水稻胚性悬浮细胞系建立的细胞学研究

胚性悬浮细胞是禾谷类作物原生质体培养的理想材料。本文研究了水稻广亲和中粳品系02428胚性悬浮细胞系建立过程中的细胞学动态变化,结果表明:建成的胚性悬浮细胞系(后期悬浮细胞系)和前、中期悬浮细胞系相比较,细胞团内细胞结合紧凑,细胞壁簿,细胞质浓厚,颗粒状内含物丰富,细胞活力强,质膜凹陷较浅,较平整,质膜强度高。本研究结果从细胞学角度初步探讨了水稻胚性悬浮细胞系适应于原生质体培养的机理。     

海岛棉胚性细胞团的原生质体游离和培养

以海岛棉无菌苗下胚轴为外植体诱导产生愈伤组织，挑选胚性愈伤组织建立悬浮培养胚性细胞系。用含有纤维素酶、半纤维素酶和离析酶的混合酶液从新海３号、新海７号和２８２这３个品种的胚性细胞悬浮培养物中游离出原生质体。原生质体用液体浅层法培养仅见再生细胞的１次分裂；用含有低融点琼脂糖的ＫＭ８Ｐ培养基进行琼脂糖珠悬浮法培养，原生质体再生细胞经几次分裂后产生再生细胞团     

水稻香系103成熟胚培养及胚性悬浮细胞系的建立

[目的]为优质稻米种苗培育及种质资源保护提供参考。[方法]以曲阜香稻新品系103的成熟种子为材料,取其成熟胚接种在MS1培养基中诱导胚性愈伤组织,选取松脆性胚性愈伤组织建立悬浮细胞系。[结果]初始愈伤组织呈深黄色、瘤状、质地紧密、生长旺盛、易分化出芽,但难以进行细胞悬浮培养;在MS2培养基中继代培养120d后,愈伤组织呈浅黄色、颗粒状、松脆型胚性愈伤组织;松脆型胚性愈伤组织在悬浮培养基中继代培养2～3次后,不断释放出小细胞团和单细胞,用300目不锈钢网对培养液进行过滤,滤液培养120d可建立起浅黄色、澄清、均一的胚性悬浮细胞系。[结论]建立了分散性好、生长快的水稻胚性悬浮细胞系。     

香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除

[目的]研究香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中非胚性成分的去除方法。[方法]以巴西蕉的花蕾进行诱导培养后,运用孔径在250~500μm的不锈钢筛网进行过滤,并用倒置显微镜对培养物进行实时观测。[结果]运用孔径在250~500μm的不锈钢筛网能够有效去除悬浮细胞系中的褐化坏死组织和分生组织小球,但如果在悬浮细胞系诱导后3 d立即进行去除,则易使之后胚性细胞的增殖变得困难;如果在悬浮细胞系诱导后14 d左右去除,则褐化坏死组织释放的酚类物质很容易损伤并杀死正在增殖的胚性细胞。悬浮细胞系诱发后7 d是一个比较恰当的过滤去除时间点。[结论]在培养的过程中,将悬浮细胞系定期放置在倒置显微镜下进行观察,用移液器能将液泡化的细胞和胚去除。在操作前,需将倒置显微镜放置在超净工作台内,用紫外线长时间照射进行表面灭菌。这样即可以将悬浮细胞系中的非胚性成分过滤去除,又能预防感染。     

野大麦幼根和幼叶悬浮细胞系的原生质体培养

以野大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍｂｒｅｖｉｓｕｂｕｌａｔｕｍ（Ｔｒｉｎ．）Ｌｉｎｋ）的幼根、幼叶为外植体,诱导愈伤组织,建立悬浮细胞系。利用胚性悬浮细胞系进行质壁分离处理再游离原生质体,在不同的光照条件下进行原生质体培养,并由原生质体再生出小细胞团。     

胡杨悬浮细胞系的建立

[目的]建立快速稳定生长的胡杨(Populus euphratica Oliver)细胞悬浮系,为进一步制备胡杨原生质体及林木抗旱耐盐体细胞杂交育种研究奠定基础.[方法]以胡杨胚性愈伤组织为材料,建立胡杨悬浮细胞系,利用正交试验法优化悬浮细胞系的培养条件,在优化培养条件下测定细胞的生长特性.[结果]以胡杨胚性愈伤组织成功地建立了胡杨悬浮细胞系,正交优化试验表明:MB+0.1 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖+300mg/L CH+146 mg/L Gln为最优培养基组合,接种量为30 g(FW)/L时,干重增长速率最高,达 2.44 g/(L·d).胡杨悬浮细胞系生长曲线基本呈S形,生长周期为10 d,其中3～7 d为对数生长期.在一个生长周期内,培养液pH变化趋势是先下降,后上升并逐渐趋于平稳.[结论]在上述优化培养条件下,胡杨悬浮细胞系干重增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

快速建立胚性细胞悬浮系的培养程序初探

为了缩短建立胚性细胞悬浮系的进程，快速获得松脆胚性愈伤组织，以普通小麦，大麦和多花黑麦草为材料，采用能促进植株再生的高浓度铜离子作为毒害筛选因子，以MSD培养基为基本配方，2．5mg/L的2，4－D浓度，不同梯度浓度的铜离子处理愈伤组织。结果表明，0．1mmol/L的Cu^2 对愈伤组织具有较好的筛选作用，能使松脆胚性愈伤组织保存下来，而其它类型愈伤组织褐化死亡，产生的松脆性愈伤组织能很快适应悬浮培养，从而使快速建立胚性细胞悬浮系。用密实细胞体积及其斜面高度评价细胞悬浮系的特点，发现悬浮细胞不仅具有很强的生长势，提高了愈伤对营养缺乏的忍受度，而且保持了高分化潜能的胚性。     

油棕细胞悬浮培养及植株再生技术

【目的】建立油棕胚性体细胞悬浮培养植株再生技术体系,为油棕优株无性系种植材料高效繁育、 细胞生物学研究、生物技术育种研究等提供技术平台和参考。【方法】以源于成龄油棕芯叶的瘤状愈伤组织为 材料,采用不同质量浓度 2,4-D、麦草畏与德夸霉素组合诱导易碎胚性愈伤组织,分析不同激素质量浓度及其 组合对油棕体细胞悬浮系增殖与后续体胚发育的影响。【结果】0.1 mg/L 德夸霉素与一定浓度 2,4-D 或麦草畏 组合,促进胚性愈伤组织形成,0.1 mg/L 德夸霉素与 1 mg/L 麦草畏组合诱导易碎胚性愈伤组织较佳,诱导率为 28.67%;用生长旺盛、质地松散的易碎胚性愈伤组织悬浮培养 21 d 可建立生长状态较均一、分散性好的悬浮 细胞系;0.3 mg/L 德夸霉素与 1 mg/L 麦草畏组合较有利于悬浮细胞系增殖和后续体胚发育;将悬浮细胞系转到 MS+ 谷氨酰胺 100 mg/L + 蔗糖 30g/L 培养基上,于 28（±2）℃、2 000 lx 下进行胚诱导培养,每两周更换新培 养基 1 次,培养 60 d 可获得直径大于 1 mm 的胚,最高每瓶 295 粒;将大于 1 mm 的胚转到固体培养基培养可 获得再生植株。【结论】适当质量浓度德夸霉素与 2,4-D 或麦草畏组合,促进油棕芯叶瘤状愈伤组织形成易碎 胚性愈伤组织;用生长旺盛、质地松散的易碎胚性愈伤组织悬浮培养 21 d 可建立生长状态较均一、分散性好的 悬浮细胞系;初步发现含适当质量浓度德夸霉素与麦草畏液体培养基利于悬浮细胞系增殖和后续体胚发育。     

奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析

试验分别采用组织块贴壁法和消化分离法对奶山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功建立了奶山羊胎儿成纤维细胞系,并对该细胞系进行了形态学观察、生长动力学分析、细胞活力测定、核型分析和微生物检测等多种生物学特性分析.结果表明:成纤维细胞原代培养采用贴块培养时所需时间较长,消化培养有较多死细胞;传代细胞生长情况良好,群体倍增时间(PDT)约为40.4h;生长总体趋势呈"S"型;冻存后活力为92.3%,生长状况与冻存前一致;细胞染色体中二倍体(2 n=60)占主体;细菌、真菌和支原体检测结果均为阴性,细胞系的各项指标均达到ATCC细胞系鉴定标准.     

提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径

香蕉是我国重要的热带亚热带农作物。由于绝大多数食用香蕉是三倍体,不能通过授粉进行遗传改良,转基因技术就变得尤为重要。建立胚性悬浮细胞系是进行香蕉遗传转化的第1步。但是,建立香蕉胚性悬浮细胞系的成功率极低,直到现在多数实验室还不能自己建立香蕉胚性悬浮细胞系。然而,为什么香蕉胚性悬浮细胞系如此难以建立,在香蕉体细胞向胚性细胞转化的过程中,发生了哪些关键事件,如何提高香蕉胚性愈伤诱导的成功率,关于这些问题,目前还未见到报道。文中对近年来香蕉胚性悬浮细胞系建立方面的工作进行综述,针对香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中发生的关键事件进行阐述,对香蕉胚性悬浮细胞系建立困难的原因进行讨论,并提出了若干提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径。     

籼稻原生质体游离培养及再生植株

籼稻(Oryza sativa L.)推广品种“秋桂矮11”成熟种胚在N6+2,4-D培养基上诱导选择胚性愈伤组织,然后转入N6+2,4-D及高浓度脯氨酸的液体培养基悬浮培养。继代近6个月后建成胚性细胞悬浮系.悬浮细胞通过酶解游离产生大量原生质体,经合适渗透压的KpR琼脂糖培养基包埋,在无哺育培养条件下,分裂频率为11.36％,细胞克隆转至N6分化培养基再生出完整绿色小植株,分化频率为9.4％。     

不同理化因子对黄芩悬浮细胞系的影响

采用植物组织培养手段建立了稳定的黄芩细胞悬浮系,通过正交试验筛选出最佳的MS液体培养基为:NH4+/NO3-30/40 mmol/L,Ca2+3 mmol/L,pH值5.4,蔗糖3%.研究了碳源、肌醇、激素、水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对悬浮系中黄苓甙含量的影响.结果表明:复合碳源、较低浓度肌醇对悬浮细胞系中黄芩甙的积累和胞外释放具有促进作用,2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L Kt最有利于悬浮系中黄芩甙的积累;水解酪蛋白和水解乳蛋白对黄芩甙的生成没有促进作用,反而起到了一定的抑制效应.     

Cu2+对红豆杉培养细胞中紫杉醇形成的影响

用Ｃｕ＾２＋对红豆杉（Ｔａｘｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）培养细胞中紫杉醇形成的影响进行了研究。在红豆杉细胞悬浮培养２０ｄ即指数生长期末,每１Ｌ细胞悬浮培养物中加入３０μｍｏｌ ＣｕＣｌ２,Ｃｕ＾２＋促进紫杉醇形成的作用最大。添加ＣｕＣｌ２对红豆杉细胞生长没有明显影响,但引起培养细胞中可溶性蛋白质含量、苯丙氨酸解氮酶活性及培养基ｐＨ值的变化。     

大花红景天悬浮颗粒、悬浮细胞体系的研究

为了探讨大花红景天悬浮体系中红景天苷含量与其颗粒大小、生长状态的关系及可能机制,以大花红景天叶片为外植体,获得愈伤组织,建立悬浮颗粒体系,并分别通过60、80、100和120目细胞筛筛选进而建立悬浮细胞体系。测定了相同培养条件下悬浮颗粒(平均直径约2.5 cm)、悬浮细胞(过80目细胞筛所得)及二者相应培养液中红景天苷的含量。结果表明:经80目细胞筛过滤所得滤液培养一段时间后,可获得大量增殖速度较快、大小均一的悬浮细胞,且这些悬浮细胞中红景天苷含量达0.606 mg/g,约为悬浮颗粒中红景天苷含量0.27 mg/g的2.2倍。而悬浮颗粒和悬浮细胞相应培养液中则均未检测到红景天苷。悬浮体系中细胞与氧气、光照、营养成分的接触程度对培养物中红景天苷的含量有着非常重要的影响。      

