禽流感病毒抗原快速检测试验报告

禽流感是正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的一种急性高度致死性禽类传染病.世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类动物疫病,我国将其列为一类动物疫病.2005年高致病性禽流感疫情呈现全球性爆发,令世人震惊.     

从快速检测禽流感病毒抗原的试纸条看禽流感防控工作

<正>禽流感是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类的一种烈性传染病,被世界动物卫生组织规定为A疫病,并被我国列为1类传染病。该病由于呈爆发性和以突然死亡及高死亡率为特征,因     

运输环节中对进入青海省猪鸡疫病的抗体抗原检测

青海省海拔高，气候寒冷，消费的猪、鸡主要依靠省外供给，猪、鸡90％来自临近的甘肃、四川、陕西、宁夏等省地。民和县位于青海省东大门，进青运输动物大部分从本县经过，为了加强动物防疫管理，及时了解输入地的动物疫情状况，青海省民和公路动物防疫监督检查站于2009年1～10月份对来自甘肃、四川等省地部分地区运入本省的生猪进行了猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征（猪蓝耳病）、猪伪狂犬病的抗体金标试纸条快速测定，鸡进行了禽流感病毒抗原快速检测试纸条的测定。现将检测调查结果报告如下。     

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原，制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体，经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体，兔抗AIVIgG为第二抗体，建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL，兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL；对已知的阳性样品，用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上，且能检出其它亚型的禽流感病毒；与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应，说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测，结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。     

禽流感病毒抗原H5快速检测卡比对试验报告

对禽流感疫苗第2次免疫后21d的30只健康鸡进行抗体检测,同时对此30只试验鸡采用进口的禽流感病毒抗原H5快速检测卡和国产禽流感病毒抗原H5快速检测卡进行禽流感病毒检测效果对比。结果表明,两个厂家生产的试剂检测结果均为阴性,符合率为100%,均未出现禽流感病毒假阳性。     

一次性电流型酶免疫传感技术快速检测禽流感病毒抗原

为研究快速检测禽流感病毒（AIV）抗原的电化学免疫传感新技术,将HRP标记AIV抗体（HRP-anti-AIV）掺于壳聚糖中,并修饰于丝网印刷碳电极表面,制备一次性快速检测禽流感病毒抗原（AIV-Ag）电化学免疫传感器。采用一步法检测AIV-Ag和循环伏安法监测酶促反应,利用还原电流的降低率来测定样品中的AIV-Ag。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下,免疫电极线性检测范围为3．75～125ng／mL,检出限为0．56ng／mL（S／N=3）。该免疫传感技术具有较好的特异性、重现性（RSD〈7．10％）、稳定性（2周后电流响应为初始值的91．46％）和准确性（与ELISA符合率为91．18％）。另外,将四通道丝网印刷碳电极用于禽流感免疫传感器的制备,结果表明免疫电极的一致性有较好的改进。因此,该免疫传感技术有望用于AIV—Ag的快速检测。     

快速检测禽流感方法问世

新华社：6月13日，澳大利亚维多利亚州的科学家在快速检测禽流感研究领域取得突破，把检测禽流感病毒所需的时间由原来的3个星期缩减到现在的24小时。     

四种检测番鸭细小病毒抗原方法的比较

用ＬＰＡ、Ｖ少ＥＬＩＳＡ四种方法平行检测了９羽人工感染鸭和用ＬＰＡ、ＶＩ及ＦＡ三种方法平行检测了２８羽野外送检鸭肝、脾及肝和脾混合组织中ＭＰＶ抗原,结果显示：ＬＰＡ、ＦＡ和ＥＬＩＳＡ均有很强的特异性;四种方法对人工感染鸭ＭＰＶ抗原的检出率均在８８．９％以上,任何两种方法之间检测结果的条例率均在８８．９％以上,无显著性差异（Ｘ＾２检验,Ｐ〉０．０５）;三种方法中两两之间检测野外送检鸭ＭＰＶ抗原结果的     

日研出快速测试禽流感病毒新技术

据《日经产业新闻》3月26日报道,日本国立传染病研究所和荣研化学公司近日开发出快速测试禽流感病毒新技术。这一技术有助于人们及早采取措施防止禽流感扩散。新技术可以在30分钟内确认H5N1等带有H5型血凝素基因的禽流感病毒,它利用基因增殖技术,让试剂与被检测的人或家禽咽喉部黏液样本发生反应,如黏液样本中含有上述禽流感病毒,试剂就会变混浊,即便用肉眼也可以判断。目前确认是否感染禽流感病毒需要3小时左右,加上检测前的各种准备共需4至5小时。新技术大大缩短了检测时间,准确度也提高50～500倍。日本研究机构计划把这一技术转化 为产…     

