癌、致畸、致突变等副作用。鉴于孔雀石绿的危害性,上世纪90年代以来,许多国家都将孔雀石绿列为水产养殖的禁用药物,但实际上目前孔雀石绿在一些地方的使用仍很普遍。因此,为保证食鱼安全和人类健康,严格控制孔雀石绿的非法使用,推行无公害水产养殖已是刻不容缓。     

HPLC荧光检测鱼肉中孔雀石绿残留量的不确定度

通过数学建模,对GB/T20361-2006 HPLC法荧光检测鱼肉中孔雀石绿残留量的不确定度进行分析。结果表明,合成标准不确定度U(X)=0.048,测量鱼肉中孔雀石绿残留量的不确定度为(2.00±0.19)μg/kg。     

用于检测孔雀石绿的全抗原的合成与鉴定

采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。     

孔雀石绿污染甲鱼事件的调查

1事件的经过 2005年3月4日．我站执法队接到消费者投诉：投诉当日上午在某连锁店购买甲鱼一只．烹饪过程中出现甲鱼体表和所煮的汤呈绿色．该消费者立即向某连锁店反映了这个问题．双方未达成一致赔偿意见．遂向我站执法队投诉。执法队接到投诉后立即派三名队员前往调查。据消费者讲：他是先将甲鱼洗净后冷水下锅然后慢慢加热致死．再将其剖开。由于甲鱼较大跳得厉害致使第一锅汤打翻在地．再重新加水煮．第一锅汤呈浅绿色．第二锅汤比第一锅汤绿色更浓。     

无色孔雀石绿单克隆抗体的制备与鉴定

用人工合成的无色孔雀石绿-牛血清白蛋白(LMG-BSA)作为抗原免疫BALB/c小鼠,并利用杂交瘤技术建立了1株稳定分泌无色孔雀石绿(LMG)单克隆抗体的杂交瘤细胞2E6.经鉴定表明,杂交瘤细胞染色体数为(99.12±3.60),间接竞争ELISA(ciELISA)显示LMG 50%抑制质量浓度为20.39μg/L,诱生小鼠腹水的抗体效价达2.3×105.与水产养殖中常见的禁用激素和抗菌药物的交叉反应小,表明该单抗具有较好的敏感性和特异性.     

羊驼免疫库的制备及抗孔雀石绿纳米抗体的筛选

孔雀石绿（malachite green,MG）是一种易溶于水和乙醇等的基础染料,可在多种行业应用,并曾用于水生动物多种疾病如真菌病、寄生虫病、细菌性疾病等的治疗。但因其具有致癌等毒副作用,目前已被禁用。然而市场上仍有在水产品违法使用MG的现象,因此需要加强对该药品残留的检测。本研究选择羊驼免疫库筛选抗MG纳米抗体,通过噬菌体ELISA筛选高亲和力和特异性的纳米抗体。通过辅助噬菌体M13的救援,使得纳米抗体基因（VHH）与噬菌体外壳蛋白基因融合表达,从而使得VHH蛋白展示在噬菌体表面,通过有限稀释筛选和多次洗脱的办法,获得含有目的基因的单个噬菌克隆;将重组质粒PMES4-VHH转化到表达细胞中,进行体外表达。最后采用NI-NTA柱进行His标签纯化,得到抗MG纳米抗体,并进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果显示：噬菌体文库成功构建,库容为3.2×108 cfu/mL;通过ELISA筛选,得到16个具有抑制效果的噬菌体克隆,经对噬菌体基因测序并翻译,得到2种氨基酸序列;将重组质粒转化至表达菌株表达、纯化,最后得到大小约为15 kDa的抗MG纳米抗体,从而为MG的下一步检测奠定了基础。     

孔雀石绿及其代谢物在鲫亲子代间传递的研究

为研究孔雀石绿(MG)残留在亲鱼及其子代之间的传递作用以及鱼卵阶段违禁使用孔雀石绿的溯源分析,通过硼氢化钾将孔雀石绿还原成无色孔雀石绿,采用高效液相色谱-荧光检测法检测孔雀石绿及其代谢产物的总量。以浓度为0.5mg/L的孔雀石绿浸泡鲫亲鱼4h,分别跟踪检测雌雄亲鱼肌肉、内脏团以及生殖组织中药物残留变化。取第30天带有MG残留的雌雄亲鱼与空白亲鱼交叉繁殖,检测子代受精卵与鱼苗中药物残留情况,并与空白鱼卵浸泡0.15mg/L孔雀石绿溶液1h后的残留情况作比较。结果显示,各组织中孔雀石绿的残留分布情况在雌雄亲鱼之间无显著性差异;不同组织中残留浓度大小:内脏团肌肉精巢/卵巢,内脏团和肌肉中孔雀石绿残留浓度逐渐下降,精巢/卵巢从0.25h检测到药物残留,之后呈先增加后缓慢下降的趋势。污染孔雀石绿的亲鱼所产的受精卵中,药物残留初始浓度较低,分别为5.1μg/kg±0.8μg/kg、23.8μg/kg±1.3μg/kg、29.5μg/kg±1.1μg/kg,均缓慢下降。而空白受精卵浸泡孔雀石绿溶液后的初始浓度为1 265.8μg/kg±21.1μg/kg,在出苗前保持在较高的浓度,在鱼苗完全孵出后(第5天)残留浓度大幅度下降为163.4μg/kg±7.9μg/kg。因此,亲鱼体内残留的孔雀石绿及其代谢产物残留能够传递到子代,并可根据鱼卵中药物残留浓度变化的差异,区别判断受精卵污染孔雀石绿的来源途径,为养殖环节的孔雀石绿残留溯源分析提供参考。     

绿色贸易壁垒与饲料安全

种种迹象表明,"绿色贸易壁垒"将成为今后国际贸易中新的游戏规则. "绿色贸易壁垒"就是进口国以环保或者安全为理由,对进口产品除征收一般关税外,再征收额外的关税或者拒绝进入.目前的形式主要有"绿色标准"、"绿色检疫"、"绿色关税(绿色进口附加税)"等等.     

孔雀石绿等染料物质残留检测过程中实验室污染的来源分析

为了分析孔雀石绿等残留检测过程中实验室污染的来源,本研究应用超高效液相-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定了常用实验室用品中孔雀石绿、无色孔雀石绿、结晶紫、无色结晶紫、亚甲基蓝的含量.纸样品用乙腈直接提取;笔样品采用书写痕迹后再用乙腈提取,UPLC-MS/MS定量测定.结果表明:在纸样品中,除了实验滤纸外,其它纸样品(如A4打印纸、报纸、标签纸等)均含有一定水平的目标物;笔样品中,除了铅笔2H、中性笔135012蓝、中性笔2180蓝色外,其它笔样品(如圆珠笔、记号笔、签字笔、水笔等)含有一定水平的目标物.为了降低实验室目标物污染风险,本文还对样品处理前和处理中的各个环节需要注意的问题做了较为详细的分析.本研究结果将有利于建立有效预防体系从而尽量避免样品在该类物质残留检测中的实验室本底污染和假阳性结果.     

高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿残留量方法的改进

水产品中残留的隐色孔雀石绿经后氧化铅柱氧化为显色孔雀石绿,采用高效液相色谱-紫外检测器对显色孔雀石绿进行了检测.样品提取净化采用乙腈在乙酸铵缓冲溶液条件下提取,10 000 r/min离心,上清液转入50 mL离心管,再加入15 mL蒸馏水,10 000 r/min离心,取上清液过固相萃取柱,再用3mL蒸馏水洗柱,1 ...