水稻悬浮培养细胞在固体和液体培养下的形态发生

藤板５号悬浮培养细胞经适当处理后,在固体分化培养基上形成大量的胚状体。观察到球形胚和胚柄结构,成熟胚状体为圆筒状,芽分生组织为叶原基包裹。胚状体的畸形发育和先熟萌发是导致胚状体苗转换效率低的主要原因。液体培养条件下通过逐步降低２,４－Ｄ浓度（一月内从１．０ｍｇ／１降至０．２ｍ８／１）诱导了体细胞胚胎发生,且胚状体发生数量多,较为同步,细胞分裂也较为旺盛。     

不同激素配比对三岛柴胡悬浮细胞生长发育的影响

[目的]研究不同配比激素对三岛柴胡悬浮细胞生长发育的影响。[方法]采用均匀设计试验方法,对三岛柴胡悬浮细胞培养基的激素进行优化,并以最优激素配方为基础拟合三岛柴胡悬浮细胞培养中鲜重、干重与培养时间的关系曲线。[结果]三岛柴胡悬浮细胞培养的最优激素配方为:N6+0.5 mg/L NAA+0.75 mg/L 6-BA+1.5 mg/L KT;细胞鲜重与培养时间的关系拟合方程为Y=5.703 6X2-41.429X+136.44;细胞干重与培养时间的关系拟合方程为Y=2.021 8X2-22.595X+57.19。[结论]试验为研究三岛柴胡细胞和实现其大规模培养奠定了基础。     

濒危植物四合木（Tetraena mongolica Maxim.）悬浮培养下体细胞胚胎发生

将四合木（Tetraena mongolica Maxim)外植体诱导产生的愈伤组织进行细胞悬浮培养。 通过实验在MS培养基附加2，4－D0．1mg/L,6-BA0.25mg/L，水解酪蛋白500mgL的液体培养基中培养，经120－150r/min摇床振荡分散建立细胞悬浮系，直到体细胞胚胎产生后转至无激素的固体培养基中产生再生植株。结果表明：四合木悬浮培养条件下可以得到胚状体，并形成试管苗。     

Phytochelatins: the principal heavy-metal complexing peptides of higher plants

A set of novel heavy-metal complexing peptides was isolated from plant cell suspension cultures; the structure of the peptides was established as (gamma-glutamic acid-cysteine)n-glycine (n = 3 to 7). These peptides appear upon induction of plant cells with heavy metals and represent the principal metal-binding activities in the cells. The name phytochelatin is proposed for this new class of natural products.     

小麦（Triticum aestivum．L）单细胞培养与植株再生的研究

小麦单细胞培养研究于１９８５～１９９５年进行，以六倍体普通小麦８４—５３的幼穗为外植体．在诱导胚性愈伤组织基础上．经振荡悬浮培养获得单细胞再生植株，建立体细胞无性系，并系统研究再生植株后代体细胞无性系的变异规律和遗传稳定性、体细胞无性系有利变异的选择及其在小麦品种改良中应用的可能性．本文报道有关单细胞培养和再生植株的研究结果．     

新生牛睾丸细胞的分离纯化与冷冻保存

以新生牛作为实验动物,取睾丸进行制样组织学观察,并将睾丸消化成单细胞悬液,对生精上皮细胞进行分离纯化、细胞鉴定及冷冻保存,研究不同分离纯化及冷冻保存方法对睾丸细胞的影响。结果表明,新生牛曲细精管中含有精原干细胞和支持细胞,差速贴壁法能有效分离两种细胞;精原干细胞鉴定,AKP、C-kit、OCT-4均呈阳性;支持细胞鉴定,油红O、波形蛋白均呈阳性。精原干细胞冷冻保存以10%的二甲基亚砜为冷冻剂的效果最好,支持细胞冷冻保存以10%乙二醇和0.1 mmol.L-1海藻糖组合效果最好。