应用多重引物RT-PCR快速诊断禽流感亚型

将本实验室分离保存、已经过PCR扩增、核酸测序鉴定的三种不同亚型禽流感病毒(AIVH5N1、H6N2、H9N2)分别接种鸡胚,收集尿囊液,分离提取AIV总RNA。参考H1￣H15亚型禽流感病毒的核蛋白(NP)基因序列以及H5、H6、H9亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计四对引物:NP1,NP2;H5P1,H5P2;H6P1,H6P2;H9P1,H9P2,混合为PCR扩增多重引物MP1,下游引物NP2、H5P2、H6P2,、H9P2混合为逆转录反应多重引物MP2。AIV总RNA在相同反应条件下经MP2逆转录,用MP1进行PCR扩增,AIVH5亚型材料得到205bp,563bp两条扩增带,AIVH6亚型材料得到205bp,233bp两条扩增带,AIVH9亚型材料得到205bp,690bp两条扩增带,都与实验设计相符合,阴性材料没有扩增带。该方法成功实现四对引物进行RT-PCR反应同时检测出AIV,准确诊断H5、H6、H9三种禽流感亚型,检测时间短,特异性强,能及时检测出AIV亚型。     

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感病毒（AIV）夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明．在-10℃下能保存6个月．而且特异性强、敏感性高、重复性好，操作简单．方便．能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒．于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用．取得了良好的效果。     

不同佐剂的重组禽流感病毒灭活痘苗免疫效力试验

禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIv）是禽流行性感冒（简称禽流感,Avian Influenza,AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡,对家禽养殖业影响严重,并可引起人的感染和死亡。通过接种疫苗能有效地控制禽流感的传播,专家们认为,选择优质的疫苗佐剂是新型疫苗走向成功的关键。本试验将同一批次的禽流感（H5N1亚型,Re-6株）抗原分别与国产白油佐剂、法国进口白油佐剂及美国进口白油佐剂3种佐剂制备成重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,Re-6株）,进行物理性状、无菌检验,均符合规定标准。将以上三种疫苗分别免疫21日龄SPF鸡,0．3mL／只,在免疫后的一周、两周、三周、四周,每组抽取10只分别采血,分离血清;18日龄蛋鸡0．3mL／只,在免疫后的一周、两周、三周,每组抽取10只分别采血,分离血清,21d后二免O．5mL／只,二免蛋鸡在免疫后的两周、三周、四周、两个月、三个月每组抽取10只分别采血,分离血清;每次连同对照组5只血清用禽流感病毒H5亚型（Re-6株）抗原测定HI抗体,试验结果表明,美国进1：2白油佐剂制备的重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1亚型,1Ke-6株）免疫鸡群后,HI抗体效价最高,免疫持续—段时间后,效价仍保持较高,同时做安全检验对比试验,各肌肉注射疫苗2．0mL／只,连续观察14d,试验结果表明,以上三种佐剂制备的疫苗均安全无副反应。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制

为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。     

禽流感病毒抗原超滤浓缩重要参数的动态变化

采用世界先进的切向流超滤浓缩技术，对禽流感病毒（H9N2亚型）超滤浓缩成倍体积，测定血凝价HA和半数感染量EID50。结果HA成倍增加，废液HA呈阴性，病毒回收率达100％；受宿主鸡胚系统的影响，EID50与病毒量之间不是简单的直线关系，但病毒的活性不受影响。结果表明，所用超滤系统适用于禽流感病毒抗原的浓缩。     

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质要求和禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程规定的抗原制备方法,研制了一批禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原国家参考品,用于检测禽流感病毒（H5亚型）制品生物效价和血凝抑制操作过程中的校验。该批抗原经过8家单位对其协作标定后对结果进行统计学分析,确定该批禽流感抗原的血凝效价为1：80。另对所研制的禽流感抗原均一性、稳定性、无菌检验、剩余水分测定、真空度测定等各项指标进行检测,结果均符合禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程和国家一级标准物质要求。说明该禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原可以作为国家参考品。     

禽流感病毒鸭源分离株的动物感染试验

选择两株新近分离的具有脑坏死病变特征的番鸭源禽流感病毒(AIV)毒株和两株前期分离的无脑坏死病变的AIV毒株,进行不同动物的感染试验,以期获得病毒在不同动物的致病病变特征和不同动物的易感性比较。结果表明,番鸭源AIV毒株较其他两毒株致病力强,且四毒株对鸡、鹅的致病力比对不同品种的鸭强。     

浅谈禽流感微量红细胞凝集抑制试验

禽流感微量红细胞凝集抑制试验(HI检测),因为其微量、快速、可靠,能够处理大量样品,并能在短时间内报告禽类血样的禽流感抗体滴度水平,因此成为出入境检验检疫部门基层实验室常用的方法。禽流感HI检测结果准确与否,对于出入境检验检疫部门及时掌握禽群的禽流感抗体水平,提高对辖区内注册活禽养殖场的禽流感疫病的监控,保证供港澳活禽顺利出口至关重要。笔者长期从事禽流感HI检测,积累了一些经验,与大家进行交流探讨:1不同效价工作抗原的影响由于禽流感微量红细胞凝集抑制试验的结果判定是以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI…